逆転写酵素は、RNA依存性DNAポリメラーゼとも呼ばれ、一本鎖RNAをDNAに転写するDNAポリメラーゼ酵素です。逆転写酵素の性能は、分子診断試薬の最終的な性能に直接影響します。分子診断試薬メーカーの悩みに応えて、Yeasenは逆転写酵素の方向性転換を行いました。逆転写酵素は優れた性能を持ち、お客様に好評を博しています。

1. 逆転写酵素の機能は何ですか?
2. 逆転写酵素の選び方は？
3. Yeasen の逆転写酵素を選ぶ理由は何ですか?
4. 関連製品と実績
5. 関連製品

1. 逆転写酵素の機能は何ですか?

逆転写酵素はRNA依存性DNAポリメラーゼです。テンプレートRNAを転写し、相補DNA（cDNA）を形成します。一本鎖cDNAはDNAポリメラーゼを使用して二本鎖DNAに変換されます。そのため、逆転写酵素は、RT-PCRと呼ばれるポリメラーゼ連鎖反応技術と組み合わせて、mRNA合成のレベルを定量化するためによく使用されます。定量的RT-PCRアッセイは、病気の診断によく使用されます。そのため、逆転写酵素は科学研究と実用化において重要な役割を果たしています。

2. 逆転写酵素の選び方は？

一般的な逆転写酵素は M-MLV と AMV ですが、その中では M-MLV の方が AMV よりも優れています。しかし、従来の RT 酵素には 2 つの活性部位があり、1 つはポリメラーゼ活性を実行し、もう 1 つはリボヌクレアーゼ H 活性を実行します。RNase H は、DNA-RNA ハイブリッド ファミリーの RNA 部分を分解できるエンドヌクレアーゼです。したがって、RNase H 活性を欠く逆転写酵素は cDNA 合成に有益です。さらに、RT の耐熱バージョンを使用すると、非特異的核酸増幅を低下させ、複雑な二次構造の影響を最小限に抑えることができます。

3. Yeasen の逆転写酵素を選ぶ理由は何ですか?

Yeasen は逆転写酵素の方向性変更を行い、RNase H 活性を除去して cDNA 合成能力を向上させました。タンパク質進化技術を使用して逆転写の熱安定性を向上させます。

Yeasen の逆転写酵素は、合成能力が強いだけでなく、耐性能力も強いです。また、Yeasen は品質に対して厳しい要件を持っています。逆転写酵素としては最適な選択です。

4. 関連製品と実績

4.1 65℃の高温に耐える

293T細胞の全RNA 500ngをテンプレートとして、Hifair™ Ⅲ逆転写酵素を使用して42℃～65℃で逆転写を行いました。1μLのcDNAをテンプレートとして取り、TFRC遺伝子（4.4kb）を増幅します。

図1. 42℃～65℃で逆転写を行う

4.2 複雑なテンプレートに対応

55℃の反応温度は、従来のテンプレートと二次構造テンプレートの逆転写を満たすことができ、高GCテンプレートの反応温度は適切に65℃まで上げることができます。

図2. GCリッチテンプレートおよび二次構造テンプレートに適している

4.3 優れた伸長性能

293T細胞の全RNA 500ngをテンプレートとして、オリゴ(dT)をプライマーとして、Hifair™ Ⅲ逆転写酵素を使用してcDNAを合成しました。1μLのcDNAをテンプレートとして取り、DY1C1N1遺伝子の5'の500bp(19.9kb)を増幅しました。結果は、Hifair™ Ⅲ逆転写酵素が19.8kbまでのcDNAを合成できることを示しました。

図3. 最大19.8kbのcDNAを合成できる

4.4 高速合成

293T細胞のRNAをテンプレートとして、マニュアルの標準手順に従って逆転写を行い、逆転写時間をそれぞれ5、10、15、30、45、60分に設定しました。Hifair™ III逆転写酵素は、5分以内に6kbのcDNAを合成でき、その特異性と収量はVブランドよりも優れています。

図4. 6kb cDNAは5分以内に合成できる

4.5 広い線形範囲

293T細胞の全RNA 5pg～5μgをテンプレートとして、Hifair™ III逆転写酵素を用いてcDNAを合成しました。1μLのcDNAをテンプレートとして4つの遺伝子に対してqPCRを行った結果、増幅効率はすべて98%～100.10%でした。幅広い直線範囲のテンプレートでcDNAを効率的に合成できることを示しています。

図5. 幅広いテンプレート範囲でcDNAを効率的に合成できる

4.6 厳格な品質管理

Yeasenの逆酵素の安定した性能を確保するために、Yeasenは製造工程における要求を厳格に実施し、製造工程を安定させ、バッチ安定性を確保しています。同時に、品質検査を強化し、エキソヌクレアーゼ、ニッカーゼ、RNaseなどの残留物を検出し、残留物がないことを確認し、下流の実験に影響を与えないようにしています。

図6.残留物検出

5. 関連製品

Yeasenが提供する製品は以下の通りです。

表1. 関連製品

読書について

逆転写酵素選択のガイドライン

YEASEN UDG:PCR反応における「防汚の専門家」