LAMP における Bst DNA ポリメラーゼの役割は何ですか?
等温核酸増幅技術は、増幅原理の違いにより、多くの種類に分けられます。現在、最も一般的で広く使用されているのは、2000年に日本の学者、納富らが開発したループ媒介等温増幅技術（LAMP）です。Bst DNAポリメラーゼは、等温増幅技術の核となる酵素です。LAMPにおけるBst DNAポリメラーゼの機能と性能は何ですか？
1. Bst DNAポリメラーゼはLAMP法でどのような役割を果たすのでしょうか？
2. 凍結乾燥 Bst Plus DNA ポリメラーゼとは何ですか?
3.凍結乾燥Bst Plus DNAポリメラーゼ（14405ES）の製品の特徴は何ですか？
4. 凍結乾燥Bst Plus DNAポリメラーゼ（14405ES）の製品性能はどのようなものですか？
5. 関連製品
6. 読書について
1. Bst DNAポリメラーゼはLAMP法でどのような役割を果たすのでしょうか？
LAMP法の技術的特徴は、標的遺伝子の6つの領域に対して4つのプライマーを設計し、60〜65℃の一定温度条件下でBST DNAポリメラーゼを使用して増幅反応を行い、15〜60分以内に109〜1010倍の増幅を達成することです。 Bst DNAポリメラーゼは、強力な熱安定性、鎖置換活性、ポリメラーゼ活性を備えています。 PCR熱変性増幅サイクルなしで一定温度条件下で迅速、効率的、特異的な増幅テンプレートとなり、1時間以内にLAMP実験全体を完了できます。
2. 凍結乾燥 Bst Plus DNA ポリメラーゼとは何ですか?
凍結乾燥Bst Plus DNAポリメラーゼは、グリセロールフリーBst Plus DNAポリメラーゼを凍結するために使用され、グリセロールフリーBst酵素の不安定性の問題を解決します。同時に、この製品は強力な5 '- 3' DNAポリメラーゼ活性、鎖置換活性、およびdUTP耐性を備えており、汚染防止等温増幅反応に適しており、顧客が凍結乾燥製品の製造に使用するのに便利です。
図1: 14405ES-凍結乾燥Bst Plus DNAポリメラーゼ（60 U/μL、グリセロールフリー）
3. 凍結乾燥Bst Plus DNAポリメラーゼ（14405ES）の製品の特徴は何ですか？
- 凍結乾燥に適したグリセロールフリー酵素
- コスト削減のため常温輸送
- 強力な鎖置換活性、感度と安定性
- 迅速な再溶解と便利な操作
4. 凍結乾燥Bst Plus DNAポリメラーゼ（14405ES）の製品性能はどのようなものですか？
4.1 凍結乾燥粉末の形状：T0時点と比較して、45℃ - 15日間の凍結乾燥後も粉末の形状は変化しません。
図2. 凍結乾燥粉末の形状
4.2 安定性
熱加速後の凍結乾燥粉末の性能は液体試薬の性能と一貫しており、凍結乾燥粉末（14405ES）は
汎用性が高く、蛍光染料法やpH指示薬法にも使用できます。
4.2.1 蛍光染料法——安定性
RT-LAMP蛍光色素増幅システムでは、グリセロールフリーBst凍結乾燥粉末のT0、45℃-7日間および45℃-15日間の熱加速後の性能は、グリセロールフリーBst酵素の液体バージョンの性能と一致しており、NTCはピークに達しません。
実験条件:
| システム | RT-LAMP蛍光色素法 | 楽器 | Q5、SLAN |
| テンプレート | COVID-19 RNA | 集中 | 50部/T |
| 手順 | 37℃、2分。65℃、60分 |
注: 対照群は、同じ濃度のグリセロール Bst 酵素を含まない液体バージョンです。
図3. 安定性の結果
4.2.2 蛍光色素法——RT-LAMPシステムの凍結乾燥後のBst酵素の性能
RT-LAMP蛍光色素増幅システムでは、RT-LAMPシステムで45℃-15日間凍結乾燥したグリセロールフリーBst凍結乾燥粉末の製品性能は、グリセロールフリーBst酵素の液体バージョンの製品性能と一致していました。凍結乾燥後の対照群とRT-LAMPシステムにおける製品の検出率は、それぞれ100％（16/16）と94％（15/16）でした。
実験条件:
| システム | RT-LAMP蛍光色素法 | 楽器 | Q5、SLAN |
| テンプレート | COVID-19 RNA | 集中 | 50部/T |
| 手順 | 37℃、2分。65℃、60分 |
注: 対照群は、同じ濃度のグリセロール Bst 酵素を含まない液体バージョンです。
図4. RT-LAMPシステムの凍結乾燥後のBst酵素の性能
4.2.3 PH指示薬法 ——安定性
RT-LAMP pH指示薬増幅システムでは、T0時間と比較して、45℃-15日間の熱加速後のBst凍結乾燥粉末の検出率は88％（7/8）でした。
実験条件:
| システム | RT-LAMP PH指示薬法 | テンプレート | COVID-19 RNA |
| 手順 | 37℃、2分。65℃、60分 | 集中 | 50部/T |
注: 対照群は、同じ濃度のグリセロール Bst 酵素を含まない液体バージョンです。
図5. 安定性の結果
4.2.4 PH指示薬法——再凍結安定性
RT-LAMP pH指示薬増幅システムでは、45℃-7日間の再凍結後、性能は安定しています。対照群は液体Bst酵素です。対照群と比較して、熱加速後の14405ESの検出率は94％（30/32）です。
実験条件:
| システム | RT-LAMP PH指示薬法 | テンプレート | COVID-19 RNA |
| 手順 | 37℃、2分。65℃、60分 | 集中 | 50部/T |
注: 対照群は、同じ濃度のグリセロール Bst 酵素を含まない液体バージョンです。
図6. 再凍結安定性の結果
4.3 特異性
RT-LAMP蛍光色素増幅システムでは、48ウェルNTCはピークを示さず、14405ESの特異性は100%でした。
実験条件:
| システム | RT-LAMP蛍光色素法 | 楽器 | Q5、SLAN |
| テンプレート | COVID-19 RNA | 集中 | 50部/T |
| 手順 | 37℃、2分。65℃、60分 |
注: 対照群は、同じ濃度のグリセロール Bst 酵素を含まない液体バージョンです。
図7. 具体的な結果
5. 関連製品
表1. 関連製品
| 製品の位置付け | 製品名 | 猫＃ |
| 高感度Bst酵素 | Hieff™ Bst Plus DNAポリメラーゼ（40 U/μL） | 14402ES |
| Hieff™ Bst Plus DNAポリメラーゼ（2000 U/μL）（お問い合わせ） | 14403ES | |
| 凍結乾燥 Bst Plus DNA ポリメラーゼ (60 U/μL、グリセロールフリー) | 14405ES | |
| 蛍光染料法 | RT-LAMP 色素アッセイキット (UDG plus) | 13762ES |
| PH指示薬法 | RT-LAMP pH 感受性色素発色バージョン凍結乾燥可能試薬 (お問い合わせ) | 13920ES |
| COVID-19（新型コロナウイルス感染症 | RT-LAMP COVID 19 (pH指示薬法) 凍結乾燥ビーズ (お問い合わせ) | 13919ES |
| RT-LAMP COVID-19プライマーマスターミックス（N）（お問い合わせ） | 13995ES | |
| RT-Lampに適した逆転写酵素 | Hifair™ Ⅲ 逆転写酵素 (お問い合わせ) | 11111ES |
| Hifair™ Ⅲ 逆転写酵素、グリセロールフリー (お問い合わせ) | 11297ES | |
| マウスRNase阻害剤 | マウスRNase阻害剤（40 U/μL） | 10603ES |
| マウスRNase阻害剤（200 U/μL、グリセロールフリー） | 10703ES | |
| 熱に弱いUDG | ウラシル DNA グリコシラーゼ (UDG/UNG)、熱不安定、1 U/μL (問い合わせ) | 10303ES |
| 高純度dUTP | dUTP（100 mM溶液） | 10128ES |
6. 読書について
適切な主要酵素原料を選択して、LAMP /RT-LAMP の感度と速度を高めます。
逆転写酵素選択のガイドライン
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