アフリカ豚コレラ（ASF）は、アフリカ豚コレラウイルス（ASFV）が家畜の豚やイノシシに感染することで起こる、急性で重篤かつ伝染性の高い感染症です。罹患率と死亡率は100％に達することもあり、世界の養豚産業に深刻な危険をもたらし、計り知れない経済的損失を引き起こします。国際獣疫事務局（OIE）は、ASFを報告義務のある動物疾病としてリストしています。

現在、アフリカ豚コレラに対するワクチンや効果的な治療法はありません。アフリカ豚コレラの迅速かつ正確な診断は、検査室での診断方法によって病気の蔓延を防ぐために不可欠です。OIE は、ASF の日常的な診断の主な手段として qPCR を推奨しています。

Yeasen は、IVD 原材料の研究開発で豊富な経験を持つメーカーです。アフリカ豚コレラに直面して、yeasen は積極的に対応し、アフリカ豚コレラウイルスの抽出から検出までの 3 つのプロセス全体のソリューションを顧客と協力して開発しました。では、3 つのソリューションとは何でしょうか。また、これらのソリューションの用途は何でしょうか。続きをお読みください...

図1. Yeasenアフリカ豚コレラ検出ソリューション

ソリューションI: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) （お問い合わせ）

製品の特徴

👍UDGの汚染防止システムにより、エアロゾル汚染のリスクを効果的に防止します

👍室温でのプレミックスPCR溶液（マスターミックス+プライマー+プローブ）の長期安定性により、検出の難しさが大幅に軽減されます。

👍高い増幅効率と優れた再現性

👍マルチプラットフォームとマルチシステムに適しています

ケースショー

👉プレミックスPCR溶液の長期安定性
Cat#13171は、ASFプラスミドシステムの増幅において、37℃で7日間放置し、凍結融解を15回繰り返すことができるプレミックスPCR溶液を構成するために使用されました。結果は、PCR溶液のCt値と感度は37℃で7日間放置した後も有意に変化せず、凍結融解を15回繰り返した後もCt値に大きな変化がないことを示しました。

図2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(問い合わせ) は、ASFプラスミドシステムの増幅において長期安定性を備えたプレミックスPCR溶液に使用されています。2A-0日目と7日目の37℃でのCt値2B-0日目と7日目の37℃での感度2C-15回の凍結融解後の安定性

👉安定性と再現性のある試薬
Cat#13171 の 4 つの異なるバッチを選択し、ASFV プラスミド システム増幅実験を 20 回繰り返しました。Ct 値に大きな差はなく、CV は 1% 未満でした。

図3. Yeasen Cat#13171の再現性テスト

👉マルチプラットフォーム、マルチシステムに対応
Yeasen Cat#13171 は、それぞれ Bio-Rad CFX96、ABI Q5、および Slan プラットフォームでアフリカ豚コレラ ASFV/ACT デュアルプラスミドの増幅に使用されました。Yeasen Cat#13171 はさまざまなタイプの機器に適しており、データは信頼性が高く安定していることがわかります。

図4. Bio-Rad CFX96 リアルタイムPCRシステム

図5. ABI Q5 リアルタイムPCRシステム

図6. SlanリアルタイムPCRシステム

ソリューション II:ユニバーサル TaqMan マルチプレックス qPCR マスターミックス

Yeasen の Universal TaqMan マルチプレックス qPCR マスター ミックス (Cat#11211) は、抗体修飾 Hot-Start Taq DNA ポリメラーゼと適合したマルチプレックス バッファーを使用して、低濃度テンプレートを効率的に増幅するように最適化されています。この製品は、1 つのチューブで最大 4 プレックス PCR 反応をサポートし、ジェノタイピングおよびマルチプレックス qPCR 分析に最適です。

製品の特徴

👍血液不純物に対する耐性が強く、Yeasen核酸抽出試薬Cat#13720核酸放出試薬V2と一緒に使用でき、直接qPCRに最適です。
👍反応あたり3コピーの超高感度で、検出精度が大幅に向上
👍室温でのプレミックスPCR溶液（マスターミックス+プライマー+プローブ）の長期安定性により、検出の難しさが大幅に軽減されます。

ケースショー

👉血液不純物に対する強い耐性
Yeasen Cat#11211 は、他のブランドの類似製品と比較して、血液サンプル中の阻害剤に対する耐性が高くなっています。結果によると、Yeasen Cat#11211 は EDTA とクエン酸ナトリウムに対する耐性が高く、0.5% 全血に耐えることができます。

図 7. Cat#11211 Universal TaqMan マルチプレックス qPCR マスター ミックスとさまざまなブランドのマスター ミックスを、それぞれ 3 mM EDTA (3A)、6 mM クエン酸ナトリウム (3B)、0.5% 血液 (3C) を添加した ASF qPCR 溶液に使用します。

👉反応あたり3コピーまでの超高感度

異なるブランドの製品に基づいて、20 回の反復による ASFV プラスミドの増幅が実行されました。実験の結果、Yeasen 製品の検出率が高いことがわかりました。

図8. 異なるブランドの類似製品間の検出率の比較（最終システムでは3つのコピー）

👉長期安定性、室温で7日間安定

ASFV/ACTデュアルプラスミドシステムのPCR溶液は、4℃、25℃、37℃で7日後も安定した性能を維持できます。Ct値と蛍光値に大きな変化がないことがわかります。

図9.PCR溶液の安定性

ソリューションIII: 等温増幅

Yeasen の製品は、ASF 検出をより迅速かつ効率的に実行するための等温増幅技術をサポートしています。カタログ番号 14402 Hieff™ Bst Plus DNA ポリメラーゼ (40 U/μL)は、5'-3' エキソヌクレアーゼ活性を欠く好熱性 Geobacillus sp DNA ポリメラーゼ I から派生したものです。この製品は、5'-3' DNA ポリメラーゼ活性、鎖置換活性、および dUTP 耐性がより強力で、LAMP、CPA などの汚染防止等温増幅反応に適しています。

製品の特徴

👍高い増幅効率

👍高収益増幅

👍dUTP耐性、Cat#10303ウラシルDNAグリコシラーゼ（UDG / UNG）（問い合わせ）、熱不安定、1 U /μLと組み合わせて使用​​​​して、エアロゾル汚染のリスクを防止できます。

ケースショー

👉輸入ブランドN*製品の優れた代替品

増幅プロセスは、それぞれ Yeasen 社と N* 社の Bst DNA ポリメラーゼを使用して実行されました。異なるブランド間で Ct 値と蛍光強度に大きな違いはありませんでした。

図10. 異なるブランドの増幅曲線

商品の注文