NGS ライブラリ定量化の本質は、核酸 (DNA または RNA) の定量化です。NGS ライブラリ定量化の正確な分析は、高品質のシーケンス データを取得するために重要です。NGS ライブラリの定量濃度が高い場合、クラスタリングが不十分なため、シーケンス データの収量が低くなる可能性があります。ただし、定量濃度が低いと、クラスター間の信号干渉が発生し、低品質のデータが生成され、シーケンスの失敗につながる可能性があります。さらに、シーケンサーのシーケンス フラックスの増加に伴い、複数の NGS ライブラリを組み合わせてシーケンスすることがよくあります。シーケンス データのサイズの要件に応じて、定量結果に基づいて対応するモル量の NGS ライブラリを混合し、各サンプル データのサイズの出力を安定させます。したがって、ライブラリの正確な NGS ライブラリ定量化が重要です。

現在、NGSライブラリの定量化には、紫外線吸収法と蛍光染料法という2つの主な方法があります。NanoDropは紫外線吸収の原理に基づいて設計されたDNA定量化装置であり、Qubitは蛍光染料の原理に基づいて開発されたDNA定量化装置です。これら2つの方法の定量精度とコストは異なります。ここでは主に量子ビット法を推奨します。では、なぜ量子ビットをお勧めするのでしょうか？Yeasenが提供するQubit製品の特徴は何ですか？引き続きお読みください...

1. Qubit をお勧めする理由は何ですか?

2. Yeasen が提供する Qubit 製品の特徴は何ですか?

• Qubit はどのように機能しますか?
• Yeasenが提供する人気商品
• 製品の特徴

3. 異なるサンプルに対して Qubit を選択するにはどうすればよいでしょうか?

1. Qubit をお勧めする理由は何ですか?

Qubit が Nanodrop より優れていることは間違いありません。では、なぜ Qubit が Nanodrop より優れているのでしょうか? Qubit と Nanodrop の違いは何でしょうか? まず、前述のように、DNA 定量化の原理が異なります。NanoDrop は紫外線吸収に基づいて設計されています。紫外線吸収法の原理は、核酸成分にプリン塩基とピリミジン塩基があり、これらの塩基は共役二重結合を持っていることです。UV 領域では 250 ～ 280 nm で強い光吸収があり、最大吸収値は約 260nm です。したがって、核酸の UV 吸収は濃度定量化に使用できます。NanoDrop は操作が簡単で迅速ですが、DNA、RNA、分解された核酸、遊離ヌクレオチド、その他の不純物を区別できません。正確なライブラリ定量データを取得するのには適していません。ただし、Qubit 定量化は、正確な NGS ライブラリ定量化、特に DNA 定量化に最適です。では、Qubit DNA 定量化の特徴は何でしょうか?次の表をご覧ください。

2. Yeasen が提供する Qubit 製品の特徴は何ですか?

Yeasen が提供する Qubit 製品の特徴を紹介する前に、その仕組みを理解しておきましょう。

2.1 Qubit はどのように機能しますか?

Qubit の原理は、蛍光染料を使用して DNA 分子に結合し、蛍光を発し、その蛍光強度を測定して核酸の濃度を求めることです。蛍光染料は DNA 二本鎖に結合した後にのみ蛍光を発し、その結果生じる蛍光は DNA 濃度に比例します。

2.2 Yeasenが提供する人気商品

の Qubit®用dsDNA HSアッセイキット（カタログ番号：12642ES）1個。 Qubit® キット用 dsDNA HS アッセイ キット (カタログ番号: 12640ES) は、すぐに使用できる Qubit プレミックス ソリューションで、元のキット内の濃縮染料を作業溶液に事前希釈します。操作時には、作業液をテストするサンプルと混合するだけで、Qubit® 蛍光計でサンプル濃度を測定できるため、より便利です。

2.3 製品の特徴

シンプルで操作が簡単：すぐに使用できるプレミックス液体、作業液を準備する必要がなく、操作が簡単で、定量的に時間を節約できます。

図1. Qubit用dsDNA HSアッセイキットのプロセス

超高感度: 64 倍勾配希釈による正確な定量、0.2 ～ 100 ng dsDNA は良好な直線関係にあります。

超特異性: dsDNA を特異的に検出し、従来の汚染物質に対する優れた耐性を備えています。

染料の結合速度が速い: 2 分以内に飽和に達するため、正確な定量結果を迅速に読み取るために待つ必要がありません。

高い安定性: 蛍光信号は 3 時間持続し、室温で 20 日経過しても定量精度は影響を受けません。

図1. 製品安定性試験。結果は、室温で2週間保管した後も安定していることを示しています（測定値と理論値の偏差は10％未満でした）。

注: 2 種類の濃度の dsDNA を選択し、4℃ で保存した Thermo#Q33230、4℃ で保存した Yeasen#12642、室温 (約 25℃) で保存した Yeasen#12642 を使用して、異なる時間における濃度値を測定し、各測定値と最初の測定値 (0d と表示) 間の偏差率を計算しました。

図2. 製品安定性試験。有効期間内の試験結果の安定性、関連性の高さ

3. さまざまなサンプルに対して Qubit を選択するにはどうすればよいですか?

Qubit、高速定量化！Qubit をライブラリ定量化に使用すると、多くの利点があります。検出プロセスは高速かつ効果的です。単一のサンプルに対して数秒以内にシーケンス結果が得られ、濃度を直接出力できるため、非常に直感的です。同時に、バッチサンプル定量化用のほとんどの酵素ラベル機器と互換性があり、従来のライブラリ定量化と dsDNA 定量化の第一選択肢です。