核酸定量は分子生物学における最も基本的な実験の 1 つであり、下流の実験の結果に直接影響します。核酸定量の精度は非常に重要です。現在、NGS ライブラリ定量には、紫外線吸収法と蛍光色素法の 2 つの主な方法があります。

紫外線吸収法では、分光光度計を使用して DNA と RNA の 260 nm での吸光度を測定して定量します。また、OD260/OD280 比を計算して核酸の純度を推定します。ただし、検出された値は、遊離ヌクレオチド、塩、有機化合物などの他の汚染物質による干渉の影響を非常に受けやすくなります。

Qubit 蛍光定量法では、二本鎖 DNA、一本鎖 DNA、RNA、またはタンパク質に特異的に結合する蛍光色素を使用します。特定の波長の光源によって励起されると、色素は蛍光を発しますが、サンプル内に存在する可能性のある他の不純物分子の影響を受けません。蛍光強度は、サンプル内のターゲット分子の濃度に比例します。

表1. 主流の核酸定量法の比較

ターゲット	UV Abs(ナノドロップ)	キュービットDNA HS	キュービットDNABR	量子ビットRNA	量子ビットssDNA
核酸の種類	DNA、RNA	二本鎖DNA	二本鎖DNA	RNA	ssDNA、オリゴ
サンプル濃度（ng/μL）	2 ng/μL～15 μg/μL	10 pg/µL～100 ng/µL	0.1 ng/µL～1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 ng/µl	50 pg/μL～200 ng/μL
アドバンテージ	定量限界の上昇	優れた特異性	広範囲の定量化	RNAに対する高い選択性	忍容性良好
制限事項	特異性が低い	使用中は光を避けてください	使用中は光を避けてください	使用中は光を避けてください	特異性が低く、dsDNAにも結合する

UV 吸光度と Qubit 蛍光定量法はそれぞれに利点があり、相互に補完することができます。日常的な核酸サンプルの濃度、純度、汚染物質の有無を判断するための予備定量には、吸光度定量法を選択できます。Qubit定量法は、低濃度の貴重なサンプルや、次世代シーケンシングやリアルタイム定量 PCR などの下流実験に必要な正確な定量に適しています。

Yeasen は、発売以来広く評価されている Qubit 定量化製品をいくつか発売しました。Qubit ^®用 dsDNA HS アッセイキット (カタログ番号 12640)、すぐに使用できる Qubit ^®用 1× dsDNA HS アッセイキット (カタログ番号 12642)、Qubit ^®用 ssDNA アッセイキット (カタログ番号 12645)、および dsDNA BR アッセイキット (カタログ番号 12643) です。

ソリューション1 dsDNA HS高感度定量

すぐに使える dsDNA 定量プレミックス - Qubit ^®用 1× dsDNA HS アッセイキット

^{操作が簡単: すぐに使用できるプレミックスなので、事前混合は不要です。}

^{高感度: 検出可能な濃度は 50 pg/μL まで。}

^{優れた安定性：蛍光信号は 3 時間持続し、室温で 20 日間保存しても定量の精度に影響はありません。}

^{A.優れた安定性：室温で2週間保管しても安定性を維持します（測定値は理論値から10％未満です）。}

表2. 4℃および室温でのさまざまなサンプルの安定性テストと競合他社との比較

定量試薬	測定されたλDNA濃度（ng/μL）
	0日		1日		3d	7日			10日		14日
気温* 4℃	0.51		0.496		0.524	0.534			0.495		0.499
イェーセン 4℃	0.51		0.508		0.513	0.475			0.48		0.495
イェーセン室温保管	0.51		0.517		0.506	0.486			0.506		0.523
定量試薬	子牛gDNAの測定濃度（ng/μL）
	0日	1日		3d			7日	10日		14日
気温* 4℃	55.3	53.5		55.40			57.9	55.8		58
イェーセン 4℃	59.4	55.4		57.8			56.1	56.3		59.8
イェーセン室温保管	59	55.7		61.3			58	58.7		56.1

B.高感度、バッチ間の安定性が良好

表3. 異なるバッチの安定性試験

バッチ	サンプル	Ｌ*			イェーセン			エラー
バッチ	サンプル	濃度1（ng/μL）	濃度2（ng/μL）	平均（ng/μL）	濃度1（ng/μL）	濃度2（ng/μL）	平均（ng/μL）	エラー
D9801060	λDNA	0.3160	0.3250	0.3205	0.320	0.320	0.320	0.16%
D8801050		0.3310	0.3320	0.3315	0.319	0.306	0.3125	5.73%
D7813110		0.345	0.358	0.352	0.334	0.329	0.332	-6.03%

ソリューション 2 dsDNA BR 広範囲定量

広範囲のdsDNA定量 - dsDNA BRアッセイキット

高感度: 検出可能な濃度は 50 pg/μL まで。

優れた直線性: 2〜1000 ng の範囲内で良好な直線性。

汚染物質に対する強い耐性: 一般的な汚染物質に耐えることができます。

表4. 競合他社と比較した安定性と汚染物質に対する耐性

イェーセン BR						T* BR
標準	RFU1	RFU2	平均	エラー		標準	RFU1	RFU2	平均	エラー
S1	159.63	160.71	160.17	1%		S1	216.17	211.56	213.865	-2%
シーズン2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		シーズン2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
計測						計測
汚染物質	10μLサンプル中の濃度	集中力1	集中力2	平均	テスト/管理対象	汚染物質	10μLサンプル中の濃度	集中力1	集中力2	平均	テスト/管理対象
コントロール（H ₂ O）	/	49	48.6	48.8	0.0%	コントロール（H ₂ O）	/	49.8	48	48.9	0.0%
BSSA	1mg/mL	51.8	52	51.9	6.4%	BSSA	1mg/mL	54	51.2	52.6	7.6%
エタノール	20%	44.6	44	44.3	-9.2%	エタノール	20%	44.8	43.4	44.1	-9.8%
クロロホルム	4.00%	49.0	49.8	49.4	1.2%	クロロホルム	4.00%	50.0	47	48.5	-0.8%
安全データシート	0.2%	46.6	45.8	46.2	-5.3%	安全データシート	0.2%	53.2	51.6	52.4	7.2%
トリション-X100	0.20%	41.6	40.6	41.1	-15.8%	トリション-X100	0.20%	53	51	52.0	6.3%
dNTP	2mM	44.2	45	44.6	-8.6%	dNTP	2mM	47.8	46.4	47.1	-3.7%

ソリューション3 ssDNA定量

ssDNA定量化に最適な選択肢 - ^Qubit®用高コストパフォーマンスssDNAアッセイキット

^{高感度: 検出可能な濃度は 50 pg/μL まで。}
^{優れた直線性: 0～200 ng の範囲内で良好な直線性。}
^{安定した信号: 優れた染料とアップグレードされた最適化されたバッファーを組み合わせることで、室温で安定した蛍光強度を維持でき、塩、遊離ヌクレオチド、溶媒、洗剤、タンパク質などの一般的な汚染環境でも非常に適用性が高く、正確な定量を保証します。}
^{優れた安定性: 4°C または 25°C で 6 か月間処理した後でもパフォーマンスに大きな変化はありません。}
^{幅広い応用範囲：操作プロセスが簡単で、オリゴヌクレオチド、プライマー、変性 DNA、一本鎖環状 DNA などを迅速に定量できます。}

A. 優れた再現性: さまざまな Qubit 機器での定量化、 Yeasenの Cat#12645 の複数のバッチを使用したさまざまな種類のサンプルのテスト。0 ～ 200 ng の範囲内で、さまざまな Qubit 機器からの測定で優れた再現性。

図1. 異なる量子ビット機器における異なるバッチの安定性テスト

B. 優れた安定性: 標準および 1× 作業溶液安定性テスト、37°C で 10 日間、蛍光信号は安定しています。25°C で 6 か月間保存した長期安定性モニタリングでは、製品の性能は 4°C 制御と一致しています。

表5. 標準およびサンプル安定性試験

4℃で1ヶ月保存				4℃で2ヶ月保存			25℃で2ヶ月保存			25℃で6ヶ月保存
標準	価値1	価値2	平均	価値1	価値2	平均	価値1	価値2	平均	価値1	価値2	平均
標準#1	116.06	14.76 14.76	115.41	124.31	125.04	124.68	112.08	110.24	111.16	131.91	135.41	133.66
標準#2	18160.57	18348.57	18254.60	21006.58	20974.62	20990.60	19668.22	19078.36	19373.30	22421.78	22205.65	22313.72
サンプル	濃度1	濃度2	平均	濃度1	濃度2	平均	濃度1	濃度2	平均	濃度1	濃度2	平均
サンプル1	11.70	12.20	11.95	13.30	13.00	13.15	12.70	11.70	12.20	12.90	12.40	12.65
サンプル2	18.80	18.80	18.80	19.00	18.60	18.80	19.20	18.00	18.60	17.90	18.40	18.15
サンプル3	1.43	1.48	1.46	1.38	1.34	1.36	1.40	1.36	1.38	1.30	1.24	1.27
サンプル4	5.28	5.12	5.20	5.76	5.78	5.77	6.10	5.72	5.91	5.62	5.72	5.67
サンプル5	2.20	2.16	2.18	2.02	2.00	2.01	2.10	2.14	2.12	1.95	1.94	1.95
サンプル6	1.64	1.61	1.63	1.50	1.47	1.49	1.68	1.67	1.68	1.45	1.42	1.44

Yeasenの定量製品は、工場を出荷する前に厳格な品質管理基準を通過し、安定した正確な定量が保証されているため、安心して定量できます。

Yeasen NGS 定量製品選択ガイド

製品カテゴリー	製品	カタログ番号	定量範囲
dsDNA HS	^Qubit®用dsDNA HSアッセイキット	12640ES	0.2-100 ng； 10 pg/µL～100 ng/µL
	ピコグリーンdsDNA定量試薬	12641ES
	1×dsDNA HSアッセイキット	12642ES
dsDNABR	dsDNA BRアッセイキット	12643ES	2～1000ng；0.1ng/μL～1000ng/μL
ssDNA量子ビット	^Qubit®用 ssDNA アッセイキット	12645ES	1～200ng； 50 pg/μL～200 ng/μL

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