PCR 결과에서 가장 흔한 거짓 양성 결과의 원인인 작업 환경에서의 에어로졸 오염: 미국 과학자 린달이 대장균과 고초균에서 우라실 DNA 글리코실라제(UDG)를 선구적으로 발견한 것과 dUTP를 함유한 UDG 효소를 사용하여 PCR 오염 방지 시스템을 구축한 것.
상업적으로 이용 가능한 UDG 효소는 주로 두 가지 유형으로 구성됩니다. Escherichia coli 및 Bacillus subtilis에서 유래한 일반 UDG 효소와 저온성 해양 박테리아에서 유래한 열에 불안정한 UDG 효소입니다. 일반 UDG 효소는 내열성이 더 뛰어나 95°C에서 10분간 처리한 후에도 소량의 우라실-DNA 글리코실라제 활성을 유지하여 dU를 함유한 표적 증폭 산물이 분해될 수 있습니다. 또한 분자 효소의 재조합 발현을 위해 조작된 박테리아 균주(예: E. coli)를 사용하기 때문에 이러한 효소에는 일정량의 잔류 숙주 게놈 DNA가 있습니다. 제조 환경과 인간 출처의 영향과 결합하여 분자 효소 제품은 DNA 오염에 매우 취약합니다. 병원균을 검출하는 동안 오염된 DNA는 낮은 농도의 표적 핵산을 가리거나 이와 함께 검출되어 결과 해석에 영향을 미칠 수 있습니다.
Yeasen UCF.ME 우라실 DNA 글리코실라제(UDG/UNG), 열에 불안정함
설명
저온성 해양 박테리아에서 유래한 UCF.ME 우라실 DNA 글리코실라제(UDG/UNG), 열 불안정성, 1 U/μL(Cat#14466ES)는 UCF.ME로 알려진 초저잔류 열 불안정성 UDG 효소입니다. 이 제품을 사용하면 불활성화 후 기존 UDG 효소의 잔류 활성이 실온에서 dU를 포함하는 증폭 산물을 분해하는 것을 방지할 수 있습니다. 또한 분자 효소에 존재하는 배경 박테리아가 PCR 결과에서 거짓 양성을 유발하는 것을 방지합니다. 따라서 UCF.ME® 초저잔류 열 불안정성 UDG 효소의 도입은 감염성 병원체를 정확하게 식별하고 감염 및 감염성 질환의 임상적 진단을 돕는 데 중요합니다.
제품의 장점
- UCF.ME의 매우 낮은 잔류물—대장균 게놈 DNA 잔류물 <0.1 사본/U;
- 낮은 뉴클레아제 잔류물 - 잔류 엑소뉴클레아제, 틈내기 효소 또는 RNase 없음
- 강력한 소화 능력 - 0.05 U/T는 105개 사본/T dU-DNA 제품을 소화할 수 있습니다.
- 우수한 열 안정성 - 50°C에서 10분, 55°C에서 5분, 95°C에서 5분 동안 어떠한 조건에서도 완전한 불활성화
- RT-qPCR 반응 시스템과 호환 가능 - 높은 입력 수준(2U/20μL 반응 시스템)에서도 검출 시스템에 영향을 미치지 않습니다.
(1)단백질 순도≥95%
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그림 1. 단백질 순도(SDS-PAGE) 검출 결과
(2)잔류성 낮은 핵산분해효소: 잔류성 엑소뉴클레아제, 닉킹 효소, RNase가 없음
그림 2. 핵산분해효소 잔류물 검사 결과
(3)E. coli 게놈 DNA 잔류물< 0.1 copy/ U, 잔류물 수준은 기존 시약보다 현저히 낮았습니다.
그림 3. 대장균 게놈 DNA 잔류물 검사 결과
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그림 4. 총 0.05 U의 UDG 효소는 10^5개 사본/T dU-DNA 생성물을 완전히 소화할 수 있습니다.
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그림 5. 50℃,10분;55℃,5분;55℃,10분;95℃,5분의 열 불활성화 처리 후, 14466ES는 소화 능력을 상실했습니다.
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그림 6. RT-qPCR 혼합물은 ORF1ab와 N 유전자의 두 개의 프라이밍 프로브와 14466ES를 사용하여 제조되었습니다. 14466ES를 2U/20μL의 양으로 반응 시스템에 주입했을 때 RT-qPCR 반응의 저해는 없었습니다.
제품 추천 - 초저잔류 PCR 효소 원료 시리즈
제품 포지셔닝 |
제품 이름 |
고양이 |
오염 방지 열 불안정 UDG |
UCF.ME 우라실 DNA 글리코실라제(UDG/UNG), 열불안정, 1 U/μL |
14466ES |
핫스타트 Taq DNA 중합효소 |
Hieff UCF.ME Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase(5 U/μL) |
14314ES |
역전사효소 |
Hifair UCF.ME V 역전사효소(200 U/μL) |
14608ES |
쥐 RNase 억제제 |
14672ES |