—손끝으로 블롯 멤브레인을 밝히세요!
ECL 시약은 호스래디시 퍼옥시다제(HRP)의 화학 발광 기질로 알려져 있으며, 현재 웨스턴 블로팅 검출에 사용되는 가장 민감한 시약입니다. 시중의 ECL 시약과 관련된 일반적인 문제로는 퀀칭, 높은 배경, 불안정성, 저농도 단백질 검출의 어려움이 있으며, 이는 최종 실험 결과에 영향을 미칠 수 있습니다.
제품 특징
- 뛰어난 감도 - 피코그램에서 저펨토그램 수준까지 항원을 감지합니다.
- 더 높은 신호 대 잡음비 - 정밀한 발광 기판이 배경 소음을 줄여줍니다.
- 항체 효율성 향상 - 더 높은 항체 결합 친화도를 위한 최적화된 기질 시스템.
- 높은 비용 대비 성능 비율 — 더 낮은 가격으로 더 높은 성능.
- 뛰어난 안정성 - 새로운 산화제는 최대 1년 동안 4°C에서 안정적으로 보관할 수 있습니다.
제품 원리
ECL 시약 검출의 핵심 원리는 산화 반응의 발광입니다. 발광 기질의 주요 성분인 루미놀은 호스래디시 퍼옥시다제(HRP)의 촉매 작용을 통해 알칼리성 조건에서 H2O2에 의해 산화되어 3-아미노프탈산의 여기 상태 중간체를 형성합니다. 기저 상태로 돌아오면 광자가 방출되고 최대 방출 파장은 425nm입니다. 이러한 광자 신호는 X선 필름 또는 CCD 이미징 장치로 포착할 수 있습니다.
선택 가이드
그렇다면 실험에 어떤 제품을 선택해야 할까요?
표 1. ECL 시약 선택 가이드
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예센 |
강화된 ECL 강화형 |
슈퍼 ECL 초민감형 |
슈퍼듀라 내구성 있는 타입 |
맥시시그널 초고감도 타입 |
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적용 가능한 샘플 |
고농도의 일상적인 단백질 샘플을 대상으로 합니다. |
풍부도가 낮고 샘플이 제한된 대상 |
풍부도가 낮고 샘플이 제한된 대상 |
극히 낮은 풍부도의 대상, 귀중한 샘플 |
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감지 감도 |
중간 피코그램 수준 |
낮은 피코그램 수준 |
중간 펨토그램 수준 |
낮은 펨토그램 수준 |
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신호 지속 시간 |
< 2시간 |
< 12시간 |
< 24시간 |
< 8시간 |
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적용 가능한 탐지 시스템 |
모든 시약은 X선 필름, CCD 이미징 장치에 적합합니다. |
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1차 항체 희석 농도 |
1:1000-1:4000 |
1:1000-1:10,000 |
1:1000-1:50,000 |
1:5000~1:100,000 |
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2차 항체 희석 농도 |
1:1000-1:4000 |
1:2000-1:10,000 |
1:50,000-1:250,000 |
1:100,000~1:500,000 |
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추천 멤브레인 |
NC 멤브레인 |
NC 멤브레인 또는 PVDF 멤브레인 |
NC 멤브레인 또는 PVDF 멤브레인 |
NC 멤브레인 또는 PVDF 멤브레인 |
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보관 안정성 |
1년간 실온보관 |
1년은 4℃, 반년은 실온보관 |
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장점 |
동일 수준의 감도 중 가장 강한 신호 |
가장 높은 비용 대비 성능 비율로 대부분의 WB 실험에 적합 |
가장 긴 신호 지속 시간, 다중 노출에 매우 적합 |
뛰어난 감도로 미량 단백질 검출에 매우 적합 |
참고: 권장 항체 희석 농도는 1 mg/mL의 항체 스톡 농도를 기준으로 합니다.
제품 응용 프로그램
그림 1.
그림 2.
그림 3.
출판된 문헌
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucine-tRNA-synthase-2를 발현하는 B 세포는 대장암 면역 회피에 기여합니다. 면역. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al. 소형 Acidibacillus sulfateoxidansCas12f1의 구조 및 엔지니어링[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. 대식세포 IRX3는 식이로 인한 비만과 대사성 염증을 촉진합니다. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. 억제성 인터뉴런의 시냅스 가소성에 의한 해마 리듬 및 기억의 게이팅. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
가격 이점
그림 7.
자주 묻는 질문
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발생한 문제 |
원인 분석 |
추천 솔루션 |
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필름에는 역상이 있습니다 |
필름에는 역상이 있습니다 |
필름에는 역상이 있습니다 |
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필름에 갈색 또는 노란색 띠가 있습니다 |
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형광 소광 |
작업시간이 너무 길어서 멤브레인이 점차 건조됩니다. |
멤브레인이 건조되는 것을 방지합니다. |
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플라스틱 랩, 현상액 또는 고정액의 오염 |
좋은 실험 습관을 키우세요 |
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반응계에 HRP가 부족합니다 |
HRP로 표시된 자료 증가 |
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필름에 밴드가 없거나 신호가 약함 |
낮은 전송 효율성 |
전송 효율을 높이고 판단을 위해 미리 염색된 마커를 사용합니다. |
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항원/항체가 부족하거나 일치하지 않음 |
항원/항체 양을 늘리거나 적절한 항원/항체를 선택하세요 |
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엑스레이 필름 문제 |
노출 후 X선 필름이 완전히 검은색(투명하지 않음)인 경우 필름이 완전히 노출되었음을 나타냅니다. 새 X선 필름을 사용하십시오. |
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개발자/수정자 문제 |
필름을 미리 노출시켜 확인합니다. 문제가 있는 경우 새로운 현상액/고정제로 교체합니다. |
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반응계에 HRP가 너무 많음 |
HRP 표지 물질 희석 |
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높은 배경 |
1차 및 2차 항체 농도가 너무 높음 |
항체 농도 감소, 차단 시간 연장 |
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항체가 철저히 세척되지 않음 |
세탁 횟수를 늘려주세요 |
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차단이 완료되지 않음 |
차단 조건 최적화 |
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잘못된 차단제를 사용했습니다. |
다른 차단제를 사용하세요 |
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과잉 노출 |
노출시간을 줄이세요 |
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항체 특이성이 낮음 |
고품질 항체로 교체 |
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반응계에 HRP가 너무 많음 |
HRP로 표지된 물질을 희석합니다. |
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빈 자리가 있는 밴드 |
항원 및 2차 항체의 농도가 높음 |
샘플을 희석한 후 겔을 다시 실행하거나 혼합한 발색 용액을 냉각한 다음 멤브레인에 바르면 즉각적이고 빠른 현상이 나타납니다. |
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불규칙한 밴드 모양 |
메탄올을 이용한 이송 중 공기 방울 발생 또는 불균일 수화(PVDF 멤브레인용) |
전송 조건을 최적화합니다. |
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영화 스팟 |
HRP로 표지된 물질의 집합체 |
0.2μm 멤브레인을 사용하여 HRP 표지 물질 필터링 |
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비특정 밴드 |
반응계에 HRP가 너무 많음 |
HRP 표지 물질 희석 |
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비특이적 단백질 결합을 유발하는 SDS |
실험과정에서 SDS를 사용하지 마십시오 |
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항체 특이성이 낮음 |
고품질 항체로 교체 |
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차단이 불충분함 |
차단 시간을 늘리거나 다른 차단제를 사용하세요. |
주문 정보
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제품 이름 |
제품 번호 |
사양 |
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슈퍼 ECL 검출 시약 |
36208ES60/76 |
100ml/50ml |
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강화된 ECL 화학 발광 기질 키트 |
36222ES60/76 |
100ml/500ml |
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SuperSignal SuperDura 연장 지속 기판 |
36223ES10/60/70/76 |
10ml/100ml/200ml/500ml |
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SuperSignal MaxiSignal 최대 감도 기판 |
36224ES10/60/70/76 |
10ml/100ml/200ml/500ml |