Hoe u het juiste secundaire antilichaam kiest

Wat is een secundair antilichaam?

Een secundair antilichaam is een antilichaam dat zich kan binden aan een primair antilichaam. Het wordt voornamelijk gebruikt om de aanwezigheid van het primaire antilichaam te detecteren. Het primaire antilichaam bindt specifiek aan het antigeen en het secundaire antilichaam bindt specifiek aan het primaire antilichaam. Met andere woorden, de Fc-regio of het Fab-fragment van het primaire antilichaam kan fungeren als een antigeen om het lichaam te stimuleren antilichamen te produceren. Dat wil zeggen, het primaire antilichaam is voornamelijk IgG-klasse immunoglobulinen, dus het secundaire antilichaam is een anti-IgG-antilichaam.

De rol van secundaire antilichamen

Het primaire antilichaam bindt specifiek aan het doeleiwit en het primaire antilichaam moet worden gelabeld met een luminescerende substantie of een chromogene groep. Het is niet mogelijk om met het blote oog te zien of het primaire antilichaam binden het eiwit. Het primaire antilichaam is echter relatief specifiek en elk antilichaam is gelabeld tegen hoge kosten. Het is gebruikelijk om een ​​gelabeld secundair antilichaam te gebruiken dat kan binden aan het primaire antilichaam en een detecteerbaar label heeft (zoals een fluorescerende, radioactieve, chemiluminescente of chromogene groep). Het huidige ontwerp heeft dus over het algemeen het secundaire antilichaam met een detecteerbaar label om het primaire antilichaam te detecteren, terwijl het primaire antilichaam het substraat herkent. Op deze manier kan het primaire antilichaam, wanneer het bindt aan het substraat, worden gedetecteerd via het secundaire antilichaam.

Bijvoorbeeld het ECL-luminescentieprincipe: in het ECL-substraat bevinden zich H2O2 en luminol (en derivaten daarvan), die fluorescentie uitzenden onder invloed van HRP (mierikswortelperoxidase).

Belangrijkste punten voor het gebruik van secundaire antilichamen

Het secundaire antilichaam is een antilichaam dat wordt geproduceerd door het immuniseren van zoogdieren (meestal het immuniseren van geiten, paarden, ezels, muilezels en cavia's, enz.) met het immunoglobuline IgG van een bepaald subtype van de primaire antilichaamsoort (zoals konijnen, muizen), zodat het secundaire antilichaam alleen bindt aan een specifieke soort en subtype van het primaire antilichaam. Bijvoorbeeld, schapen-anti-muis (secundair antilichaam) zal specifiek binden aan muizenmonoklonaal (primair antilichaam) en zal niet binden aan konijnenpolyklonaal of rattenmonoklonaal.

Koppelingsmarkeringen van secundaire antilichamen

Verschillende experimentele methoden zullen resulteren in verschillende koppelingsgroepen voor secundaire antilichamen, die voornamelijk enzymen (mierikswortelperoxidase/HRP en alkalische fosfatase/AP), fluorescerende groepen (FITC, Rhodamine, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3, enz.), biotine, gouddeeltjes, enz. zijn. Over het algemeen worden HRP-gelabelde secundaire antilichamen aanbevolen voor experimenten zoals WB, ELISA, IHC, en biotine-gelabelde secundaire antilichamen worden aanbevolen voor IHC, terwijl fluorescerende labels zoals Alexa Fluor 488, FITC, PE worden gebruikt voor IF, FC, enz.

Hoe kiest u het juiste secundaire antilichaam?

a. Immunoblotting (WB)

Selecteer een secundair antilichaam dat is gelabeld met mierikswortelperoxidase of alkalische fosfatase voor traditionele Western blotting; kies een secundair antilichaam dat is gelabeld met de overeenkomstige fluorofoor voor fluorescerende Western blotting.
b.Immunohistochemie (IHC/ICC)

A. Voor IHC (immunohistochemie) selecteert u een secundair antilichaam dat is gelabeld met HRP of DAB;
B. Voor ICC (immunocytochemie) selecteert u een secundair antilichaam dat is gelabeld met biotine.
C. Immunofluorescentie (IHF/ICF)
C. Voor IHF (immunofluorescentie op weefselsecties) selecteert u een secundair antilichaam dat is gelabeld met FITC; D. Voor ICF (immunofluorescentie op cellen) selecteert u een secundair antilichaam dat is gelabeld met FITC.
D.Immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie

Immunoprecipitatie biedt vaak de keuze om een ​​secundair antilichaam te gebruiken dat specifiek is voor Fc of Fab. Zulke secundaire antilichamen kunnen interferentie van de zware keten (moleculair gewicht 55 kDa) of de lichte keten (moleculair gewicht 25 kDa) vermijden.

Aanbevolen productinformatie

Labelgroep

Productnummer

Productnaam

Ongemarkeerd

34850ES

Geit anti-konijn lgG(H+L)

34851ES

Geit Anti-Mouse lgG(H+L)

34847ES

Ezel anti-menselijk IgG(H+L)

HRP

33101ES

Peroxidase AffiniPure Geit Anti-Konijn IgG (H+L)

33201ES

Peroxidase AffiniPure Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

33301ES

Peroxidase AffiniPure Geit Anti-Rat IgG (H+L)

33401ES

Peroxidase AffiniPure Geit Anti-Cavia IgG(H+L)

33501ES

Mierikswortelperoxidase Geit Anti-Human IgG (H+L)

33701ES

Peroxidase AffiniPure Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33801ES

Peroxidase AffiniPure Konijn Anti-Schaap IgG (H+L)

34201ES

Peroxidase AffiniPure Ezel Anti-Konijn IgG (H+L)

34101ES

Peroxidase AffiniPure Ezel Anti-Muis IgG (H+L)

34301ES

Peroxidase AffiniPure Ezel Anti-Geit IgG (H+L)

33101ES

Peroxidase AffiniPure Geit Anti-Konijn IgG (H+L)

Groene fluorescentie

33106ES

YSFluor™ 488 Geit Anti-Konijn IgG (H+L)

33126ES

YSFluor™ 488 Geiten Anti-Humane IgG (H+L)

33206ES

YSFluor™488 Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

33306ES

YSFluor™ 488 Geit Anti-Bovine IgG (H+L)

33406ES

YSfluor™ 488 Geit Anti-cavia IgG (H+L)

33706ES

YSFluor™488 Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33906ES

YSFluor™ 488 Konijn Anti-Muis IgG (H+L)

34906ES

YSFluor™488 Ezel Anti-Schaap IgG (H+L)

34106ES

YSFluor™488 Ezel Anti-Muis IgG (H+L)

34206ES

YSFluor™488 Ezel Anti-Konijn IgG (H+L)

34306ES

YSFluor™ 488 Ezel Anti-Geit IgG (H+L)

34406ES

YSFluor™ 488 Ezel Anti-Rat IgG (H+L)

34506ES

YSfluor™488 Ezel Anti-cavia IgG (H+L)

34606ES

YSfluor™488 Ezel Anti-Kip IgG (H+L)

34706ES

YSfluor™488 konijn anti-kip IgY(H+L)

34806ES

YSFluor™488 Ezel Anti-Human IgG (H+L)

34856ES

FITC AffiniPure Geit Anti-Humane IgG(H+L)

33107ES

FITC-AffiniPure Geit Anti-Konijn IgG (H+L)

33207ES

FITC-AffiniPure Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

33307ES

FITC-AffiniPure Geit Anti-Rat IgG (H+L)

33707ES

FITC-AffiniPure Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33807ES

FITC-AffiniPure Konijn Anti-Schaap IgG (H+L)

Rhodamine

33109ES

Rhodamine (TRITC) Geiten Anti-Konijn IgG (H+L)

33209ES

Rhodamine (TRITC) Geiten-anti-muis IgG (H+L)

33709ES

Rhodamine (TRITC) AffiniPure Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33210ES

Rhodamine Red-X (RRX) Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

Oranje fluorescentie

33112ES

YSFluor™594 AffiniPure Geit Anti-Konijn IgG (H+L)

33212ES

YSFluor™ 594 Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

33222ES

YSFluor™ 594 Geiten Anti-Humane IgG (H+L)

33412ES

YSfluor™594 Geit Anti-Cavia IgG (H+L)

33312ES

YSFluor™ 594 Geit Anti-Bovine IgG (H+L)

33712ES

YSFluor™594 Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33812ES

YSFluor™ 594 Konijn Anti-Schaap IgG (H+L)

33912ES

YSFluor™594 Konijn Anti-Muis IgG (H+L)

34712ES

YSfluor™594 konijn anti-kip IgY (H+L)

34112ES

YSFluor™ 594 Ezel Anti-Muis IgG (H+L)

34212ES

YSFluor™594 Ezel Anti-Konijn IgG (H+L)

34312ES

YSFluor™ 594 Ezel Anti-Geit IgG (H+L)

34412ES

YSFluor™ 594 Ezel Anti-Rat IgG (H+L)

34512ES

YSfluor™594 Ezel Anti-cavia IgG (H+L)

34612ES

YSfluor™594 Ezel Anti-Kip IgG (H+L)

34812ES

YSFluor™594 Ezel Anti-Human IgG (H+L)

34912ES

YSFluor™594 Ezel Anti-Schaap IgG (H+L)

33208ES

Cy3-AffiniPure Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

33308ES

Cy3-AffiniPure Geit Anti-Rat IgG (H+L)

33708ES

Cy3-AffiniPure Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33808ES

Cy3-AffiniPure Konijn Anti-Schaap IgG (H+L)

34855ES

Cy3-AffiniPure Ezel Anti-Geit IgG(H+L)

Rode fluorescentie

33113ES

YSFluor™647 Geit Anti-Konijn IgG (H+L)

33213ES

YSFluor™ 647 Geiten Anti-Muis IgG (H+L)

33223ES

YSFluor™647 Geiten Anti-Humane IgG (H+L)

33313ES

YSFluor™ 647 Geit Anti-Bovine IgG (H+L)

33413ES

YSfluor™ 647 Geit Anti-cavia IgG (H+L)

33713ES

YSFluor™ 647 Konijn Anti-Geit IgG (H+L)

33813ES

YSFluor™647 Konijn Anti-Schaap IgG (H+L)

33913ES

YSFluor™ 647 Konijn Anti-Muis IgG (H+L)

34713ES

YSfluor™647 konijn anti-kip IgY (H+L)

34113ES

YSFluor™ 647 Ezel Anti-Muis IgG (H+L)

34213ES

YSFluor™ 647 Ezel Anti-Konijn IgG (H+L)

34413ES

YSFluor™ 647 Ezel Anti-Rat IgG (H+L)

34813ES

YSFluor™647 Ezel Anti-Human IgG (H+L)

34913ES

YSFluor™647 Ezel Anti-Schaap IgG (H+L)

Referenties

[1]Zhang B, Wang H, Liao Z, et al.EGFP–EGF1-geconjugeerde nanodeeltjes voor het targeten van zowel neovasculaire als glioomcellen bij de behandeling van hersenglioom[J]. Biomaterials, 2014, 35(13): 4133-4145. IF: 8.387
[2]Yu X, Wang J, Liu J, et al. Een multimodale Pepstatin A peptide-gebaseerde nanoagent voor de moleculaire beeldvorming van P-glycoproteïne in de hersenen van epilepsie ratten[J]. Biomaterials, 2016, 76: 173-186.   ALS:8.402
[3]Liu J, He Y, Zhang J, et al. Gefunctionaliseerde nanodrager gecombineerde aanvalsspecifieke vector met P-glycoproteïne-modulatie-eigenschap voor anti-epileptische medicijnafgifte[J]. Biomaterials, 2016, 74: 64-76. IF:8.402
[4]Ma Y, Ji Y, You M, et al. Labeling en lange termijn tracking van beenmerg mesenchymale stamcellen in vitro met behulp van NaYF 4: Yb 3+, Er 3+ upconversie nanodeeltjes[J]. Acta biomaterialia, 2016, 42: 199-208. IF: 6.638
[5]Wang Y, Lin YX, Qiao SL, et al. Polymere nanodeeltjes maken het mogelijk om macrofagen in de tumormicro-omgeving om te keren voor immunotherapie[J]. Biomaterials, 2017, 112(15): 3e163. IF:8.806
[6] Liu C, He X, Liu W, et al. Bi-allelische mutaties in TTC29 veroorzaken mannelijke subfertiliteit met Asthenoteratospermie bij mensen en muizen [J]. The American Journal of Human Genetics, 2019, 105(6): 1168-1181. 34106ES60 ALS:9.924
[7]Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC reguleert geprogrammeerde necrose en myocardiale ischemie/reperfusieschade door de remming van mPTP-opening[J]. Redox biology, 2019, 20: 414-426.IF（7.126）（Alexa Fluor 488）
[8] Tan T, Wang Y, Wang J, et al. Targeting peptide-decorated biomimetic lipoproteins verbetert diepe penetratie en toegankelijkheid van kankercellen in solide tumoren. Acta Pharm Sin B. 2020;10(3):529-545. Alexa Fluor 488 gelabeld IgG (H+L)IF: 7.097
[9] Een Photoclick Hydrogel voor verbeterde enkelvoudige immunoblotting [J]. Geavanceerde functionele materialen, 2020, 30.33112ES60  ALS: 16.836
[10] Bingcheng Yi a,b,1, Lei Yuc,1, Han Tanga,et al. Met lysine gedoteerde polydopaminecoating verbetert antitrombogeniciteit en endothelialisatie van een elektrogesponnen uitgelijnde vezelachtige vasculaire ent.. Toegepaste materialen vandaag, 2021.  33207ES60 ALS:10.041

Inquiry