1 Het werkingsmechanisme van blasticidin S
Blasticidine S is een nucleoside antibioticum dat wordt geëxtraheerd uit Streptomyces griseochromogenes, dat specifiek de eiwitsynthese in prokaryotische en eukaryotische cellen remt door de vorming van peptidebindingen in het ribosoom te verstoren. Het werkingsmechanisme omvat het blokkeren van de hydrolyse van peptidyl-tRNA die wordt geïnduceerd door releasefactoren en het verbeteren van de binding van tRNA aan de grote ribosomale subeenheid, waardoor de vorming van peptidebindingen tot op zekere hoogte wordt geremd.
Blasticidine S heeft een snelle en krachtige werkingswijze, en zeer lage antibioticaconcentraties kunnen leiden tot snelle celdood. Het heeft niet alleen een significante remming van de eiwitsynthese in bacteriën en eukaryoten, maar ook activiteit tegen schimmels, nematoden en tumorcellen. Pltocidin S wordt vaak gebruikt om getransfecteerde cellen te screenen die bsr- of BSD-genen dragen.
2 Toepassing van Blasticidine S
2.1 Celkweek en screening
- Zoogdiercellen: blast S wordt vaak gebruikt om getransfecteerde cellen te screenen die bsr- of BSD-genen dragen. Deze resistentiegenen, respectievelijk van B. cereus en Aspergillus, waren in staat om murancidine om te zetten in avirulente derivaten, waardoor selectieve doding van cellen mogelijk werd zonder resistentiegenen te dragen, met werkende concentraties van Blasticidine S in zoogdiercellen variërend van 1 tot 50 μg/mL.
| Cel | Genus | Oorganisatie | Ccultuur medium | De Blasticidine S-concentratie (μg/ml) |
| HeLa | Menselijk | Baarmoeder | DMEM | 3-10 |
| HEK293 | Menselijk | Nier | DMEM | 3-10 |
| B16 | Muis | Melanoma | RPM-nummer | 3-10 |
| PC1.0 | Hamster | Adenocarcinoom | RPM-nummer | 10-30 |
| CHO | Hamster | Eierstok | DMEM | 5-15 |
- Bacteriële selectie: In bacterieculturen kan de aanbevolen concentratie van 25-100 µg/ml snel leiden tot de dood van cellen zonder resistentiegenen.
E. coli is iets minder gevoelig voor Blasticidine S, maar transformanten zijn tolerant voor Blasticidine S en kunnen worden gescreend met LB-medium met een laag zoutgehalte (pH 8) in een concentratiebereik van 50-100 μg/ml Blasticidine S. Een hoge pH verbetert de activiteit van Blasticidine S.
- Plantencellen: ook toepasbaar bij genoverdrachtexperimenten in plantencellen; bsr en BSD worden vaak gebruikt als screeningmarkers.
2.2 Onderzoek naar eiwitsynthese
- Blasticidine werd gebruikt om het eiwitsyntheseproces te bestuderen op het niveau van de vorming van peptidebindingen, met name in HEK293-T-cellen en HEK-D5-cellen van TLR-2-constructies.
2.3 Schimmelwerende eigenschappen
- Het heeft ook een bepaalde antischimmelactiviteit, die kan worden gebruikt voor de preventie en behandeling van rijstblast. Het bacteriedodende effect is voornamelijk om de eiwitsynthese te beïnvloeden en kan sporenkieming, hyfale ontwikkeling en sporenvorming remmen.
2.4 Andere toepassingen
- Blasticidine wordt ook gebruikt om het remmende effect van tumorcellen te bestuderen.
- Het fungeert ook als selectiemiddel voor getransformeerde cellen die het resistentiegen bls, bsr of BSD bevatten.
3 Experimentele procedures met betrekking tot Blasticidine S (screening van stabiele transfectanten van zoogdieren)
1) Blasticidine S wordt doorgaans gebruikt in een concentratie van 10 μg/ml. Cellen worden getransfecteerd met plasmiden die het bsr- of BSD-gen dragen en geïncubeerd in normaal groeimedium dat Blasticidine S bevat om stabiele transfectanten te selecteren.
2) 48 uur na transfectie, de cellen in vers medium met een geschikte concentratie Blasticidine S plaatsen (Opmerking: Antibiotica werken het beste wanneer cellen zich in een actieve delingsfase bevinden. De efficiëntie van antibiotica neemt af als de celdichtheid te hoog is. Bij het splitsen van cellen mag de samenvloeiing niet meer dan 25% bedragen).
3) Verwijder elke 3-4 dagen het gebruikte medium en voeg nieuw medium met het antibioticum toe.
4) Controleer na 7 dagen op de vorming van celkolonies. Afhankelijk van het type gastheercel en de transfectie-/selectie-efficiëntie kan de vorming van kolonies een extra week of langer duren.
5) Breng 5-10 resistente klonen over naar 35 mm celkweekschalen en houd ze 7 dagen in selectief medium. Voer vervolgens cytotoxiciteitstests uit om te testen.
4 Productaanbeveling
| Productnaam | Kat# | Specificatie | Verschijning |
| Blasticidine S CAS：3513-03-9 | 60218ES10 | 10 mg | Oplossing (10 mg/ml) in HEPES Buffer，pH 7,5） |
| 60218ES50 | 5×10 mg | ||
| 60218ES60 | 10×10 mg | ||
| 60218ES80 | 1 G | Poeder (bereid een voorraadoplossing van 5-10 mg/ml met steriel water of buffer bij gebruik) |
5 Gepubliceerde artikelen met onze reagentia
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Therapeutische targeting van de oncogene driver EWSR1::FLI1 in Ewing-sarcoom door remming van het FACT-complex. Oncogene. 2023 jan;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 nov 10. PMID: 36357572. (ALS:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN positieve feedbacklus vertegenwoordigt een unieke afhankelijkheid voor MYCN-versterkt neuroblastoom. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dec 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(ALS:11.3)
6 Gerelateerde producten
| Productnaam | Kat# | Specificatie |
| Ciprofloxacinehydrochloride | 60201ES05/25/60 | 5/25/100g |
| Ampicilline, natriumzout | 60203ES10/60 | 10/100 gram |
| Doxycyclinehyclaat | 60204ES03/08/25 | 1/5/25 gram |
| Chlooramfenicol, USP-klasse | 60205ES08/25/60 | 5/25/100g |
| Kanamycine Sulfaat | 60206ES10/60 | 10/100 gram |
| Tetracycline HCl Tetracyclinehydrochloride (USP) | 60212ES25/60 | 25/100 gram |
| Vancomycine Hydrochloride | 60213ES60/80/90 | 100mg/1g/5g |
| Gentamycine Sulfaat Zout | 60214ES03/08/25 | 1/5/25 gram |
| Spectinomycine Hydrochloride | 60215ES08 | 5 gram |
| Fleomycine (20 mg/ml in oplossing) | 60217ES20/60 | 20/5×20mg |
| Blasticidine S (Blasticidine) | 60218ES10/60 | 10/10×10mg |
| Nystatine | 60219ES08 | 5 gram |
| G418 Sulfaat (Geneticine) | 60220ES03/08 | 1/5 gram |
| Puromycine (oplossing 10 mg/ml) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 ml |
| Puromycine Dihydrochloride | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500mg/1g |
| Hygromycine B (50 mg/ml) | 60224ES03 | 1 g (20 ml)/10×1 g (20 ml) |
| Hygromycine B | 60225ES03/10 | 1/10 gram |
| Erythromycine | 60228ES08/25 | 5/25 gram |
| Tijd | 60230ES07/32 | 3,2/10×3.2 gram |
| Aureobasidine A (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1mg |
| Polymyxine B-sulfaat | 60242ES03/10 | 1/10MU |