Overzicht
Coelenterazine is een natuurlijke fluoresceïne die in de natuur veel voorkomt en het lichtenergieopslagmolecuul is van de meeste mariene luminescente organismen (meer dan 75%). Coelenterazine kan worden gebruikt als substraat voor veel luciferase-enzymen, zoals zeenierluciferase (Rluc), Gaussia-gesecreteerde luciferase (Gluc) en fotoproteïnen, waaronder aequorine en Obelia. In tegenstelling tot het vuurvliegluciferine/luciferase-systeem, heeft het Coelenterazine/luciferase-systeem geen adenosinetrifosfaat (ATP) nodig, waardoor het gemakkelijker is om biofluorescentie in vivo te bestuderen. Daarom wordt Coelenterazine vaak gebruikt als luminescentiesubstraat voor fluorescentie-assays op basis van reportergen-assays en levende dieren-assays.
De belangrijkste commerciële Coelenterazine die momenteel wordt gebruikt, is Coelenterazine native. Er zijn ook veel coelenterinderivaten zoals Coelenterazine h, Coelenterazine 400a, Coelenterazine cp, Coelenterazine f, Coelenterazine hcp, Coelenterazine n equals die worden gesynthetiseerd. Theoretisch gezien kunnen deze coelenterins in dezelfde experimenten worden gebruikt, maar vanwege hun verschillen in lichtgolflengte, celmembraanpermeabiliteit en lichtkwantumefficiëntie, vertonen ze verschillende experimentele effecten in dezelfde toepassing.
Soorten Coelenterazine
Ook bekend als Coelenterazine vrij zuur. Het is het substraat van veel luciferase enzymen zoals Renilla luciferase (Rluc) en Gaussia luciferase (Gluc), en is ook de cofactor van kwallen luminescente proteïne.
Toepassingsscenario's: Detectie van de calciumionenconcentratie in levende cellen, analyse van genrapporten, BRET-onderzoek (Bioluminescente resonantie-energieoverdracht), ELISA-, HTS- en chemiluminescentiedetectie van ROS-niveaus in weefsels of cellen, enz.
Het is het substraat van veel luciferase-enzymen, zoals Renilla-luciferase (Rluc) en Gaussia-luciferase (Gluc), en is tevens de cofactor van het luminescerende eiwit van kwallen.
Toepassingsscenario: De lichtsterkte is meer dan 10 keer hoger dan die van Coelenterazine Native, dat geschikt is voor reportergenanalyse en detectie van calciumionconcentratie in levende cellen.
Coelenterazine-hcp
Het is een van de derivaten van Coelenterazine Native. De fluorescentie-intensiteit van Coelenterazine hcp-Aequorin complex is 190 keer hoger dan die van Coelenterazine Native complex, met een hoge kwantumopbrengst en snelle Ca2+ reactiesnelheid, die zeer geschikt is voor het bepalen van calciumionenniveaus.
Toepassingsscenario: Geschikt voor detectie van calciumionenniveau.
Ook bekend als DeepBlue CTM, is het een van de derivaten van Coelenterazine Native. Het is een goed substraat voor Renilla luciferase (Rluc), en de emissiegolflengte is ongeveer 400 nm, wat weinig interferentie heeft met het signaal van GFP-receptorproteïne en niet kan worden geoxideerd door Gaussia secreted luciferase (Gluc).
Toepassingsscenario: Het is het voorkeurssubstraat voor Coelenterazine voor BRET-onderzoek (Bioluminescente resonantie-energieoverdracht).
Het is het voorkeurssubstraat voor aequorine en het enige structurele verschil met Coelenterazine Native is dat de hydroxylgroep op de R-1 fenolgroep vervangen is door fluor (F).Vergeleken met het totale aantal fotonen dat door het Coelenterazine Native-Apoaequorin-complex wordt geproduceerd, produceert dit complex slechts 80% van de fotonenergie. Het voordeel hiervan is dat het heel weinig tijd kost om het aequorinecomplex te genereren. Wanneer het in contact komt met Ca2+, het geeft snel licht en levert een hoge opbrengst, met een productie-intensiteit die 20 keer hoger is dan die van Coelenterazine Native. Bovendien heeft het een goede celpermeabiliteit.
Toepassingsscenario: Bij extreem hoge Ca2+ Om experimenten met de regeneratie van kwalleneiwitten te kunnen uitvoeren, is detectiegevoeligheid vereist. Het gebruik van substraten wordt aanbevolen.
Coelenterazine cp
Het is een derivaat van Coelenterazine Native. Het fotoproteïnecomplex gevormd met Apoaequorin-eiwit is 15 keer meer lichtgevend dan Coelenterazine Native en heeft een snellere Ca2+ reactiesnelheid.
Toepassingsscenario: Het kan worden gebruikt voor high-throughput screening van G-proteïne-gekoppelde receptoren (GPCR's)-geneesmiddelen.
Coelenterazine n
De fluorescentie-intensiteit is zwakker bij alle Coelenterazine-derivaten en de reactiesnelheid op Ca2+ is aanzienlijk lager dan die van Coelenterazine Native.
Coelenterazine en
Een derivaat van Coelenterazine Native dat structureel één ethylgroep meer is dan Coelenterazine Native. Als substraat voor Renilla luciferase is de fluorescentie-intensiteit 137% van die van Coelenterazine Native. Coelenterazine e heeft een hoge in vitro reactiviteit van kwallenluminescerend eiwit en dubbele emissiepieken (405& 465), wat de bepaling van Ca mogelijk maakt2+ concentratie in het pCa5-7 bereik door de verhouding van dubbele golflengten. Deze methode is onafhankelijk van de Coelenterazine concentratie, waardoor de detectienauwkeurigheid wordt verbeterd. Omdat de celpermeabiliteit van dit derivaat slecht is, heeft het dit voordeel niet voor intracellulaire gerelateerde experimenten.
Toepassingsscenario: Zeer bruikbaar substraat voor Ca2+ detectie met lage gevoeligheid.
Coelenterazine 2-methyl
Het is een krachtige cellulaire antioxidant. Het kan effectief werken op intracellulaire reactieve zuurstofsoorten, zoals singletzuurstof en superoxide-anionen, en oxidatieve stress is een tussenliggende schakel in het proces van apoptose. Bovendien heeft de verbinding de kenmerken van niet-toxiciteit en membraanpermeabiliteit, dus het kan worden gebruikt om apoptose te bestuderen.
Producttoepassing:
1) Als een belangrijk hulpmiddel bij het bestuderen van apoptose;
2) Het kan ook worden gebruikt voor chemiluminescentie om de niveaus van superoxide-anionen en peroxynitriet-anionen te detecteren.
| Productnaam | Moleculair gewicht | Moleculaire formule | In (nm) | RLC* | Relatieve intensiteit | Halveringstijd (ms)** |
| 423.46 |
| 466 | 1.00 | 1 | 6-30 | |
| 407.48 |
| 466 | 0,75 | 16 | 6-30 | |
| Coelenterazine-hcp | 399.48 |
| 445 | 0,65 | 500 | 2-5 |
| Coelenterazine cp | 415.48 |
| 442 | 0,63 | 28 | 2-5 |
| 425.46 |
| 472 | 0,80 | 20 | 6-30 | |
| Coelenterazine n | 457.52 |
| 468 | 0,25 | 0,15 | 6-30 |
| Coelenterazine en | 449.5 |
| 405 en 465 | 0,5 | 4 | 0,15-0.3 |
| 2-methylcoelenterazine | 331.37 |
| / | / | / | / |
| 391.48 |
| 400 | / | / | / |
Productinformatie
| Productnaam | Catalogusnummer | Specificaties |
| 40901ES01/02/03/08 | 100mg/500mg/1g/5g | |
| 40902ES01/02/03/09 | 100mg/500mg/1g/5g | |
| 40903ES01/02/03 | 100 mg/500 mg/1 gram | |
| 40904ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40905ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg | |
| 40906ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40908ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
Gepubliceerde literatuur van gebruikers (onvolledige statistieken)
- Xie J, Zheng H, Chen S, Shi X, Mao W, Wang F. Rationeel ontwerp van een activeerbare reporter voor kwantitatieve beeldvorming van RNA-afwijkende splicing in vivo. Mol Ther Methods Clin Dev. 2020;17:904-911. Gepubliceerd 2020 Apr 18.
- Lin GY, Lin L, Cai XQ, et al. High-throughput screeningcampagne identificeert een kleine moleculaire agonist van de relaxinefamilie peptide receptor 4 [online gepubliceerd vóór druk, 31 maart 2020]. Acta Pharmacol Sin. 2020;10.1038/s41401-020-0390-x.
- Shao L, Chen Y, Zhang S, Zhang Z, Cao Y, Yang D, Wang MW. Modulerende effecten van RAMP's op signaleringsprofielen van de glucagonreceptorfamilie, Acta Pharmaceutica Sinica B.
- Haifeng Zheng, Si Chen, Xinan Wang, Jinrong Xie, Jie Tian en Fu Wang. Intron Retained Bioluminescence Reporter voor realtime beeldvorming van pre-mRNA-splicing bij levende proefpersonen. CAnal. Chem. 2019, 91, 12392−12398
- Peiyu Xu, Sijie Huang, Chunyou Mao, ..., Xi Cheng, Yan Zhang, H. Eric Xu. Structuren van de menselijke dopamine D3-receptor-Gi-complexen.2021, Molecular Cell 81, 1147–1159
- Moxuan Ji, Xinan Wang, Haifeng Zheng, Wenjie Mao, Xiaorui Shi, Si Chen, Chu Tang en Fu Wang Ci. Een geheime verslaggever voor bloedmonitoring van pyroptotische celdood. Anaal. Chem.
- F Hu, Y Zhang, Q Liu, Z Wang. PurA vergemakkelijkt Edwardsiella piscicida om te ontsnappen aan NF-κB-signalering. Fish & Shellfish Immunology, 2022 - Elsevier
- Haifeng Zheng, Xinan Wang, Si Chen, Xiaorui Shi, Jinrong Xie, Wenjie Mao, Jie Tian en Fu Wang. Real-time functionele bioimaging van neuronspecifieke microRNA-dynamiek tijdens neuronale differentiatie met behulp van een dubbele luciferase-reporter. ACS Chem. Neurosci.DOI: 10.1021/acschemneuro.8b00614