--
De binding van Fluorescein-dUTP aan geknikt DNA door TdT-transferase is een van de meest voorkomende methoden voor het detecteren van apoptose, bijvoorbeeld de In Situ Cell Death Kit van Roche is gebaseerd op dit principe. De TdT-transferase-activiteit in het product heeft direct invloed op de labelingsefficiëntie.
Momenteel maken meer dan 120 onderzoeksgroepen gebruik van dit product en zijn er veel Engelstalige artikelen gepubliceerd in gezaghebbende tijdschriften, zoals Theranostics en EMBO Molecular Medicine.
Detectiemechanisme
In de late fase van apoptose produceren dubbelstrengsbreuken of enkelstrengsbreuken in het chromosomale DNA een groot aantal kleverige 3-OH-uiteinden. Onder invloed van deoxyribonucleotide terminal transfer (TdT) wordt fluoresceïne/enzym-gelabelde dUTP gebonden aan het 3-terminale uiteinde van het DNA. Hierdoor kan apoptose worden gedetecteerd door middel van de detectie van fluorescentie, wat bekendstaat als deoxyribonucleotide terminal transferase-gemedieerde nick-end labeling. Deze methode wordt Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling (TUNEL) genoemd. Het principe ervan wordt weergegeven in Figuur 1.
Figuur 1: Schematisch diagram van Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling (TUNEL)
Producteigenschappen
- Breed scala aan toepassingen
Kan worden gebruikt voor in paraffine ingebedde weefselsecties, bevroren weefselsecties, gekweekte cellen en uit weefsel geïsoleerde cellen.
- Hoge detectiegevoeligheid
Er kunnen slechts zeer kleine hoeveelheden apoptotische cellen worden gedetecteerd.
- Lage achtergrondinterferentie
Hoge signaal-ruisverhouding.
- Veelzijdigheid van observatie
Fluorescentiemicroscopie-observatie, doorstroomdetectie.
Gegevenspresentatie
1、Muis preadipocyt (3T3-L) Tunel-test
Figuur 2: Detectie van apoptose van muispreadipocyt 3T3-L. De eerste rij vertegenwoordigt negatieve controle en de tweede rij vertegenwoordigt positieve controle. Detectiereagens: Cat.nr. 40306 TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)
2. Tunneldetectie van paraffinesectiemonsters
Figuur 3: LY3009120, alleen of in combinatie met Vemurafenib en Obatoclax, vertraagde schildklierkanker effectief in een subcutaan transplantaat-tumormodel. IF=8,8. Monstertype: in paraffine ingebed tumorweefsel (afkomstig van naakte muizen). Detectiereagentia: Cat.nr. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
3、Tuneldetectie van celcrawls
Figuur 4: Effect van zinksulfaat op apoptose van endotheelcellen in verschillende subgroepen. Monstertype: HUVEC (humane navelstreng-endotheelcellen). Detectiereagentia: Cat.nr. 40308 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 640)
4. Flowcytometrie om apoptose te detecteren
Figuur 5: PA-behandeling kan het optreden van apoptose tijdens herprogrammering effectief verminderen. IF=3.7. Monstertype: iPS-cellen. Detectieragens: Cat.nr. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
Literatuurcitaat
[1] Li C, Wang Q, Gu X, et al. Poreus Se@ SiO2 nanocomposiet bevordert migratie en osteogene differentiatie van mesenchymale stamcellen uit rattenbeenmerg om de genezing van botfracturen in een rattenmodel te versnellen[J].Internationaal tijdschrift voor nanomedicijnen, 2019, 14: 3845. (ALS 4.76)
[2] Miao T, Qian L, Yu F, et al. Beschermende effecten van hydroxysafflorgeel op door hoge oxidatie van lagedichtheidslipoproteïne geïnduceerde verwondingen aan endotheelcellen van de menselijke kransslagader[J]. Development, 2019, 22: 581-589.(ALS 6.208)
[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, et al. MicroRNA-205 wordt geassocieerd met diabetes mellitus-geïnduceerde erectiestoornissen via downregulatie van de androgeenreceptor[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(5): 3257-3270.(ALS 4.41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC reguleert geprogrammeerde necrose en myocardischemie/reperfusieschade door de remming van mPTP-opening[J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(ALS 8.37)
[5] Li P, Hao L, Guo YY, et al. Chloroquine remt autofagie en verslechtert de mitochondriale disfunctie en apoptose in hypoxische rattenneuronen[J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(ALS 3.40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X, et al. Baicalin verzwakt verstoring van de bloed-hersenbarrière en hemorragische transformatie en verbetert de neurologische uitkomst bij ischemische beroerteratten met vertraagde t-PA-behandeling: betrokkenheid van het ONOO−-MMP-9-pad[J]. Translationeel beroerteonderzoek, 2018, 9(5): 515-529.(ALS 4.87)
[7] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. De gecombineerde therapeutische effecten van 131jodium-gelabelde multifunctionele koper-sulfide-geladen microbolletjes bij de behandeling van borstkanker[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(ALS 6.88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT, et al. Myostatin knockout induceert apoptose in menselijke baarmoederhalskankercellen via verhoogde generatie van reactieve zuurstofsoorten[J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(ALS 8.37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y, et al. Astilbine verbetert cisplatine-geïnduceerde nefrotoxiciteit door oxidatieve stress en ontsteking te verminderen [J]. Food and Chemical Toxicology, 2018, 114: 227-236.(ALS 3.78)
[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ, et al. Overgeëxprimeerd microRNA-181a vermindert glomerulaire sclerose en schade aan het niertubulaire epitheel bij ratten met chronische nierziekte via downregulatie van het TLR/NF-κB-pad door binding aan CRY1[J]. Molecular Medicine, 2018, 24(1): 49.(ALS 3.46)
[11] Li G, Yin Q, Ji H, et al. Een studie naar screening en antitumoreffect van CD55-specifiek ligandpeptide in baarmoederhalskankercellen[J]. Drug Design, Development and Therapy, 2018, 12: 3899.(ALS 3.27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F, et al. Tumor-micro-omgeving gecontroleerde nanomicellen met AIE-eigenschap voor het versterken van kankertherapie en apoptosebewaking[J]. Biomaterials, 2019, 188: 96-106.(ALS 9,85)
[13] Li Z, Li D, Li Q, et al. In situ laag-immunogene albumine-conjugerende-corona-geleidende nanodeeltjes voor tumorgerichte chemotherapie[J]. Biomaterials Science, 2018, 6(10): 2681-2693.(ALS 5.31)
[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, et al. Gd3+-ion-geïnduceerde koolstof-dots zelfassemblage aggregaten geladen met een fotosensibilisator voor verbeterde fluorescentie/MRI duale beeldvorming en antitumortherapie[J]. Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063.(ALS 7.17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. 131 I-gelabelde koper-sulfide-geladen microbolletjes voor de behandeling van levertumoren via embolisatie van de leverarterie[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(ALS 8.12 )
Veelgestelde vragen
Q: Verschijning van niet-specifieke fluorescerende markering?
1) Het weefsel/de cellen zelf hebben hoge niveaus van nuclease- of polymerase-activiteit, wat gemakkelijk kan leiden tot het verschijnen van niet-specifieke fluorescerende labeling, zoals gladde spiercellen. De oplossing is om de cellen of weefsels direct na inname te fixeren en ze voldoende te fixeren om te voorkomen dat deze enzymen vals-positieve resultaten veroorzaken.
2) Het gebruik van ongeschikte fixeermiddelen, zoals sommige zure fixeermiddelen, leidt tot vals-positieve resultaten. Vers bereide 4% neutrale paraformaldehyde fixeermiddelen worden aanbevolen.
3) Niet-specifieke fluorescentie kan ook optreden wanneer de reactietijd van de TUNEL-test te lang is en het cel- of weefseloppervlak niet nat kan worden gehouden. Zorg ervoor dat u de reactietijd controleert en dat de TUNEL-testreactieoplossing het monster goed bedekt.
Q: De fluorescentieachtergrond is erg hoog?
1) Cellen die zich snel delen en vermenigvuldigen, met een hoge mate van transcriptie, vertonen soms ook DNA-breuken in de kern.
2) Langdurige blootstelling aan excitatielicht leidt tot foutpositieve resultaten.
Q: Lage etiketteringsefficiëntie?
1) Fixatie met ethanol of methanol leidt tot een lage labelingsefficiëntie.
2) Fixatietijd is te lang, wat resulteert in een te hoge mate van cross-linking. Het is raadzaam om de fixatietijd te verkorten.
3) Het weefselgedeelte is te dik, waardoor het fixatie-effect onvoldoende is. Het is beter om binnen 10 μm te blijven.
(4) Fluorescentie-uitdoving: Fluorescentie wordt ernstig uitgedoofd in 10 min van normaal licht. De oplossing is om lichtbewerking te vermijden.
Productdetails
| Productnaam | Artikelnr. | Specificatie |
| Annexin V-FITC/7-AAD Apoptose Detectiekit | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Annexin V-PE/7-AAD Apoptose Detectiekit | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD Apoptose Detectiekit | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD Apoptose Detectie Kit | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |