Mitochondriën
Mitochondriën zijn de energiefabrieken van de cel, de belangrijkste plaats van intracellulaire oxidatieve fosforylering en synthese van adenosinetrifosfaat (ATP), dat energie levert voor cellulaire activiteiten. 95% van de energie die nodig is voor cellulaire levensactiviteiten komt van mitochondriën. Naast het leveren van energie aan cellen, zijn mitochondriën ook betrokken bij processen zoals celdifferentiatie, cellulaire informatieoverdracht en apoptose, en bezitten ze het vermogen om celgroei en celcyclus te reguleren. Daarom zijn assays zoals mitochondriën en mitochondriale membranen een essentieel onderdeel van de studie van cellen.
Definitie en belang van mitochondriaal membraanpotentieel
Mitochondriale membraanpotentiaal is het resultaat van ladingsverdeling aan beide zijden van het binnenste mitochondriale membraan en is een sleutelfactor bij het handhaven van normale mitochondriale functie. In mitochondriën genereert de elektronentransportketen een protongradiënt door redoxreacties die ATP-synthese aansturen. De stabiliteit van de mitochondriale membraanpotentiaal is direct gerelateerd aan de energievoorziening van de cel en zijn overlevingsstatus. Een groot aantal onderzoeken heeft aangetoond dat mitochondriën nauw verwant zijn aan apoptose, waarbij de afname van mitochondriale transmembraanpotentiaal wordt beschouwd als een van de vroegste gebeurtenissen in het apoptotische cascadereactieproces. Het vindt plaats vóór het verschijnen van apoptotische kenmerken (chromatinecondensatie, DNA-breuken) in de kern, en zodra de mitochondriale transmembraanpotentiaal instort, is apoptose onomkeerbaar. De afname van mitochondriale membraanpotentiaal is dus een kenmerkende gebeurtenis in de vroege stadia van apoptose.
Werkingsprincipe van de JC-1-sonde
JC-1 is een kationische lipide fluorescerende kleurstof, die kan worden gebruikt als indicator van het mitochondriale transmembraanpotentieel. JC-1 bestaat in twee toestanden: monomeer en multimeer. Bij een lage concentratie bestaat het als monomeer en kan groene fluorescentie worden gedetecteerd. Wanneer het wordt gedetecteerd met een flow-through-analyse, bevindt het zich doorgaans in het FL-1-kanaal (hetzelfde kanaal als FITC). Bij een hoge concentratie bestaat het als een multimeer en kan rood licht worden gedetecteerd, en wanneer het wordt gedetecteerd door een flow-through-analyse, bevindt het zich gewoonlijk in het FL-2-kanaal (hetzelfde kanaal als PE). JC-1 kan ook worden gebruikt als een kationische lipide fluorescerende kleurstof en kan worden gebruikt als een mitochondriale transmembraanpotentiaalindicator. en PE hetzelfde kanaal). Door de verandering van de JC-1-concentratie wordt een reversibel overgangsproces tussen monomeer en multimeer gevormd.
In normale cellen, wanneer het membraanpotentieel normaal is, komt JC-1 de mitochondriën binnen via de polariteit van het mitochondriale membraan en vormt rode fluorescerende multimeren vanwege de toename in concentratie, terwijl in apoptotische cellen het mitochondriale transmembraanpotentieel gedepolariseerd is en JC-1 in een verlaagde concentratie uit de mitochondriën wordt vrijgegeven en wordt teruggedraaid naar de groene fluorescerende monomeervorm. Daarom kunnen veranderingen in het mitochondriale membraanpotentieel worden gedetecteerd door groene en rode fluorescentie te detecteren.
Let op: Afbeeldingen geciteerd van internet
JC-10-sonde
JC-10, een derivaat van JC-1, is een potentiaalafhankelijke probe die wordt gebruikt om mitochondriaal transmembraanpotentieel te bepalen door middel van flowcytometrie, fluorescentiemicroscopie en microtiterplaat-gebaseerde fluorescentie-assays. In gezonde cellen hoopt JC-10 zich selectief op in mitochondriën, waarbij rode aggregaten worden gegenereerd die een breed excitatiespectrum en emissiegrote waarden vertonen bij 590 nm.Echter, in apoptotische en necrotische cellen met een laag mitochondriaal transmembraanpotentieel, diffundeert JC-10 uit de mitochondriën en produceert JC-10 monomeren, wat resulteert in een verschuiving naar groene emissie (525 nm). Het is succesvol gebruikt als een indicator van mitochondriaal transmembraanpotentieel in een verscheidenheid aan monstertypen, waaronder myocyten, neuronen, intacte weefsels en geïsoleerde mitochondriën.
JC-10--Vervanging voor JC-1
- Stabiliteit: JC-10 heeft minder detectiebias omdat het een hogere oplosbaarheid en hogere gevoeligheid heeft in waterige media.
- Verbeterd signaal: JC-10 heeft een hogere signaal-achtergrondverhouding dan JC-1.
- Verhoogde gevoeligheid: JC-10 kan subtiele veranderingen in het verlies van mitochondriaal transmembraanpotentiaal beter detecteren dan JC-1 in alle geteste cellijnen.
- Brede toepassing: JC-10 kan worden gebruikt in primaire rattenhepatocyten.
- Handig: JC-10 is compatibel met fluorescerende enzymmarkers, celimagers en flowcytometers.
Opmerkingen:. Mitochondriale membraanpotentiaalveranderingen geïnduceerd door comedonen werden gemeten in Jurkat-cellen met JC-10 en JC-1. Na behandeling van Jurkat-cellen met camptothecine (10 mM) gedurende 4 uur, werden JC-1 en JC-10 kleurstof-up-samplingoplossingen toegevoegd aan de wells en gedurende 30 min geïncubeerd. De fluorescentie-intensiteit van de geaggregeerde en monomere vormen van JC-1 en JC-10 werd gemeten bij Ex/Em = 490/525 nm en 490/590 nm met behulp van een NOVOstar-enzymlabeler (BMG Labtech).
Analyse van de resultaten
Bij het detecteren van JC-1 monomeer kan het excitatielicht worden ingesteld op 490 nm en het emissielicht kan worden ingesteld op 530 nm; bij het detecteren van JC-1 polymeer kan het excitatielicht worden ingesteld op 525 nm en het emissielicht kan worden ingesteld op 590 nm. Apoptose werd gedetecteerd door flowcytometrie, groene fluorescentie werd gedetecteerd via het FL-1 kanaal en rode fluorescentie werd gedetecteerd via het FL-2 kanaal. FL-1+, FL-2+ zijn normale cellen en FL-1+, FL-2- zijn apoptotische cellen.
Let op: de bron van de afbeelding is de website van de China Streamline Association forums
Werk zonder twijfel
V: JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Fluorescent Probe, kan dit product gebruikt worden om weefselsecties te kleuren?
A: Verdeel het levende weefsel in individuele cellen om de activiteit van de cellen te controleren voordat u het kleurt.
V: Kan ik de cellen fixeren voordat ik ze kleur met JC-1?
A: Nee. JC-1-kleurstof hoopt zich op in mitochondriën op een potentiaalafhankelijke manier en kan worden gebruikt om cellen, weefsels of gezuiverde mitochondriale membraanpotentialen te detecteren. Immobilisatie verstoort het elektrische potentieel, wat resulteert in het onvermogen van de probe om zich op de mitochondriën te verzamelen en verlies van specificiteit.
Q: Er zitten geaggregeerde deeltjes in de JC-1-werkoplossing en ik wil deze verwijderen door middel van centrifugatie vóór de kleuring. Zijn er aanbevolen parameters voor centrifugatie?
A: De JC-1 werkoplossing kan worden gecentrifugeerd bij 13.000 g gedurende ongeveer 1-2 minuten.
Bestel Informatie
| Productnaam | Artikelnr. | Specificatie |
| 40705ES03/08 | 1mg/5mg | |
| JC-10 mitochondriale membraanpotentiaal fluorescerende sonde | 40707ES03/08 | 1mg/5mg |