Bij celkweek is vaak celvertering nodig. Daarom is de trypsine die voor de vertering van cellen wordt gebruikt onmisbaar voor celkweek. Het is ook erg belangrijk, omdat het de groeifase van cellen beïnvloedt.

Trypsine kan grofweg worden onderverdeeld in twee typen: recombinant trypsine en niet-recombinant trypsine.

• Niet-recombinante trypsine is afkomstig van dierlijke extractie, met dierlijke oorsprong. Het is ook de traditionele toepassing van trypsine, dat veel voorkomt in het spijsverteringsstelsel van dieren en rechtstreeks wordt gewonnen uit het alvleesklierweefsel van runderen of varkens.
• Recombinant trypsine wordt geproduceerd met behulp van genetische recombinanttechnologie en is niet van dierlijke oorsprong.

Productintroductie en toepassing

Niet-recombinant trypsine (afkomstig van dieren)

Producteigenschappen:

Niet-recombinant trypsine (ook bekend als trypsine) is een serine proteolytisch enzym dat wordt gewonnen uit de alvleesklier van runderen, schapen en varkens. Het kan specifiek de carboxylterminus van positief geladen lysine en arginine splitsen, gezuiverd door meervoudige kristallisatie en verder bereid door chromatografie en ultrafiltratietechnologie, van dierlijke oorsprong.

Omdat pancreasenzymen kunnen werken op transmembraaneiwitten en eiwitten in de extracellulaire matrix, zoals cadherine, integrine, enz., worden ze nu algemeen gebruikt om weefsels en monolaagcellen te dissociëren. Hoewel trypsine de proteolyse tussen cellen tot afzonderlijke cellen kan hydrolyseren, is de reactie van verschillende weefsels of cellen op trypsine anders, en de activiteit van verspreide cellen is ook gerelateerd aan de concentratie van trypsine, reactietemperatuur en -tijd, en het vermogen van trypsine om cellen te dissociëren is het sterkst onder de omstandigheden van pH van 7-9 en temperatuur van 37 °C. De toevoeging van EDTA aan trypsine-oplossing als chelerend middel bindt calcium en magnesium in een zes-tandstructuur, wat de cel-cel-adhesie kan verzwakken en de verwerving van gehydrolyseerde gerichte peptidebindingen door trypsine kan verbeteren.

De belangrijkste toepassing van trypsine in de begindagen in het biofarmaceutische veld was de productie van insuline, en al snel werd het ook gebruikt in andere celcultuurvelden. Dierlijke pancreasenzymen worden vaak gebruikt in serumcultuur, en de samenstelling en concentratie van trypsine die aan verschillende cellen wordt toegevoegd, zijn verschillend.

Toepassingen

1. productie van insuline en geïnactiveerde vaccins;
2. Isolatie en kweek van weefselcellen;
3. Klinisch en chirurgisch gebruik;
4. Verwerkingshulpmiddelen in de voedingsmiddelenindustrie;

Recombinant trypsine (vrij van dierlijke oorsprong)

Producteigenschappen

Recombinant trypsine is een enzym dat wordt geproduceerd met behulp van genetische manipulatietechnologie, dat de voordelen heeft van goede stabiliteit, hoge zuiverheid en geen dierlijke oorsprong. In het productieproces van moderne biofarmaceutica kan het gebruik van grondstoffen met dierlijke oorsprong potentiële virusbronnen die zoönotische ziekten veroorzaken in het product brengen, zoals BSE van de gekkekoeienziekte, mond-en-klauwzeervirus, enz. Om de bron van vervuiling te verminderen, wordt trypsine gesynthetiseerd met behulp van genetische manipulatietechnologie, die het risico op virusbesmetting oplost dat kan worden veroorzaakt door traditionele varkens- of rundertrypsine.

Recombinant trypsine wordt meestal recombinant tot expressie gebracht door recombinant E. coli of gistsysteem en gezuiverd door multi-step chromatografie, zonder heterozyme contaminatie zoals chymotrypsine. Recombinant trypsine heeft dezelfde eigenschappen als natuurlijk geëxtraheerde trypsine, met een aminozuursequentie die homoloog is aan de porcine trypsinesequentie, die specifiek de carboxylgroepen in lysine- en arginineresiduen in de polypeptideketen splitst.Omdat de vervuiling niet van dierlijke oorsprong is en het product zeer zuiver is, kent het een breed scala aan toepassingen in de farmaceutische ontwikkeling, biochemisch onderzoek, proteomics en andere vakgebieden.

De belangrijkste recombinante trypsine op de markt is een recombinante porcine trypsine die tot expressie wordt gebracht in Escherichia coli of gist met behulp van DNA-recombinante technologie, en de aminozuursequentie is volledig consistent met porcine trypsine, met dezelfde activiteit en specificiteit als natuurlijke trypsine. Het bestaat uit 223 aminozuren en bevat 6 paren disulfidebindingen. Het enzym bevat twee actieve vormen van trypsine: α-trypsine en β-trypsine. De activiteit ervan wordt geremd door serineproteaseremmers zoals PMSF en TLCK, metaalionchelatoren zoals EDTA, enz. Recombinante trypsine wordt gebruikt in serumvrije culturen en net als trypsine worden verschillende cellen toegevoegd met verschillende componenten en concentraties trypsine.

Toepassingen

1. productie van vaccins en recombinante insuline;
2. Voorbereiding van weefselmonsters voor celanalyse;
3. Immuunceltherapie;
4. Biofarmaceutische productie;
5. Eiwitsequentie, structuur en omics-onderzoek

Gedetailleerde vergelijking van producten

producten	Niet-recombinant trypsine (afkomstig van dieren)	Recombinant trypsine (vrij van dierlijke oorsprong)
Item	40123ES (fenolrood(-), EDTA(+)) 40124ES (fenolrood (-), EDTA (-)) 40126ES (fenolrood (+), EDTA (-)) 40127ES (fenolrood (+), EDTA (+))	40512ES 20416ES (MS-SAFE)
Bron	Afkomstig uit de alvleesklier van runderen, varkens en schapen	colibacillus (40512ES) Pichia pastoris (20416ES)
Beveiliging	Besmetting met potentiële ziekteverwekkers	Geen exogene virale besmetting
Zuiverheid	Meer dan 90% van de 1:250 trypsine-oplossing is onzuiverheid	Hoge zuiverheid (β-trypsine ≥ 70%, α-trypsine≤20%）
Type spijsverteringscel	De meeste aaneengesloten sterk aanhechtende cellijnen	De meeste aaneengesloten sterk aanhechtende cellijnen
Chymotrypsine limiet	Niet meer dan 50 eenheden chymotrypsine per 2500 eenheden trypsine.	Geen myrosinase en andere onzuivere enzymverontreiniging
Specifieke activiteit	≥2500 USP-eenheden/mg eiwit	≥3800 USP-eenheden/mg eiwit
Spijsverteringseffect	instabiliteit	Sterke spijsvertering en lage hoeveelheid enzymen
Zelfsnijdende snelheid	Het is gemakkelijk om zelf te snijden en zelfsnijdende fragmenten te produceren, wat de resultaten van massaspectrometrie-analyse beïnvloedt	Het is gemakkelijk om zelf te snijden en zelfsnijdende fragmenten te produceren, wat de resultaten van massaspectrometrie-analyse beïnvloedt
Opgeloste vloeistof	HBSS-oplossing met of zonder Ca2+, Mg2+	HBSS-oplossing met of zonder Ca2+ en Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL (20416ES)
Celoverleving	Normaal	Normaal
Of vriezen en ontdooien nodig is	Ja	Ja

Naast de meest gebruikte trypsine bij celvertering, zijn er nog veel andere soorten spijsverteringsenzymproducten die gebruikt kunnen worden, zoals de volgende.

Over het toepassingsgebied van collageenase

Collageenase is een peptidase-endonuclease die specifiek de Pro-X-Gly-Pro-sequentie kan herkennen en de peptidebinding tussen het neutrale aminozuur (X) en glycine (Gly) in de sequentie kan verbreken. Collageenase is de enige protease die de natuurlijke collageenfibrillen met een supergewonden driestrengsstructuur kan afbreken en effectief andere eiwitten, polysachariden en lipiden in de extracellulaire matrix van bindweefsel en epitheelweefsel kan hydrolyseren, waardoor dit product zeer geschikt is voor weefselvertering.

1. Collageenase I, algemeen gebruikt als preparaat van epitheelcellen, lever-, long-, vet- en bijnierweefselcellen;
2. Collageenase II, dat wordt gebruikt voor de bereiding van weefselafgeleide cellen zoals hart-, bot-, spier-, lever-, schildklier- en kraakbeencellen;
3. Collageenase III, veelgebruikt bij de bereiding van borstcellen;
4. Collageenase IV wordt vaak gebruikt voor de bereiding van pancreaseilandcellen of voor celbereidingsexperimenten waarbij de receptorintegriteit behouden moet blijven.
5. Collageenase V., geschikt voor de isolatie van pancreaseilandcellen en bindweefselcellen.

Over het toepassingsgebied van samengestelde trypsine

Accutase is een celdigestie die proteolytische en collageenactiviteit bevat en een perfecte vervanging is voor trypsine-EDTA-digesties voor het verteren van cellen uit conventionele weefselkweekvaten en aanhechtende kweekvaten. Accutase is geschikt voor weefseldissociatie en celisolatie, omdat de geïsoleerde cellen intacte oppervlakteantigenen behouden en geen dierlijke of bacteriële componenten bevatten, wat kan voldoen aan de vereisten van latere experimenten zoals celoppervlaktelabeling, virale groeianalyse, flowcytometrie en bioreactorgerelateerde assays.

Toepassingsgebieden voor pancreasenzymvervangers

PerfCell Tryzyme™ Express-enzymproducten zijn zeer zuiver, hebben weinig celschade, zijn mild in de vertering en kunnen stabiel worden bewaard bij kamertemperatuur, waardoor ze een ideaal verteringsenzym zijn voor verschillende cellijnculturen. Dit type product vereist geen gebruik van trypsineremmers voor inactivering en bevat geen dierlijke oorsprong, wat vriendelijker is voor sommige serumvrije groei-adherente celexperimenten.

Over het toepassingsgebied van dispase

Dispase II Dispase II, een niet-specifieke metalloproteïnase, wordt veel gebruikt in de celbiologie om afzonderlijke cellen te isoleren uit verschillende weefsels of organen, en wordt gebruikt in daaropvolgende celculturen, zoals isolatie van primaire cellen, celpassage, enz., en kan ook worden gebruikt om celaggregatie te elimineren die optreedt tijdens suspensiecelcultuur. Vergeleken met andere proteasen die veel worden gebruikt in de celbiologie (bijv. trypsine, collageenase, pronase, enz.), heeft dit enzym de volgende voordelen:

1. Snelle, effectieve en milde celverteringsenzymen, met weinig schade aan de cellen, en die de integriteit van celmembranen kunnen behouden;
2. Afkomstig van bacteriën, geen mycoplasma of andere dierlijke virusbesmetting;
3. Hoge stabiliteit, niet beïnvloed door temperatuur, pH en serumcomponenten;
4. Het kan worden gebruikt voor de isolatie van verschillende soorten weefsels en cellen.

Gerelateerde productaanbevelingen

Catalogusnummer	Productnaam	Maat
40123ES60	PerfCel™l Trypsine-EDTA (0,25%), fenolrood	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Trypsine - geen EDTA (0,25%), geen fenolrood	100 ml
40126ES60	PerfCell™ Trypsine (0,25%), fenolrood	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Trypsine-EDTA (0,25%), fenolrood	100 ml
40101ES25	Trypsine 1:250 (poeder)	25 gram
40512ES10/60	PerfCell™ Recombinant Trypsine (poeder)	10mg/100mg
20416ES60	Recombinant trypsine (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40506ES60	BESCHERMING	100 ml
40104ES60/80	Dispase II	100mg/1g