Achtergrond – Wat is ROS
Reactieve zuurstofsoorten (ROS) zijn een normaal product van het celmetabolisme: een zuurstofbevattende bioactieve molecule, waaronder peroxide, superoxide, hydroxylradicaal, singuletzuurstof en α-zuurstof, enz., die een belangrijke regulerende rol spelen in de signaalroutes en transcriptie van cellen, zoals apoptose, autofagie, veroudering, kanker, enz.
Effect van ROS-concentratie op cellen – waarom ROS detecteren?
Bij lage niveaus van reactieve zuurstofsoorten is ROS betrokken bij intracellulaire signalering en regulatie als "redoxboodschappers". Echter, onder omgevingsstress (bijv. ioniserende straling, blootstelling aan hitte, ultraviolette straling, hypoxie, etc.) nemen ROS-niveaus dramatisch toe, wat DNA-schade kan veroorzaken, genexpressie kan remmen, kan leiden tot misvouwing van eiwitten en zelfs de eiwitsynthese kan beïnvloeden, wat ernstige schade aan cellulaire structuren kan veroorzaken, wat bekend staat als oxidatieve stress.
Zodra de ROS-niveaus de capaciteit van de endogene antioxidante verdedigingsmechanismen overschrijden, wordt de redoxbalans verstoord. Dit leidt tot structurele of conformationele veranderingen in DNA, lipiden, eiwitten en uiteindelijk tot celdood.
ROS-niveau is een belangrijk signaal van celschade veroorzaakt door normale fysiologische functies en omgevingsfactoren, en de detectie van intracellulair ROS-niveau is van groot belang voor het begrijpen van de signaalpaden en mogelijke werkingsmechanismen van sommige geneesmiddelen. Daarom speelt de selectie van geschikte probes voor de detectie van ROS een belangrijke rol in onderzoek naar ziektemechanismen en geneesmiddelenscreening.
Hoe werkt ROS-detectie?
De Reactieve zuurstofspecies-assaykit (CAT# 50101ES01) is de meest gebruikte methode voor het kwantificeren van intracellulaire niveaus van reactieve zuurstofsoorten op basis van veranderingen in de fluorescentie-intensiteit van de fluorescerende kleurstof DCFH-DA (2,7-dichloordihydrofluoresceïnediacetaat).
DCFH-DA zelf heeft geen fluorescentie en kan vrij door het celmembraan heen gaan, en na het binnengaan van de cel kan het worden gehydrolyseerd door intracellulaire esterasen om DCFH te produceren. DCFH kan echter niet door het celmembraan heen dringen, waardoor het voor de probe gemakkelijk is om te worden gelabeld en geaggregeerd in de cel. Intracellulaire reactieve zuurstofspecies zijn in staat om niet-fluorescerende DCFH te oxideren om fluorescerende DCF te vormen. De intensiteit van DCF groene fluorescentie is recht evenredig met het niveau van intracellulaire reactieve zuurstofspecies, en het niveau van intracellulaire reactieve zuurstofspecies kan worden gekend door de fluorescentie van DCF te detecteren.
Onder de omstandigheden van een excitatiegolflengte van 488 nm en een emissiegolflengte van 525 nm werd DCF-fluorescentie gedetecteerd met behulp van een fluorescentiemicroscoop, laserconfocale microscoop, fluorescentiespectrofotometer, fluorescentiemicroplate-lezer, flowcytometer, enz., om het niveau van intracellulaire reactieve zuurstofsoorten te bepalen.
Literatuur gepubliceerd door klanten die dit product gebruiken (enkele voorbeelden)
In september 2022 zijn er in totaal 164 artikelen gepubliceerd in de ROS-reactive oxygen species detection kit (50101ES01), met een totale impactfactor van 913,72.
Effect van ROS-productie op macrofaagpolarisatie en het doden van tumorcellen (PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMC-ID: PMC8931093PMC-ID: PMC9353410.
Veelgestelde vragen
Vraag 1: Welke monsters zijn geschikt voor ROS-testen?
A1: Het wordt over het algemeen gebruikt voor de detectie van zoogdiercellen en is alleen geschikt voor de detectie van reactieve zuurstofsoorten in levende cellen of in vivo.
Vraag 2: Is de ROS-testkit geschikt voor detectie in serum of plasma?
A2: Niet geschikt voor de detectie van ROS in serum of weefselhomogenaat. Verse weefselbereide enkelvoudige celsuspensies kunnen worden geprobeerd.
V3: Kunnen planten of bacteriën worden gedetecteerd?
A3: Het is alleen geschikt voor de detectie van reactieve zuurstofsoorten in levende cellen of in vivo, omdat de halfwaardetijd van hydroxylradicalen en superoxideradicalen van zuurstof erg kort is, en het is alleen geschikt voor de detectie van levende cellen. Planten of bacteriën, die kunnen worden gebruikt voor detectie na de bereiding van protoplasten, deze kit kan geen ROS in vivo detecteren.
Vraag 4: Hoe kan ik een te hoge fluorescentieachtergrond vermijden?
A4: Zorg ervoor dat u na de incubatie van de probe alle resterende probes die niet in de cel zijn gekomen, wegspoelt.
V5: Kan ik de hoeveelheid ROS in normale cellen detecteren?
A5: Het gehalte aan reactieve zuurstofsoorten in normale cellen is erg laag en het detectie-effect is mogelijk niet erg goed.
V6: De negatieve en positieve fluorescentiewaarden zijn hetzelfde, wat is er aan de hand?
A6: Dit kan worden veroorzaakt doordat de concentratie van de toegevoegde sonde te hoog is. Het wordt aanbevolen om de sondeconcentratie met 5-7,5 μM te verlagen en de incubatietijd te verlagen naar 15-20 min.
V7: De fluorescentie van de positieve controle is zwak, wat is er aan de hand?
A7: De positieve controle Rosup was gewoonlijk geconcentreerd op 100 μM, en een significante toename in reactieve zuurstofspecies werd waargenomen 30 min-4 h na stimulatie. Het effect van de positieve controle van reactieve zuurstofspecies kan sterk variëren tussen verschillende cellen. Als de toename in ROS niet wordt waargenomen binnen 30 minuten na stimulatie, kan de inductietijd worden verlengd of kan de concentratie van Rosup op passende wijze worden verhoogd.
A8: Dezelfde sonde, niet verdeeld, de eerste 5 keer is het effect erg goed, deze keer is het niet geverfd, wat is er aan de hand?
Q8: 1. De celtoestand is niet goed, wat resulteert in een lage kleuringsefficiëntie; 2. De inductietijd van het positieve medicijn is te kort en het niveau van reactieve zuurstofsoorten kan aanzienlijk worden verhoogd door incubatie bij 37 °C in het donker gedurende 30 min-4 uur; 3. De sonde is meer dan 4 keer ingevroren en ontdooid, de kleuringsefficiëntie is verminderd en het fluorescentiesignaal is onstabiel (soms sterk, soms zwak en gemakkelijk te doven). Het wordt aanbevolen om de sondes te aliquoteren en te bewaren in een vriezer van -20 °C, beschermd tegen licht, om herhaalde vries-dooicycli te voorkomen.
V9: Welke instrumenten kunnen worden gebruikt voor het testen?
A9: Fluorescentiemicroscopen, laserconfocale microscopen, fluorescentiespectrofotometers, fluorescentiemicroplate-lezers, flowcytometers, enz. kunnen fluorescentiewaarden detecteren.
Wetenschappelijke onderzoekspublicaties gepubliceerd door klanten die dit product gebruiken (gedeeltelijk)
[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Microalgen-gebaseerde hydrogel voor inflammatoire darmziekte en de bijbehorende angst en depressie. Adv Mater. 2024 26 jan: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Epub vóór druk. PMID: 38277492. ALS: 29.4
[2] Zhang M, et al. Conscriptie van immuuncellen door licht-activeerbare silencing NK-afgeleid exosoom (LASNEO) voor synergetische tumoruitroeiing. Adv Sci (Weinh). 2022 aug;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 4 juni. ALS: 16.806
[3] Zhang D, et al. Op microalgen gebaseerde orale microdragers voor homeostase van de darmflora en bescherming van de darmen bij kanker radiotherapie. Nat Commun. 2022 17 mrt;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. ALS: 14.919
[4] Jiao D, et al.Biocompatibele gereduceerde grafeenoxide gestimuleerde BMSCs induceren versnelling van botremodellering en orthodontische tandverplaatsing door promotie van osteoclastogenese en angiogenese. Bioact Mater. 2022 6 feb; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. ALS: 14.593
[5] Guo G, et al. Ruimteselectieve chemodynamische therapie van CuFe5O8-nanocubes voor implantaatgerelateerde infecties. ACS Nano. 2020 27 okt;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 2020 22 sep. PMID: 32931252. ALS: 14.588
[6] Yang C, et al. Rode fosfor versierde TiO2 nanorod gemedieerde fotodynamische en fotothermische therapie voor niercelcarcinoom. Klein. 2021 jul;17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 jun 19. PMID: 34145768. ALS: 13.281
[7] Xiaolu Chen, et al. Metaal-fenolische netwerken-ingekapselde cascade-amplificatie-afgiftenanodeeltjes overwinnen resistentie tegen kankermedicijnen via gecombineerde uithongering/chemodynamische/chemotherapie. Chemical Engineering Journal. 2022 aug; 442:136221. ALS: 13.273
[8] Hao Ding, et al. Mesenchymale stamcellen ingekapseld in een reactieve zuurstofspecies-vangende en O2-genererende injecteerbare hydrogel voor myocardinfarctbehandeling. Chemical Engineering Journal. 2022.133511:1385-8947. ALS: 13.273
[9] Yu H, et al. Triple cascade nanokatalysator met laser-activeerbare O2-toevoer en fotothermische verbetering voor effectieve katalytische therapie tegen hypoxische tumoren. Biomaterialen. 2022 Jan; 280:121308. PMID: 34896860. ALS: 12.479
[10] Sun D, et al. Een op cyclodextrine gebaseerde nanoformulering bereikt co-afgifte van ginsenoside Rg3 en quercetine voor chemo-immunotherapie bij colorectale kanker. Acta Pharm Sin B. 2022 Jan;12(1):378-393. PMID: 35127393. ALS: 11.614
[11] Xiong Y, et al. Tumorspecifieke activeerbare biopolymeer nanodeeltjes gestabiliseerd door hydroxyethylzetmeel prodrug voor zelfversterkte coöperatieve kankertherapie. Theranostics. 2022 1 jan;12(2):944-962. PMID: 34976222. ALS: 11.556
[12] Gao J, et al. Mitochondrion-gerichte supramoleculaire "nano-boot" remt gelijktijdig duale energiestofwisseling voor tumorselectieve en synergetische chemoradiotherapie. Theranostics. 2022 1 jan;12(3):1286-1302. PMID: 35154487. ALS: 11.556
[13] Zhong D, et al. Calciumfosfaat-gemanipuleerde fotosynthetische microalgen om hypoxische tumoren te bestrijden door in-situ-modulerende hypoxie en cascade-radiofototherapie. Theranostics. 2021 22 jan;11(8):3580-3594. PMID: 33664849. ALS: 11.556
[14] Sun J, et al. Cytotoxiciteit van gestabiliseerde/gestolde vliegas van verbranding van vast gemeentelijk afval. J Hazard Mater. 2022 15 feb;424(Pt A):127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Epub 2021 29 sep. PMID: 34879564. ALS: 10.588
[15] Zhu C, et al. Multifunctionele thermogevoelige hydrogel voor het moduleren van de micro-omgeving bij artrose door macrofagen te polariseren en RONS weg te vangen. J Nanobiotechnology. 2022 7 mei;20(1):221. ALS: 10.435
[16] Pan X, et al. Zinkoxide nanosfeer voor waterstofsulfide-opvang en ferroptose van colorectale kanker. J Nanobiotechnology. 2021 27 nov;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. ALS: 10.435
[17] He J, et al. Goud-zilver nanoshells bevorderen wondgenezing van infecties met resistente bacteriën en maken monitoring mogelijk via oppervlakteverbeterde Raman-verstrooiingsbeeldvorming. Biomaterialen. 2020 mrt; 234:119763. PMID: 31978871. ALS: 10.317
[18] Cheng Q, et al. Nanotherapeutica verstoren cellulaire redoxhomeostase voor sterk verbeterde fotodynamische therapie. Biomaterialen. 2019 dec; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 17 sep. PMID: 31557591. ALS: 10.273
[19] Zhong D, et al. Laser-getriggerde geaggregeerde kubieke α-Fe2O3@Au nanocomposieten voor magnetische resonantiebeeldvorming en fotothermische/verbeterde stralingssynergetische therapie. Biomaterialen. 2019 okt; 219:119369. PMID: 31351244. ALS: 10.273
[20] Sun C, et al. Selenoxide-eliminatie manipuleert de oxidatieve stress om de antitumoreffectiviteit te verbeteren. Biomaterials. 2019 dec; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 sep 24. PMID: 31569018. ALS: 10.273
Aanbevolen producten
| Productnaam | Catalogusnummer | Maat |
| 50101ES01 | 1 kit (1000 testen) |