1. Hoe voorkom je dat RNA wordt afgebroken?

2. Wat zijn RNase-remmers?

3. Wat doet RNase-remmer?

4. Wat zijn de kenmerken van een muizen-RNase-remmer?

5. Gerelateerde producten en prestaties

6. Gerelateerde producten

7. Veelgestelde vragen

1. Hoe voorkom je dat RNA wordt afgebroken?

RNase speelt een belangrijke rol in het metabolisme van nucleïnezuur en kan in bijna elk type prokaryoot en eukaryoot worden aangetroffen. RNase wordt afgescheiden in lichaamsvloeistoffen zoals tranen, speeksel en zweet om zich te verdedigen tegen de invasie van micro-organismen, en RNase is ook aanwezig in huidresten. De belangrijkste bron van RNase in de meeste omgevingen zijn echter micro-organismen, namelijk bacteriën en schimmels. RNase is buitengewoon moeilijk te inactiveren en vertoont een hoge stabiliteit, hittebestendigheid, zuurbestendigheid en alkalibestendigheid. Na thermische denaturatie kan het snel zijn oorspronkelijke structuur terugkrijgen. RNase is doorgaans zeer actief en is breed verspreid in zowel eukaryotische als prokaryotische cellen en weefsels. Het RNA in het monster kan volledig worden afgebroken met slechts een spoor van RNase-verontreiniging. RNase-verontreiniging in onderzoeken kan afkomstig zijn van zowel interne als externe bronnen. RNase in cellen is voornamelijk een endogene bron van verontreiniging, terwijl exogene bronnen experimentele benodigdheden, de laboratoriumomgeving en de experimentatoren zelf omvatten. RNases, met name leden van de RNase A-familie, zijn kleine, compacte eiwitten die een paar cysteïneresiduen bevatten die in staat zijn om veel intramoleculaire disulfidebindingen te vormen. Na terugkeer naar kamertemperatuur, bij afwezigheid van een denaturerend middel, zal de gedenatureerde RNase zijn natuurlijke structuur en sommige functies herstellen. Daarom behouden RNases aanzienlijke activiteit na herhaalde vries-dooicycli, zelfs na autoclaveren. De stabiele aard van deze enzymen maakt ze resistent tegen veel decontaminatiemethoden, die doorgaans agressieve chemische methoden vereisen om RNases van oppervlakken en oplossingen te verwijderen.

Om de afbraak van kwetsbaar RNA te voorkomen, moeten er speciale voorzorgsmaatregelen worden genomen bij het werken met RNA. Om exogene RNase te controleren, moet de operator handschoenen dragen tijdens het experiment en handschoenen verwisselen na het aanraken van de huid, deurknoppen en het oppervlak van gewone voorwerpen. En de operator moet een speciaal pipetpistool gebruiken voor RNA-bewerking en RNase-vrije wandpunten, centrifugebuizen, verbindingen en reagentia gebruiken. Blijf uit de buurt van of bedek ventilatiegaten en open ramen, en gebruik minder bereisde gebieden als RNase-vrije gebieden. En voer tijdens RNA-extractie en -analyse geen andere experimenten uit die RNase-verontreiniging kunnen veroorzaken.
De methode om de activiteit van endogene RNase te remmen is om het monster te bewaren. Nadat het weefsel is bemonsterd, mag het RNA niet direct worden geëxtraheerd. In plaats daarvan moet het snel worden ingevroren en worden opgeslagen in een omgeving van -80 °C met vloeibare stikstof op tijd, en het experiment moet zo snel mogelijk worden uitgevoerd om de afbraak van RNA te minimaliseren.RNase-remmers worden aan het cellysaat toegevoegd om cellen tegelijkertijd af te breken en RNase te inactiveren. Zo wordt de activiteit van RNase die vrijkomt bij het afbreken van cellen geminimaliseerd. Alle reagentia en apparatuur moeten speciaal worden behandeld om RNases te inactiveren vóór gebruik.

Daarnaast kunnen RNA-remmers worden gebruikt om de RNase-activiteit te remmen en de afbraak van RNA door RNase te voorkomen. Er zijn verschillende soorten RNA-remmers:

• Diethylpyrocarbonaat (DEPC): Dit is een sterke maar niet complete RNase-remmer. Het denatureert het eiwit door de combinatie van de imidazolring van histidine in de actieve gengroep van RNase, waardoor de activiteit van het enzym wordt geremd.
• Guanidine-isothiocyanaat: Momenteel wordt het beschouwd als de meest effectieve RNase-remmer. Het kan ook RNase inactiveren tijdens het lyseren van weefsel, wat de celstructuur kan vernietigen en nucleïnezuur van nucleoproteïne kan scheiden. Het heeft ook een bepaald effect op RNase. Sterk denaturerend effect.
• Vanadylribonucleosidecomplex: een complex gevormd door vanadiumoxide-ionen en nucleosiden, die zich met RNase kunnen verbinden om een ​​overgangsanaloog te vormen, waardoor de activiteit van RNase vrijwel volledig wordt geremd.
• Proteïneremmer van RNase (RNasin): een zuur glycoproteïne dat wordt gewonnen uit rattenlever of menselijke blastodiscus. RNasin is een niet-competitieve remmer van RNase die zich aan verschillende RNases kan binden, waardoor deze wordt geïnactiveerd.
• Overige: SDS, ureum, diatomeeënaarde, etc. hebben ook een zekere remmende werking op RNase.

2. Wat zijn RNase-remmers?

RNase-remmers zijn een klasse van stoffen die de activiteit van RNase kunnen remmen. Veelvoorkomende RNase-remmers zijn onder andere Diethyl Pyrocarbonate (DEPC), Guanidine Isothiocyanate, Ribonucleoside Vanadyl Complexes (RVC) en proteïne-remmers van RNase (RNasin). Onder hen hebben DEPC en guanidine-isothiocyanaat een bepaalde toxiciteit, en de RVC heeft een remmend effect op PCR-polymerase, wat niet bevorderlijk is voor latere experimenten. RNasin is niet toxisch en is een niet-competitieve remmer van RNase, die zich kan binden aan verschillende RNases om ze te inactiveren.

3. Wat doet RNase-remmer?

RNase-remmers worden vaak gebruikt als voorzorgsmaatregel bij enzymatische manipulaties van RNA om dergelijke verontreinigingen te remmen en te controleren. RNasin is een zuur glycoproteïne dat wordt geëxtraheerd uit rattenlever of menselijk blastoderm, dat specifiek kan binden aan RNase op een niet-covalente manier om een ​​complex te vormen, wat RNase-inactivatie veroorzaakt en zo de integriteit van RNA beschermt. Momenteel helpt de RNase-remmer om RNA-degradatie te voorkomen in toepassingen zoals cDNA-synthese, RT-PCR, in vitro transcriptie-/translatiereacties of RNA-zuivering.

4. Wat zijn de kenmerken van een muizen-RNase-remmer?

Recombinante muizen-RNase-remmers bevatten geen 2 oxidatiegevoelige cysteïnen die wel in RNase-remmers van menselijke oorsprong zitten. Daarom heeft muizen-RNase-remmer een hoge antioxidatieactiviteit en is stabieler voor experimenten met lage DTT. Bovendien bevat muizen-RNase-remmer van Yeasen heeft de volgende kenmerken:
1) Algemene RNase-remming: Muizen-RNase-remmer van Yeasen remt specifiek RNase A, RNase B, RNase C, enzovoort.
2) Veelzijdige reactieomstandigheden: RNase-remmer is actief bij pH 5,0-9,0 en 25℃-55℃, wat geschikt is voor thermostabiele reverse transcriptase.
3) Meerdere vervolgexperimenten mogelijk: Er wordt geen remming van de polymerase-activiteit waargenomen wanneer RNase-remmer wordt gebruikt met Taq DNA-polymerase, AMV of M-MuLV reverse transcriptase of faag-RNA-polymerasen (SP6, T7 of T3).
4) Massaproducten: een enkele productiecapaciteit van 2 miljard U is nuttig voor kostenbeheer, omdat het zorgt voor producthomogeniteit, leveringsstabiliteit en tijdigheid.
5) Consistentie van batch tot batch: expressie van volwassen eiwitten en zuiveringsplatform via het kwaliteitsmanagementsysteem ISO13485, kwaliteitscontroletesten aan de hand van kwaliteitsvereisten om de productstabiliteit tussen batches te garanderen.

5. Gerelateerde producten en prestaties

A. RNase-remmer blokkeert RNase-activiteit

1 μg HEK-cel totaal RNA, 1 μl RNase-remmer kan 5 ng RNase effectief remmen.

Figuur 1. Remmende werking van muizen-RNase-remmer.

B. RNase-remmer overtreft buitenlandse producten in qPCR-testen

De remmende impact van de Yeasen en R* Company muis-afgeleide RNase-remmers (MRI) werden gemeten met behulp van de qPCR-techniek onder identieke experimentele omstandigheden, en de RNase-remmer van de Yeasen Muizenbron remde RNase A efficiënt in het systeem. De impact van de remming was superieur aan die van concurrenten.

Figuur 2. R* MRI RNase-remmingstest

Let op: De curven in de figuur van links naar rechts zijn: positieve controle (alleen RNA, geen RNase en MRI), 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI en negatieve controle (RNA + RNase, geen MRI).

Figuur 3. Yeasen MRI RNase-remmingstest

Let op: De curven in de figuur van links naar rechts zijn: Positieve controle (alleen RNA, geen RNase en MRI), 80 U MRI, 60 U MRI, 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI, Negatieve controle (RNA+RNase, geen MRI).

Figuur 4. De CT-RT-qPCR-resultaten van Yeasen MRI en R* MRI

6. Gerelateerde producten

De gerelateerde producten die Yeasen kunnen worden geleverd, worden weergegeven in Tabel 1:

Tabel 1.Lijst met producten

7. Veelgestelde vragen

V1: Zit er RNase in de muizen-RNase-remmer?
A: Elk reagens detecteert RNase-activiteit om ervoor te zorgen dat de muizen-RNase-remmer geen RNase-verontreiniging veroorzaakt.
Vraag 2: Hebben muizen-RNase-remmers invloed op latere PCR-experimenten?
A: Het zal geen effect hebben. Elke batch Murine RNase-remmer is vrij van genomische contaminatie na kwaliteitstesten en kan worden gebruikt in RT-PCR en RT-qPCR-onderzoek.
V3: Wordt de muizen-RNase-remmer geïnactiveerd?
A: Remmers worden geïnactiveerd bij temperaturen boven de 65°C. Ook krachtig roeren zorgt voor inactivatie.
Vraag 4: Welke voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen bij het gebruik van een muizen-RNase-remmer om het reactiesysteem voor te bereiden?
Antwoord: Bij het voorbereiden van het systeem kan eerst een RNase-remmer worden toegevoegd, voordat andere componenten worden toegevoegd die bronnen van RNase-verontreiniging kunnen introduceren.
V5: Heeft muizen-RNase-remmer endonuclease- en exonuclease-activiteit?
Antwoord: Er is geen endonuclease- en exonuclease-activiteit, wat bijdraagt ​​aan een betere productopbrengst.

Over het lezen:

Muizen-RNase-remmers ——Elimineren succesvol RNase-besmetting en behouden RNA

Selectie van reverse transcriptase

Yeasen Hittegevoelige UDG: eenvoudige controle over aerosolvervuiling

Hoogwaardige isotherme versterkingsgrondstoffen - Maken RT-LAMP gevoeliger en sneller!