Reverse transcriptase, ook bekend als RNA-afhankelijke DNA-polymerase, is een DNA-polymerase-enzym dat enkelstrengs RNA transcribeert in DNA. De prestaties van reverse transcriptase hebben direct invloed op de uiteindelijke prestaties van moleculaire diagnostische reagentia. Als reactie op de pijnpunten van fabrikanten van moleculaire diagnostische reagentia, Yeasen heeft de directionele transformatie op reverse transcriptase uitgevoerd. Reverse transcriptase heeft uitstekende prestaties en wordt goed ontvangen door klanten!

1. Wat is de functie van reverse transcriptase?
2. Hoe kies je een reverse transcriptase?
3. Waarom kiezen Yeasen's reverse transcriptase?
4. Gerelateerde producten en prestaties
5. Gerelateerde producten

1. Wat is de functie van reverse transcriptase?

Reverse transcriptase is een RNA-afhankelijke DNA-polymerase. Het kan het template-RNA transcriberen en vormt complementair DNA (cDNA). Enkelstrengs cDNA wordt omgezet in dubbelstrengs DNA met behulp van DNA-polymerase. Daarom worden reverse transcriptases vaak gebruikt om het niveau van mRNA-synthese te kwantificeren in combinatie met de polymerasekettingreactietechniek, RT-PCR genaamd. Kwantitatieve RT-PCR-tests worden vaak gebruikt bij de diagnose van ziekten. Daarom speelt reverse transcriptase een belangrijke rol in wetenschappelijk onderzoek en praktische toepassing.

2. Hoe kies je een reverse transcriptase?

Veel voorkomende reverse transcriptases zijn M-MLV en AMV, waarvan M-MLV beter is dan AMV. Maar conventionele RT-enzymen hebben twee actieve sites, één die de polymerase-activiteiten uitvoert en een andere die de ribonuclease H-activiteit uitvoert. RNase H is een endonuclease die in staat is om de RNA-groep van de DNA-RNA-hybridenfamilie af te breken. Daarom is reverse transcriptase zonder RNase H-activiteit gunstig voor cDNA-synthese. Daarnaast is het gebruik van een thermostabiele versie van RT gunstig voor het verlagen van de niet-specifieke nucleïnezuuramplificatie en het minimaliseren van de impact van complexe secundaire structuren.

3. Waarom kiezen Yeasen's reverse transcriptase?

Yeasen heeft directionele modificatie uitgevoerd op reverse transcriptase, die RNase H-activiteit verwijdert, waardoor het vermogen van cDNA-synthese wordt verbeterd. Gebruikmakend van proteïne-evolutietechnologie om de thermostabiliteit van reverse transcriptie te verbeteren.

Yeasen's reverse transcriptase heeft niet alleen een sterk synthesevermogen, maar ook een sterk tolerantievermogen. Bovendien, Yeasen heeft strenge eisen aan kwaliteit. Het is de beste keuze voor reverse transcriptase.

4. Gerelateerde producten en prestaties

4.1 Bestand tegen hoge temperaturen van 65°C

Met behulp van 500 ng 293T-cel totaal RNA als template werd reverse transcriptie uitgevoerd bij 42°C-65°C met behulp van Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Neem 1 μL cDNA als template om het TFRC-gen (4,4 kb) te amplificeren.

Figuur 1. Voer omgekeerde transcriptie uit bij 42°C-65℃

4.2 Compatibel met complexe sjablonen

De reactietemperatuur van 55°C kan voldoen aan de omgekeerde transcriptie van conventionele sjablonen en secundaire structuursjablonen, en de reactietemperatuur van sjablonen met een hoge GC kan op passende wijze worden verhoogd tot 65°C.

Figuur 2.Geschikt voor GC-rijke sjablonen en secundaire structuursjablonen

4.3 Uitstekende extensieprestaties

Met behulp van 500ng totaal RNA van 293T-cellen als template en Oligo(dT) als primer, werd cDNA gesynthetiseerd met behulp van Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Neem 1 μL cDNA als template om 500bp van 5' van het DY1C1N1-gen (19,9 kb) te amplificeren. De resultaten toonden aan dat Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase cDNA tot 19,8 kb kan synthetiseren.

Figuur 3. Er kan maximaal 19,8 kb cDNA worden gesynthetiseerd

4.4 Snelle synthese

Met behulp van het RNA van 293T-cellen als template werd reverse transcriptie uitgevoerd volgens de standaardprocedure in de handleiding, en de reverse transcriptietijd werd ingesteld op respectievelijk 5, 10, 15, 30, 45 en 60 minuten. Hifair™ III Reverse Transcriptase kan een 6kb cDNA binnen 5 minuten synthetiseren, en de specificiteit en opbrengst zijn superieur aan die van het V-merk.

Figuur 4. 6kb cDNA kan binnen 5 minuten worden gesynthetiseerd

4.5 Breed lineair bereik

Met behulp van 5pg-5μg totaal RNA van 293T-cellen als template, werd cDNA gesynthetiseerd met behulp van Hifair™ III Reverse Transcriptase. 1 μL cDNA werd gebruikt als template en qPCR werd uitgevoerd op de vier genen, en de resultaten toonden aan dat de amplificatie-efficiënties allemaal tussen 98% en 100,10% lagen. Het toont aan dat cDNA efficiënt kan worden gesynthetiseerd in een breed lineair bereik van templates.

Figuur 5. cDNA kan efficiënt worden gesynthetiseerd in een breed scala aan templates

4.6 Strikte kwaliteitscontrole

Om de stabiele prestaties van Yeasen's omgekeerde enzym, Yeasen implementeert strikt de vereisten in het productieproces om het productieproces te stabiliseren en batchstabiliteit te garanderen. Tegelijkertijd wordt de kwaliteitscontrole versterkt om residuen te detecteren, waaronder exonuclease, nickase, RNase, enz., om Zorg ervoor dat er geen resten achterblijven, zodat latere experimenten niet worden beïnvloed.

Figuur 6. Residudetectie

5. Gerelateerde producten

De producten die door Yeasen zijn als volgt.

Tabel 1. Gerelateerde producten

Over Lezen

De richtlijn voor reverse transcriptaseselectie

Yeasen UDG: De "anti-fouling expert" in PCR-reacties