Circulair RNA (circRNA) is een unieke klasse van niet-coderende RNA-moleculen. Ze worden gevormd via een mechanisme dat backsplicing wordt genoemd. De twee exonen van het voorloper-mRNA worden tijdens de splicing met elkaar verbonden tot een gesloten lusstructuur. Hierdoor worden de gebruikelijke 5'-cap- en 3'-tailstructuren vermeden die in lineaire RNA-moleculen voorkomen. Deze circulaire structuur verleent circRNA een hoge stabiliteit, waardoor het minder vatbaar is voor degradatie door nucleasen in de cel. Daarom hebben ze een langere halfwaardetijd in cellen, waardoor ze in praktische toepassingen lage doseringen en langdurige effecten kunnen bereiken. Bovendien heeft circRNA het voordeel van een relatief eenvoudig productieproces, omdat er geen de gemodificeerde nucleotiden de capping of polyadenylatie, waardoor circulair RNA een hot spot is in de ontwikkeling van medicijnen.
Het heeft aanzienlijke voordelen bij de ontwikkeling van medicijnen, waarvan de details voornamelijk zijn vermeld in het volgende:
01 Hogere stabiliteit
De structuur van circRNA maakt het resistent tegen afbraak door nucleasen, dus Het heeft een langere halfwaardetijd en een hogere stabiliteit in cellen, wat cruciaal is voor het aanhoudende effect van medicijnen.
02 Lage immunogeniciteit
Vergeleken met lineair RNA heeft circRNA een lagere immunogeniciteit, waardoor de kans op immuunreacties kleiner wordt. Hierdoor is circRNA geschikter als medicijndrager.
03 Efficiënte eiwitexpressie
Onderzoek toont aan dat gemanipuleerde circRNA's eiwitten stabiel en efficiënt kunnen uiten in eukaryotische cellen, wat vooral belangrijk is voor eiwitvervangingstherapie.
04 Mogelijke toepassingen voor ziektebehandeling
CircRNA heeft aangetoond dat het potentieel heeft voor de behandeling van verschillende ziekten, waaronder zeldzame ziekten, kankertherapie en als onderdeel van de ontwikkeling van vaccins.
05 Innovatief afleversysteem
De nieuw ontwikkelde afgiftesystemen, zoals lipidenanodeeltjes (LNP's), kunnen circRNA effectief afleveren aan doelcellen, wat cruciaal is voor de doelgerichte werking en werkzaamheid van medicijnen.
06 Ontwikkeling van vaccins
CircRNA-vaccins hebben potentieel getoond voor de ontwikkeling van COVID-19-vaccins. Ze kunnen de productie van meer neutraliserende antilichamen en effectieve T-celreacties opwekken en zijn stabieler bij kamertemperatuur vergeleken met lineair mRNA, wat helpt bij het vereenvoudigen van opslag- en transportomstandigheden.
07 Genbewerking
CircRNA toont ook mogelijkheden op het gebied van genbewerking. Het kan dienen als een sjabloon voor genbewerkingssystemen en zorgen voor een meer persistente en stabiele eiwitexpressie.
Het circRNA-productieproces omvat: templatebereiding, in-vitrotranscriptie, verwijdering van het DNA-template, circularisatie en zuivering. Na RNA-circularisatie moet niet-circulariseerd RNA worden verteerd met Ribonuclease R (RNase R) om circRNA te verrijken.
Figuur 1: Diagram van het productieproces van circulair RNA
(Bron:Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.)
RNase R (Ribonuclease R, RNase R) is een Mg2+-afhankelijke 3'→5' exoribonuclease afkomstig van Escherichia coliHet kan alle lineaire RNA verteren en heeft moeite met het verteren van circRNA, Lasso RNA, of dubbelstrengs RNA-moleculen met minder dan 7 nucleotiden die aan het 3'-uiteinde uitsteken. RNase R wordt vaak gebruikt om lineaire RNA-moleculen te verwijderen, om zo niet-lineaire RNA's zoals circRNA en lariat RNA te verrijken.
De belangrijkste toepassing regio's Zijn:
- Onderzoek naar genexpressie;
- Onderzoek naar alternatieve splicing;
- Verrijk circRNA uit biologische monsters;
- Identificeer intronische lariatstructuur-RNA;
- Identificeer exon circRNA.
Producteigenschappen
- Eiwitzuiverheid (SDS-PAGE) ≥95%;
- Geen exonucleaseresidu;
- Vergeleken met concurrenten heeft het product een gelijkwaardige capaciteit voor het verteren van lineair RNA;
- Vergeleken met concurrenten heeft het product een vergelijkbaar effect op de circRNA-verrijking.
Prestatie demonstratie
Eiwitzuiverheid (SDS-PAGE) ≥95%
Figuur 2: Test op eiwitzuiverheid: Van links naar rechts zijn de resultaten voor verschillende volumes (1 μL, 2 μL, 3 μL) van dezelfde productconcentratie. De resultaten tonen aan dat de eiwitzuiverheid van
Geen exonuclease-residu
Figuur 3: Resterende detectie van exonuclease: voeg 20 U toe van
Vergelijkbaar met het geïmporteerde merk RNase R-product bij het verteren van lineair RNA
Figuur 4: Vergelijking van het vermogen van
Equivalent aan het circRNA-verrijkingseffect van A's geïmporteerde merk RNase R-product
Figuur 5: Vergelijking van het verrijkingseffect van circRNA door
Feedback van klanten
IkGEMAKKELIJK RNase R heeft betere splitsingseffecten op lineair RNA vergeleken met andere merken.
Figuur 6: Vergelijking van de effecten van RNase R-vertering op lineaire mRNA-moleculen tussen
Productinformatie
| Productnaam | Productcode | Productspecificaties |
| 14615ES | 500U/5000U/20KU/200KU | |
| 14616ES | 500 µl/1 ml/5 ml/10 ml/100 ml |
Referenties
1.Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Circulaire RNA-vaccins tegen SARS-CoV-2 en opkomende varianten. Cel. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2.Chen L, Wang C, Sun H, et al. De bioinformatica-toolbox voor circRNA-ontdekking en -analyse. Korte bio-informatie. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001