Yeasen Anti-DYKDDDDK (Flag) Affiniteitsgel: Precieze zuivering voor membraaneiwitten met een lage overvloed

Op het gebied van biomedisch onderzoek is eiwitzuivering een belangrijke technologie voor het verkennen van de mysteries van het leven. Traditionele zuiveringsmethoden kampen echter met inefficiëntie en hoge kosten, met name voor membraaneiwitten, die de focus vormen van structureel biologisch onderzoek. Deze eiwitten zijn structureel complex, hebben lage expressieniveaus in celmembranen en zijn gevoelig voor omgevingsomstandigheden, waardoor hun zuivering bijzonder moeilijk is. Nu, Yeasen Biotech heeft, met zijn uitstekende R&D-capaciteiten, de verbeterde Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel (Cat.nr. 20584ES), een krachtig hulpmiddel voor efficiënte en gemakkelijke eiwitzuivering, zelfs voor uitdagende membraaneiwitten.

Productprestaties

1. Hoge specificiteit en hoge bindingscapaciteit: belangrijke voordelen voor het vastleggen van doelproteïnen

Yeasen Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel (Cat.nr. 20584ES) wordt bereid door hoogwaardige muis IgG2b monoklonale antilichamen covalent te koppelen met 4% sterk gecrosslinkte agarosegel. Dit unieke productieproces geeft het product een extreem hoge specificiteit, waardoor het fusie-eiwitten met de Flag-tag nauwkeurig kan herkennen en binden. Of het nu gaat om het N-terminale Flag-fusie-eiwit dat is gemodificeerd door Met (Met-Vlag-Proteïne), het N-terminale Flag-fusie-eiwit (Vlag-Proteïne), of het C-terminale Flag-fusie-eiwit (Proteïne-vlag), kan de gel ze gemakkelijk aan.

Bij de zuivering van membraaneiwitten is deze specificiteit bijzonder belangrijk omdat deze eiwitten structureel complex zijn en gevoelig voor niet-specifieke binding met andere eiwitten. De hoge specificiteit van de Flag-gel vermindert effectief de interferentie van niet-specifieke eiwitten, wat zorgt voor een hoge zuiverheid van de gezuiverde membraaneiwitten. Bovendien heeft de gel een hoge bindingscapaciteit voor Flag-getagde fusie-eiwitten (ten minste 1,1 mg eiwit/ml gel). Dit betekent dat zelfs als het doeleiwit op lage niveaus tot expressie komt, het nog steeds efficiënt kan worden gevangen en gezuiverd met behulp van de Flag-gel.

2. Hoge zuiverheid en hoge opbrengst: downstream-toepassingen mogelijk maken

Yeasen Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel (Cat.nr. 20584ES) heeft minimale niet-specifieke binding van onzuiverheden, wat resulteert in zeer zuivere eiwitmonsters na zuivering. Dit is cruciaal voor downstream-toepassingen zoals bioactiviteitstests en structurele analyse. Eiwitmonsters met een hoge zuiverheid leveren nauwkeurigere experimentele gegevens op, wat een solide basis vormt voor de studies van onderzoekers.

3. Geoptimaliseerde experimentele workflow: vereenvoudiging van uitdagingen op het gebied van eiwitzuivering

Eiwitzuivering moet onder milde omstandigheden worden uitgevoerd om structurele schade aan de eiwitten te voorkomen, vooral bij complexe membraaneiwitten. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel (Cat.nr. 20584ES) is ontworpen met dit in gedachten. De opslagbuffer is TBS met 50% glycerol bij pH 7.4, die niet alleen de activiteit van de gel beschermt, maar ook een milde omgeving creëert voor de zuivering van eiwitten.

Het zuiveringsproces met de Flag-gel is eenvoudig en efficiënt. Om het gebruik van 1×Flag-peptide-elutie te vergemakkelijken, bevat het productpakket een gratis 1×Flag-peptide (Cat#20572ES). Dit maakt het elutieproces zacht (met vrijwel geen schade aan de eiwitten) en zeer handig (waardoor het experimenteergemak verder wordt vergroot).

4. Meerdere formaten en flexibele verzendopties: voldoen aan uiteenlopende experimentele behoeften

Gezien de verschillende omvang en behoeften van verschillende laboratoria, Yeasen biedt de Flag gel aan in verschillende maten, waaronder 1 ml, 5 ml, 25 ml en 100 ml. Of het nu gaat om kleinschalige voorlopige exploratie of grootschalige eiwitproductie, er is een geschikte optie beschikbaar. Voor grote jaarlijkse aankopen kunnen klanten ervoor kiezen om zendingen in batches te ontvangen, waardoor ze kunnen profiteren van prijskortingen terwijl ze de druk van overmatige voorraad vermijden.

Testgegevens

M: Proteïnemarker 1: Ruw pre-kolommonster van Flag-N/Flag-M/Flag-C-eiwit 2: Post-kolom doorstroming van Flag-N/Flag-M/Flag-C-eiwit 3: Elutie (pH 2,7 elutie) 4: Elutie (pH 12 elutie) 5: Elutie (1×Elutie van vlagpeptide) 6: Gezuiverde gel (pH 2,7 elutie) 7: Gezuiverde gel (pH 12 elutie) 8: Gezuiverde gel (1×Elutie van vlagpeptide) A：Vlag-N   B：Vlag-M   C：Vlag-C

Figuur 1.   Yeasen Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel zuiveringsresultaten voor laag-expressieve eiwitten (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)) weergegeven in SDS-PAGE.

M: Proteïnemarker 1: Ruw pre-kolommonster van Flag-C-eiwit 2: Post-kolom doorstroming van Flag-C-eiwit 3: Elutie (pH 2,7 elutie) 4: Elutie (pH 12 elutie) 5: Elutie (1×Elutie van vlagpeptide) 6: Gezuiverde gel (pH 2.7 elutie) 7: Gezuiverde gel (pH 12 elutie) 8: Gezuiverde gel (1×Elutie van vlagpeptide) A：Yeasen B：Merk S*   C：Merk G*

Figuur 2. Vergelijking van Yeasen (a) metBrand S* (b) en Brand G* (c) Anti-Flag-gels bij het zuiveren van laag-expressieve eiwitten (bijv. membraaneiwitten), getoond in SDS-PAGE.

Conclusies:

1. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel (Cat.nr. 20584ES) heeft een hoge specificiteit en kan zich op verschillende posities aan Flag-tags binden (N-terminale Flag-fusie-eiwitten, Met-gemodificeerde N-terminale Flag-fusie-eiwitten, C-terminale Flag-fusie-eiwitten).

2. Onder omstandigheden van extreem lage expressie van het doelwit-eiwit (bijvoorbeeld membraaneiwitten), Yeasen Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel (Cat#20584ES) behaalt aanzienlijk hogere opbrengsten en zuiverheden vergeleken met concurrenten. Het gebruik van Yeasen Het gebruik van 1×Flag-peptide (Cat#20572ES) voor elutie levert nog betere resultaten op.

Volledige oplossingen voor vlaggetagde fusie-eiwitten:

Recombinante enterokinase (Cat#20395ES): Een specifieke protease die het carboxyl-uiteinde van lysine splitst, voorafgegaan door vier asparaginezuren: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Deze sequentie is onderdeel van de octapeptide Flag tag (DYKDDDDK). Recombinant Enterokinase (rEK) kan de Flag tag eenvoudig verwijderen van fusie-eiwitten, waardoor het een ideaal hulpmiddel is voor het bestuderen van de structuur en functie van inheemse eiwitten.

Anti-DYKDDDDK(Vlag) MagBeads (Cat.nr. 20565ES): : Polymeer magnetische microbolletjes bereid door covalente koppeling van hoogwaardige muis anti-DYKDDDDK (Flag) monoklonale antilichamen met op silica gebaseerde magnetische kralen (diameter van 200 nm). Deze kralen zijn geschikt voor immunoprecipitatie (IP) of co-immunoprecipitatie (Co-IP) van eiwitten met de Flag-tag.

Productinformatie

Productnaam	Productnummer	Specificatie
Anti-DYKDDDDK(Vlag) Affiniteitsgel	20584EN03/08/25	1 ml/5 ml/25 ml
Recombinant runderenterokinase, His, tot expressie gebracht in gist	20395ES60/76/90	100 Ik/500 U/5000U
Anti-DYKDDDDK(Vlag) MagBeads	20565ES03/08	1 ml/5 ml