Artrite Reumatoide (AR) é uma doença articular inflamatória crônica caracterizada por sinovite persistente, inflamação sistêmica e erosão de ossos e cartilagem, o que pode levar à anquilose e deformidade articular. Modelos animais de AR são amplamente utilizados para o estudo da patogênese e métodos terapêuticos. Vários modelos animais foram estabelecidos para o estudo da etiologia da AR, patogênese, fatores de influência e a pesquisa de novos alvos terapêuticos e a avaliação de novas terapias.

Modelos animais de AR podem ser amplamente divididos em duas categorias: modelos induzidos e transgênicos. Modelos induzidos comuns incluem Artrite Induzida por Colágeno (CIA) e Artrite Induzida por Adjuvante (AA), enquanto modelos de camundongos transgênicos incluem modelos transgênicos de TNF-α humano, etc.

O Adjuvante de Freund, inventado por Jules Freund na década de 1940, é uma emulsão de antígeno óleo-em-água feita pela mistura de uma solução aquosa de antígeno com um agente oleoso e adição de um emulsificante. É o adjuvante mais comumente usado em experimentos com animais.

O Adjuvante de Freund é dividido em Adjuvante Completo de Freund (CFA) contendo Mycobacterium tuberculosis e Adjuvante Incompleto de Freund (IFA) sem Mycobacterium tuberculosis. Eles são usados ​​principalmente para induzir Artrite Induzida por Colágeno (CIA) e modelos de Artrite Induzida por Adjuvante (AA) em camundongos.

Figura 1. Artrite reumatoide humana

Figura 2. Artrite reumatoide em camundongo

1 Artrite Induzida por Colágeno (CIA) (apenas para referência)

1.1 Modelo de mouse

O modelo CIA é um dos modelos de camundongos de AR mais amplamente utilizados. Imunizar animais com colágeno tipo II heterólogo pode induzir uma resposta autoimune contra o colágeno tipo II na cartilagem articular, com manifestações clínicas de artrite periférica poliarticular.

Método de construção do modelo: O colágeno bovino tipo II (CII) é dissolvido em ácido acético glacial a 4°C durante a noite. Em seguida, o Mycobacterium tuberculosis (BCG) morto pelo calor é colocado em parafina líquida para preparar o Adjuvante Completo de Freund (CFA). Os dois são misturados e emulsionados para preparar uma emulsão de colágeno tipo II. Esta emulsão é injetada subcutaneamente na base da cauda do camundongo a 0,1-0,2 mL para induzir inflamação. No 21º dia após a imunização inicial, uma injeção de reforço de 0,1-0,2 mL de emulsão de colágeno tipo II é administrada intraperitonealmente. Após a primeira imunização, os camundongos terão reações inflamatórias locais que cicatrizam em cerca de uma semana; após o adjuvante, os camundongos desenvolverão inchaço nas articulações a partir do dia 24, progredindo das patas traseiras para as patas dianteiras e depois para a cauda.

1.2 Modelo de rato

Método de construção do modelo: O colágeno bovino tipo II (CII) é misturado com Adjuvante de Freund Incompleto (IFA) em volumes iguais e emulsionado. No primeiro dia, os ratos são injetados intradermicamente em vários locais e, uma semana depois, recebem um reforço intraperitoneal. O modelo é obtido dentro de 3-7 dias após a segunda imunização. Sete dias após a sensibilização, as articulações do tornozelo estarão levemente inchadas e vermelhas, e os sintomas piorarão após 3 semanas, com possível ulceração da pele; após 5-6 semanas, as alterações patológicas pioram ainda mais, com a cartilagem articular e o osso subcondral sendo erodidos e destruídos pelo pannus.

2 Artrite induzida por adjuvante (AA) (apenas para referência)

O modelo AA é o modelo de RA em ratos mais amplamente utilizado, com dois tipos: Adjuvante de Freund Incompleto (IFA) e Adjuvante de Freund Completo (CFA).

Método de construção do modelo: ratos são injetados por via intradérmica para induzir inflamação.O modelo geralmente mostra sintomas inflamatórios contínuos 10-20 dias após a indução, atingindo o pico em torno de 20 dias. A inflamação ocorre principalmente na articulação do tornozelo, o que pode afetar a almofada plantar e todo o pé. Os sintomas de inchaço da articulação são semelhantes aos de pacientes clínicos com AR, mas fenômenos de disfunção imunológica podem ocorrer.

3 etapas de modelagem de artrite induzida por colágeno (CIA) (apenas para referência)

• O colágeno bovino tipo II (CII) é dissolvido em solução de ácido acético glacial na concentração de 2 mg/mL e mantido durante a noite a 4°C.
• O Adjuvante de Freund Incompleto é suplementado com Mycobacterium tuberculosis morto pelo calor a uma concentração de 2-5 mg/mL. A concentração de Mycobacterium tuberculosis no Adjuvante de Freund Completo 60718ES fornecido pela Yisheng Biology é menor que 10 mg/mL.
• A solução de ácido acético de colágeno bovino tipo II é misturada com Adjuvante Completo de Freund em volumes iguais e emulsionada.
• Cada camundongo experimental recebe de 4 a 6 injeções subcutâneas nas costas, totalizando 0,1 a 0,2 mL.
• Três semanas depois, o Adjuvante Incompleto de Freund é misturado com solução de ácido acético de colágeno bovino tipo II em volumes iguais e emulsionado, e cada camundongo recebe de 3 a 5 injeções subcutâneas na base da cauda, ​​totalizando 0,1 a 0,2 mL.

4 etapas de modelagem de artrite induzida por adjuvante (AA) (apenas para referência)

• Preparar reagentes relevantes, observando a configuração dos grupos experimental e controle.
• Observação e registro: Geralmente, mais de 80% dos camundongos apresentam sintomas de artrite 7-12 dias após a segunda imunização. Os sintomas clínicos são classificados com base na vermelhidão e atividade da articulação do camundongo, e as observações são registradas antes do experimento e no 3º, 5º, 7º e 12º dias após o experimento, com os critérios de classificação a seguir:

Tabela 1 Critérios de pontuação

Sessencial	SSintoma
0	A atividade era normal, sem sinais de eritema e inchaço.
1	A atividade era normal, com apenas vermelhidão da pele e nenhum inchaço significativo.
2	A atividade é levemente afetada, as garras, as almofadas das patas ou a articulação do joelho apresentam vermelhidão.
3	Atividade afetada, dedos das patas e articulações levemente deformados e inchados.
4	O movimento fica bloqueado, os dedos e as articulações ficam muito vermelhos e inchados, rígidos ou deformados.

• Medição do camundongo: Use um medidor de volume da pata do camundongo para medir o volume da articulação do membro posterior do camundongo antes e depois do experimento. Meça o volume de cerca de 5 mm abaixo da articulação do joelho de cada perna traseira do camundongo três vezes, registre o valor médio e o volume é proporcional ao grau de vermelhidão e inchaço da articulação. A detecção é realizada a cada três dias.
• Exame patológico: Pegue camundongos dos grupos experimental e controle, remova a pele, fixe com formaldeído a 4% por mais de 48 horas, descalcifique com ácido nítrico a 5% por 2 horas, mergulhe em xileno e embeba em parafina. Faça cortes de 6 mm, tinga com HE e observe com um microscópio óptico convencional para estabelecer um padrão de pontuação para diagnóstico patológico.

5 Imagens de casos experimentais (extraídas da literatura)