Os macrófagos desempenham papéis únicos e críticos em diferentes partes do corpo, no entanto, a remoção precisa de macrófagos se tornou uma ferramenta de pesquisa essencial para estudar melhor as funções específicas dos macrófagos em áreas específicas e seu impacto no desenvolvimento de doenças. Os lipossomas de clodronato são uma das ferramentas mais comprovadas, econômicas e ideais para remoção de macrófagos. Os lipossomas de clodronato podem ser administrados intraperitonealmente, na veia da cauda e de várias outras maneiras para remover macrófagos de diferentes tecidos.

A seguir, compartilharemos uma série de tópicos para demonstrar os métodos e a eficácia da remoção de macrófagos em diferentes locais, na esperança de fornecer referências úteis para pesquisadores.

Introdução aos métodos de injeção

Injeção na veia da cauda

A injeção na veia da cauda atinge a depleção máxima após 24 h. Deve-se prestar atenção ao ponto de tempo de detecção.

1、Coloque os ratos em uma lancheira invertida, puxe a cauda do orifício, há dois artérias e três veias na cauda dos ratos, duas as artérias estão nos lados dorsal e ventral da cauda, ​​e as três as veias são distribuídas em ziguezague, geralmente são utilizados os lados esquerdo e direito das veias;

2、Mergulhe a gaze em água morna a cerca de 70℃ (ou mergulhe-a em álcool), retire-a e enrole a cauda, ​​para atingir o objetivo de vasodilatação da cauda e amolecer a queratina epidérmica;

3、Para injeção intravenosa na cauda, ​​com o polegar e o indicador esquerdos antes e depois de segurar a cauda do rato, deixando uma seção de cerca de 2 cm, para que a pele fique tensa, as veias fiquem mais cheias, a mão direita segurando uma seringa de agulha de 1 mL, para que a agulha e a veia fiquem paralelas (ângulo inferior a 30°), do 1/4 inferior da cauda para dentro da agulha, o início da injeção do medicamento deve ser lento, observação cuidadosa, se não houver resistência, nenhum dermátomo branco apareceu, significa que os vasos sanguíneos foram perfurados e podem ser Injeção formal de medicamentos.

4、Alguns experimentos exigem injeções repetidas na veia da cauda por vários dias, o local da injeção deve começar da extremidade da cauda o máximo possível e mover-se para a raiz da cauda em sequência e mudar a posição vascular para injeção. Após remover a agulha, pressione o local da injeção com uma bola de algodão por 1 - 2 minutos para parar o sangramento.

Injeção intraperitoneal

A injeção intraperitoneal atinge a depleção máxima após 48 - 72 h. Deve-se prestar atenção à detecção de pontos de tempo.

1、Primeiramente, use o método de coleta dorsal para capturar os ratos, de modo que suas cabeças fiquem ligeiramente inclinadas para trás e seus abdômens fiquem para cima, o membro posterior esquerdo dos ratos seja fixado com o dedo mínimo e, em seguida, o local da injeção seja esterilizado com uma bola de algodão com álcool a 75%.

2、A localização da injeção intraperitoneal em camundongos é 0,5 cm em ambos os lados da linha média do abdômen inferior (nivelado com a raiz da coxa). Para evitar ferimentos nos órgãos, a cabeça do rato deve ser inclinada para trás ao resgatá-lo, de modo a fazer os órgãos do abdômen inferior se moverem para cima.

3、Perfure a agulha da seringa na pele, entre na área subcutânea, empurre a agulha para frente ao longo da área subcutânea por 2 - 3 mm, e então perfure a cavidade abdominal do camundongo em um ângulo de 45 graus entre a agulha e a pele. Nota: Após penetrar no peritônio, a resistência da ponta da agulha desaparece.

4、Retire o plugue da agulha. Se não houver retorno de sangue ou líquido, o medicamento pode ser injetado.

5、Após a injeção, gire suavemente a agulha e puxe lentamente a seringa para evitar vazamento de líquido.

Também haverá diferentes métodos de injeção para diferentes locais de estudo, como: injeção subcutânea, administração traqueal, injeção intracraniana e assim por diante. Você deve consultar a literatura relevante e a equipe técnica da Yeasen antes da experimentação.

Ciclo de dosagem e dosagem

Administração de curto prazo: uma única injeção de lipossomas de clorofosfato 200 µL (20 - 25 g de peso) em um momento específico para detectar a eficiência de depuração de macrófagos ou para experimentos posteriores.

Administração de longo prazo: mais de uma semana ou mais é necessária para atingir a depuração dos macrófagos. Em camundongos WT, por exemplo, 200 µL (20 - 25 g de peso) é geralmente administrado como primeira dose, seguido de 200 µL a cada 2 - 3 dias.

Protocolo de teste de referência

Órgão/Macrófago	Dosagem (20-25g/rato)
Macrófagos do esplen/polpa vermelha	Dose única: 200 µL/camundongo (IV ou IP). Depleção a longo prazo: primeira dose de 200 µL/rato, depois 200 µL/rato em intervalos de 2 a 3 dias
Células do fígado/Kuffer	Dose única: 200 µL/camundongo (IV ou IP). Depleção a longo prazo: primeira dose de 200 µL/rato, depois 200 µL/rato em intervalos de 2 a 3 dias
Macrófagos pulmonares/alveolares	IV (150-200 µL) combinado com intratraqueal ou intranasal (50 µL) fornece os melhores resultados.
nódulo linfático	Injeção (100-200 µL)/camundongo, regimes de dosagem específicos podem ser encontrados na literatura.
Cérebro/microglia	Entrada intracerebroventricular no líquido cefalorraquidiano, 10 µL/camundongo, 50 µL/rato.
Sangue/Monócitos	150-200 µL/camundongo (IV), a taxa máxima de depleção é atingida em 24 horas, mas a taxa máxima de depleção em 1 a 7 dias depende da cepa.

Observação: o texto acima é apenas para referência. Consulte a literatura relevante e a equipe técnica da Yeasen antes de fazer experimentos.

Recomendação de produto

Nome do produto	Número do item	Especificação
Lipossomas de Clodronato (da Vrije Universiteit Amsterdam)	40337ES08	5 mL
	40337ES10	10 mL
Lipossomas de controle (PBS)	40338ES08	5 mL
	40338ES10	10 mL