Introdução aos Macrófagos
A descoberta dos macrófagos remonta a 1882, quando a bióloga Ellie Metchnikoff os descobriu enquanto estudava animais primitivos que não tinham mecanismos imunológicos adaptativos e se referiu a essas células como fagócitos. Os macrófagos são um grupo heterogêneo de células imunes com alto grau de plasticidade e uma variedade de funções, incluindo desenvolvimento de tecidos e homeostase in vivo, remoção de detritos celulares, eliminação de patógenos e modulação de respostas inflamatórias. Diferentes sinais indutores podem ativar os macrófagos para alterar sua própria morfologia e características fisiológicas.
Fig 1 origem do macrófago
Tomando emprestado o conceito de células T auxiliares (Th), o estado de ativação do macrófago é geralmente simplificado em termos de modalidade de ativação em duas categorias: macrófagos classicamente ativados, CAMs, e macrófagos alternativamente ativados, AAMs. Os macrófagos M1 produzem citocinas pró-inflamatórias, que resistem à invasão de patógenos, mas também causam danos ao organismo; os macrófagos M2 secretam citocinas anti-inflamatórias e desempenham um papel no reparo e reconstrução de tecidos e na formação de tumores.
Fig 2 Diferentes fenótipos, marcadores de superfície celular e funções dos macrófagos
Vale a pena notar que os dois fenótipos de macrófagos não são absolutamente diferenciados de forma antagônica, ou seja, os fenótipos M1 e M2 não são mutuamente exclusivos, mas frequentemente coexistem e, portanto, não podem ser simplesmente considerados populações de macrófagos completamente distintas. Os marcadores de polarização de macrófagos são geralmente expressos em níveis diferentes em macrófagos de diferentes fenótipos, e macrófagos de diferentes fenótipos podem sofrer interconversão sob certas condições. Na cicatrização de feridas in vivo, os macrófagos exibem um perfil de secreção M1 pró-inflamatório na fase inicial, com alta capacidade de apresentar antígenos e produzir interleucinas IL-12 e IL-23, que inibem a proliferação celular e causam danos aos tecidos, enquanto na fase tardia de cicatrização, os macrófagos mudam para um perfil de expressão gênica M2 anti-inflamatório, que promove a inflamação e a cicatrização de feridas por meio da produção de mediadores angiogênicos, como TGF-β, VEGF e EGF, e assim por diante. diminuir e cicatrização de feridas.
Fig 3 Mecanismos dos principais fenótipos de ativação de macrófagos no reparo, regeneração e fibrose de tecidos
Estudo in vivo
Os macrófagos são as únicas células presentes em todos os órgãos do corpo e são encontrados na epiderme, córnea e no interior das articulações sem vasos sanguíneos, e um dos métodos mais importantes de estudo de sua biologia in vivo é a depleção de macrófagos. A depleção de macrófagos in vivo é um método de remoção de macrófagos usando técnicas físico-químicas ou genéticas. Este método é agora amplamente utilizado para estudar o papel dos macrófagos em modelos de doenças animais e para estudar os mecanismos de imunopatologia ou dano inflamatório, como doenças inflamatórias: asma alérgica, diabetes, obesidade, aterosclerose, estudos relacionados a doenças autoimunes; e outras áreas de doenças: tumores, doenças associadas a vírus, regeneração de tecidos e outros estudos relacionados. O método do lipossomo de clodronato é atualmente o método mais comumente usado para depleção de macrófagos.
Lipossomas de Clodronato
Desde que o Prof. Nico van Rooijen desenvolveu com sucesso um agente de remoção de células in vivo, o Clodronato Lipossomas, utilizando o mecanismo de endocitose de macrófagos para trazer o clodronato para dentro da célula, onde o ácido clorofosfórico é liberado, o que pode desencadear a apoptose de macrófagos quando uma certa concentração é atingida, atingindo assim o propósito de remoção de macrófagos.Este reagente tem sido amplamente utilizado como a ferramenta de remoção de macrófagos mais madura e conveniente do mundo.
Fig 4 Diagrama esquemático do princípio de depuração de macrófagos
Abordagens de diferentes organizações (apenas para informação)
| Órgão/Macrófago | Dosagem (20-25g/rato) |
| Macrófagos do esplen/polpa vermelha | Dose única: 200 µl/camundongo (IV ou IP). |
| Células do fígado/Kuffer | Dose única: 200 µl/camundongo (IV ou IP). |
| Macrófagos pulmonares/alveolares | IV (150-200 µl) combinado com intratraqueal ou intranasal (50 µl) dá os melhores resultados. |
| nódulo linfático | Injeção (100-200 µl)/camundongo, regimes de dosagem específicos podem ser encontrados na literatura. |
| Cérebro/microglia | Entrada intracerebroventricular no líquido cefalorraquidiano, 10 µl/camundongo, 50 µl/rato. |
| Sangue/Monócitos | 150-200 µl/camundongo (IV), a taxa máxima de depleção é atingida em 24 horas, mas a taxa máxima de depleção em 1-7 dias depende da cepa. |
Recomendação de produto
| Nome do produto | Número do item | Especificação |
| 40337ES08 | 5 mL | |
| 40337ES10 | 10 mL | |
| 40338ES08 | 5 mL | |
| 40338ES10 | 10 mL |