Ultra-limpo UCF.ME ™ Termostable RNase H: corte preciso para experimentos mais eficientes!

Ideal para remoção de rRNA e encapsulamento de mRNA detecção de eficiência!

A RNase H termoestável, com sua excepcional resistência ao calor, supera a RNase H comum em especificidade e eficiência!

Introdução à RNase H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) é uma enzima que degrada especificamente o componente de RNA de fitas híbridas de RNA-DNA. Ela desempenha um papel vital em processos como replicação, reparo e transcrição de DNA ao clivagem da fita de RNA para manter a integridade e estabilidade do molde de DNA. Isso a torna amplamente usada em experimentos de biologia molecular, incluindo síntese de cDNA, remoção de rRNA e estudos de interferência de RNA. No entanto, E. coli RNase H tem algumas limitações:

• Pode causar clivagem não específica de RNA ou DNA de fita simples, reduzindo a precisão dos resultados experimentais.
• Sua baixa estabilidade térmica impede que ele mantenha atividade em altas temperaturas, tornando-o inadequado para experimentos como transcrição reversa de alta temperatura ou PCR, que exigem temperaturas elevadas.

Essas deficiências levaram os pesquisadores a desenvolver a RNase H termoestável para ampliar suas aplicações e melhorar a eficiência experimental.

Figura 1: Mecanismo da RNase H

RNase H termoestável de Thermus thermophilus

A RNase H termoestável, derivada de Thermus thermophilus, é um homólogo da RNase H de E. coli e compartilha funções de ribonuclease semelhantes. Ela identifica precisamente e cliva eficientemente as ligações fosfodiéster da fita de RNA em híbridos de RNA:DNA, preservando a integridade da fita de DNA. Uma análise estrutural aprofundada revela que, embora sua distribuição geral de estabilidade se assemelhe à da RNase H de E. coli, a RNase H de T. thermophilus exibe melhorias significativas tanto na estabilidade geral quanto na estabilidade local dos resíduos.

Com uma temperatura de atividade ótima acima de 65°C, a Thermostable RNase H fornece especificidade e eficiência aprimoradas em temperaturas de reação mais altas, minimizando a clivagem não específica. Essa propriedade desbloqueia seu vasto potencial em experimentos de biologia molecular, incluindo:

• remoção de rRNA
• Detecção da taxa de limitação de mRNA
• Remoção de mRNA poli(A) hibridizado com poli(dT)
• Remoção de mRNA durante a síntese da segunda fita de cDNA
• Melhoria da eficiência de amplificação em experimentos de transcrição reversa de alta temperatura, amplificação isotérmica e PCR

Figura 2: Comparação da estrutura tridimensional da RNase H termoestável e da RNase H de E. coli ^[1]

UCF.EU™RNase H termoestável (Cat14545)

A RNase H termoestável é frequentemente usada em experimentos de detecção de patógenos, como remoção de rRNA em sequenciamento metagenômico (mNGS) e sequenciamento direcionado a patógenos (tNGS). Ácidos nucleicos bacterianos residuais do hospedeiro ou de fundo na enzima podem comprometer significativamente a precisão da detecção. Para resolver isso, Yeasen Biografiatecnologia apresenta UCF.ME™ RNase H termoestável (Cat14545), desenvolvida usando seu UCF.ME proprietário™ tecnologia de processo ultralimpo. Produzido na UCF.ME™ instalação de enzimas moleculares ultralimpas, este produto passa por rigoroso controle de qualidade — desde a seleção de materiais e gerenciamento ambiental até a otimização e testes de processos — garantindo resíduos mínimos de gDNA bacteriano e nuclease.Isso garante resultados experimentais precisos, confiáveis ​​e reprodutíveis.

Vantagens do produto:

• Alta atividade e excelente consistência de lote para lote
• Resíduo de gDNA do hospedeiro extremamente baixo: <0,02 cópias/U
• Nenhum resíduo de exonuclease, endonuclease ou RNase
• Estabilidade excepcional: Nenhuma perda significativa da atividade enzimática após 32 dias a 4°C, 16 dias a 25°C ou 7 dias a 37°C

Apresentação de desempenho do UCF.ME™ RNase H termoestável (Cat14545)

1. Alta atividade e consistência de lote

Três lotes de UCF.ME™ RNase H termoestável foi incubada com substratos de RNA:DNA, e as alterações de banda foram analisadas por eletroforese em gel de agarose. Os resultados demonstram que apenas 0,05 U desta enzima cliva efetivamente o RNA em substratos de RNA:DNA de 20 pmol, com excelente consistência de lote para lote, destacando sua estabilidade e confiabilidade.

Figura 3: Resultados de detecção de atividade do UCF.ME™ RNase H termoestável

Nota: Condições de reação: 50°C por 20 minutos; substrato RNA:DNA – 20 pmol

2. Baixo resíduo de gDNA do hospedeiro: <0,02 cópias/U

O teste de resíduos de gDNA do hospedeiro (E. coli) em vários lotes mostra que todos os três lotes de UCF.ME™ A RNase H termoestável tem níveis de resíduos bem abaixo de 0,02 cópias/U, garantindo alta pureza e confiabilidade experimental.

Figura 4: Resultados de resíduos de gDNA do hospedeiro de UCF.ME™ RNase H termoestável

3. Nenhum resíduo de exonuclease, endonuclease ou RNase

25 U da UCF.ME ™ A RNase H termoestável foi incubada com substratos de ácido nucleico, e as alterações de banda foram avaliadas por eletroforese em gel de agarose. Nenhum resíduo de exonuclease, endonuclease ou RNase foi detectado em nenhum dos três lotes, fornecendo forte garantia de precisão e confiabilidade dos resultados.

Figura 5: Resultados de detecção de resíduos de exonuclease, endonuclease e RNase em UCF.ME™ RNase H termoestável

4. Excelente estabilidade

UCF.EU™ A RNase H termoestável foi submetida a testes de estabilidade: 32 dias a 4°C, 16 dias a 25°C e 7 dias a 37°C. As medições da atividade enzimática não mostraram declínio significativo, comprovando sua estabilidade excepcional em uma ampla faixa de temperatura e sua adequação para armazenamento de longo prazo e diversas condições experimentais.

Figura 6: Resultados de estabilidade acelerada do UCF.ME™ RNase H termoestável

Produtos relacionados recomendados

Fonte	Nome do produto	Gato No.
T. termofílico	UCF.EU™ RNase H termoestável	14545ES
E.coli	RNase H	12906ES

Referências

1. Hollien J, Marqusee S. Distribuição estrutural da estabilidade em uma enzima termofílica [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. Caracterização seletiva do mRNA 5′End-Capping por enriquecimento direcionado por sonda de DNA com endoribonucleases específicas do sítio [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Novos métodos de depleção de rRNA para sequenciamento de RNA total e perfil de ribossoma desenvolvidos para espécies aviárias [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.