1、Material da enzima central-Taq DNA Polimerase

À medida que a expansão dos campos de testes de aplicação e o aumento da demanda do mercado, a Taq DNA polimerase do tipo selvagem não consegue mais atender totalmente aos requisitos. A plataforma de modificação enzimática ZymeEditor™ da Yeasen modificou de forma abrangente e direcional a Taq DNA polimerase para atender a várias necessidades de aplicação, lançando uma série de Taq DNA polimerases de partida a quente adequadas para aplicações pré-misturadas, resistentes a inibidores, ultralimpas e outras.

• Estabilidade superior: formulado em uma solução pré-misturada completa contendo primers e sondas, após tratamento a 37 °C por 7 dias, não há alteração na detecção de baixa concentração.

Figura 1: Usando ácido nucleico do VHB como molde, uma solução de pré-mistura completa de qPCR foi preparada com 10726ES, e todos os componentes, exceto o molde, foram testados para estabilidade acelerada a 37 °C por 7 dias. Os resultados mostraram que não houve alterações significativas nos valores de Ct e valores de fluorescência em concentrações altas, médias e baixas, indicando que a solução de pré-mistura preparada com 10726ES tem desempenho estável.

• Baixo resíduo de gDNA do hospedeiro: O DNA genômico residual de E. coli é inferior a 0,5 cópias por 100 U.

Figura 2: Intervalo linear do DNA genômico de E. coli: 30 fg/μL a 300 pg/μL, com um coeficiente de correlação R2 de 0,9999. (B) O DNA genômico residual de E. coli em três lotes de Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polymerase é inferior a 0,5 cópias por 100 U.

2、Material da enzima central - Transcriptase reversa

Como um dos principais componentes da reação RT-qPCR, a transcriptase reversa deve possuir velocidade de transcrição reversa mais rápida, maior rendimento de síntese e melhor resistência ao calor. Para obter transcriptase reversa mais adequada para RT-qPCR, a Yeasen Biotech desenvolveu a série Hifair® de transcriptases reversas com base em M-MLV por meio de modificação genética.Essas enzimas apresentam menor atividade de RNaseH, maior estabilidade térmica e maiores capacidades de síntese contínua.

• Pode suportar a temperatura de reação de 58℃ e é adequado para transcrição reversa de modelos complexos de RNA

Figura 3: Hifair® V Reverse Transcriptase e a marca importada T* reverse transcriptase foram incubadas a 55°C e 58°C por 30 minutos para detectar atividade enzimática residual. Os resultados mostram que Hifair® V Reverse Transcriptase mantém 70% de atividade após incubação a 58°C por 30 minutos, excedendo significativamente a marca importada.

• Taxa de detecção superior em RT-qPCR em comparação com outras marcas, com uma faixa de detecção de 1 pg a 1 μg

Figura 4: Usando RNA total de células 293T em concentrações variando de 1 pg a 1 μg (7 gradientes) como molde, a transcrição reversa foi realizada usando Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix para qPCR (Cat#11142), V* e T*. O cDNA resultante foi então submetido a qPCR para análise quantitativa. Os resultados indicam que a sensibilidade do 11142ES pode atingir 1 pg, com uma taxa de detecção superior à dos produtos concorrentes.

3、Outras enzimas e inibidores de enzimas: inibidor de RNase, enzima UDG

A Yeasen Biotech oferece uma variedade de enzimas e inibidores de enzimas que foram validados para aplicações industriais de IVD, incluindo inibidores de RNase e enzimas UDG, fornecendo uma rica seleção de soluções de matéria-prima de alta qualidade para o desenvolvimento e produção de uma ampla gama de produtos de diagnóstico in vitro. Esses produtos relacionados a enzimas são amplamente usados ​​na proteção de produtos alvo de detecção molecular.

RNase inibidor：Yeasen expressa e purifica inibidores de RNase recombinantes de camundongo/suíno em uma forma solúvel dentro de E. coli, que pode inibir amplamente vários tipos de RNases (RNase A, B, C) sem suprimir a atividade das polimerases. Esses inibidores foram validados para uso generalizado em múltiplas aplicações, como RT-PCR/qPCR, RNA-seq, clonagem de cDNA e construção de bibliotecas. Além dos inibidores de RNase convencionais, Yeasen também desenvolveu inibidores de RNase processados ​​com a tecnologia de resíduo ultrabaixo UCF.ME®, que têm menor resíduo de hospedeiro e são adequados para aplicações com requisitos mais rigorosos para bactérias de fundo, auxiliando na resolução da interferência bacteriana de fundo na detecção de patógenos e aumentando a precisão da detecção.

Uracil DNA Glicosilase (enzima UDG/UNG):A uracil-DNA glicosilase (enzima UDG), quando usada em conjunto com dUTP, pode estabelecer um sistema de prevenção de contaminação por PCR. A enzima UDG termolábil e baixa da Yisheng pode evitar a atividade residual de enzimas UDG convencionais após a inativação, o que pode causar degradação de produtos de amplificação contendo dU em temperatura ambiente. Ela também previne falsos positivos em resultados de PCR causados ​​por bactérias de fundo presentes em enzimas moleculares. Isso é crucial para identificar com precisão patógenos infecciosos e auxiliar no diagnóstico clínico de infecções e doenças infecciosas.

Anticorpo Taq DNA Polimerase:A amplificação não específica é um dos principais problemas que afetam significativamente o desempenho da PCR, e a tecnologia de partida a quente pode efetivamente reduzir a amplificação não específica. A enzima de partida a quente modificada com anticorpos tem uma alta eficiência de vedação e excelente desempenho, sendo estável à temperatura ambiente com uma rápida taxa de liberação da atividade enzimática.A enzima Taq de inicialização a quente de anticorpo duplo desenvolvida pela Yisheng Biotech não apenas sela a atividade da polimerase 5'→3' da enzima Taq, mas também sela simultaneamente a atividade da exonuclease 5'→3'. Essa abordagem dupla previne efetivamente a amplificação não específica causada por pareamento incorreto ou dímeros de primer e também previne a geração de sinais não específicos devido à degradação de sondas ou primers, aumentando assim duplamente a estabilidade dos reagentes.

4、Mix principal de qPCR de tubo único de alto desempenho universal

A Yeasen Biotech oferece reagentes qPCR de alta qualidade, apresentando Taq polimerase hot-start de alto desempenho pareada com um sistema de buffer otimizado. A empresa fornece uma gama de produtos, incluindo master mixes universais, master mixes all-in-one, master mixes de genotipagem e master mixes liofilizados. Esses reagentes são caracterizados por sua facilidade de uso, alta sensibilidade e forte estabilidade, o que acelera o desenvolvimento de seus produtos de diagnóstico molecular.

• boa versatilidade：É adequado para vários tipos de primers e sondas (mais de 40 tipos diferentes de alvos foram verificados) e tem excelente desempenho de amplificação;
• eu Estabilidade de pré-mistura super completa: estável a 37℃ por 14 dias, 4℃ por 28 dias, congelamento e descongelamento repetidos 50 vezes;

• Alta sensibilidade e boa especificidade: a sensibilidade pode detectar 0,25 cópias/μL, e a especificidade de 48 furos não tem pico negativo;
• Programa de suporte rápido:compatível com programa rápido, 30min pode produzir resultados;
• Sistema antipoluição dUP/UDG: O sistema antipoluição dUTP/UDG é introduzido para prevenir eficazmente a poluição por aerossóis;
• Aplicação multiplataforma e multissistema: Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong, etc.

Figura 5: Com base no estudo de estabilidade do reagente pré-misturado tudo-em-um, o 16710ES foi tratado de três maneiras diferentes (ciclos de 4°C, 37°C e congelamento-degelo). Os grupos experimentais foram tratados a 4°C e 37°C por 7 dias, respectivamente, e submetidos a 50 ciclos de congelamento-degelo, enquanto o grupo controle (armazenado a -20°C) foi avaliado quanto à estabilidade em quatro sistemas de amplificação multiplex (os grupos 1, 2 e 4 são sistemas de amplificação quadruplex, e o grupo 3 é um sistema de amplificação triplex). Os resultados demonstraram que o desvio dos valores de Ct (ΔCt) entre os grupos experimental e controle estava dentro de ±0,5, e o desvio do valor de fluorescência estava dentro de 15%, provando que o reagente pré-misturado tudo-em-um de Yeasen possui excelente estabilidade na amplificação multiplex.

5、Mix mestre universal de RT-qPCR de alto desempenho

Os reagentes RT-qPCR de uma etapa integram o desempenho superior da transcriptase reversa e enzimas hot-start, complementados por um sistema de buffering otimizado, permitindo a detecção rápida e sensível de modelos de cópia de dígito único. Validados por vários mercados de clientes, incluindo doenças respiratórias, epidemias animais e sistemas de pesquisa, esses reagentes podem atender às necessidades de várias direções de aplicação.

• boa versatilidade：É adequado para amplificação de qPCR e detecção de ácidos nucleicos de microrganismos patogênicos, genomas humanos, plantas e outras espécies；
• Alta sensibilidade：O sistema de buffer cuidadosamente otimizado melhora a sensibilidade de detecção de modelos de baixa concentração de até 250 cópias/mL；
• Sistema antipoluição dUP/UDG：O sistema antipoluição dUTP/UDG termolábil é introduzido para degradar a poluição por aerossol dos produtos de forma eficiente, reduzir falsos positivos e garantir resultados autênticos；
• Programa de suporte rápido: compatível com programa rápido, 40min pode produzir resultados;
• Super estabilidade: estável a 37℃ por 14 dias, congelamento e descongelamento repetidos 10 vezes.

Avaliação da sensibilidade de detecção

Figura 6: Utilizando a pré-mistura RT-qPCR de Yeasen (16630ES) e um produto comparável do Fornecedor-A, a detecção de quatro alvos de patógenos foi conduzida simultaneamente (Vírus da Parainfluenza Humana HPIV2, Vírus da Parainfluenza Humana HPIV4, Vírus Sincicial Respiratório HRVA e Rinovírus RSVA). Os resultados indicaram que a sensibilidade de detecção do 16630ES foi maior do que a do Fornecedor-A.

Recomendação de produto

产品类型	产品名称	货号
Série de enzimas PCR	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polimerase, 5 U/μL	10726ES
	Transcriptase reversa Hifair® V (200 U/μL)	11300ES
	Uracil DNA glicosilase (UDG/UNG), lábil ao calor, 1 U/μL	10303ES
	Inibidor de RNase murina (40 U/µL)	10603ES
	Mistura dNTP (25 mM cada)	10125ES
Série de enzimas únicas de PCR ultralimpas com resíduo de hospedeiro ultrabaixo	Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polimerase (5 U/μL)	14314ES
	Hifair UCF.ME® V Transcriptase Reversa (200 U/μL)	14608ES
	UCF.ME® Uracil DNA Glicosilase (UDG/UNG), lábil ao calor, 1 U/μL	14466ES
	Universidade Federal do Rio de Janeiro.Inibidor de RNase murina ME® (40 U/µL)	14672ES
Série de monoenzimas PCR Lyo-Ready	Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polimerase, sem glicerol (5U/μL)	14316ES
	Hifair® V Reverse Transcriptase, sem glicerol (600 U/μL)	11301ES
	Uracil DNA glicosilase (UDG), lábil ao calor (1 U/μL, sem glicerol)	10707ES
	Inibidor de RNase murina (200 U/µL, sem glicerol)	10703ES
Mistura principal RT-qPCR	Kit de sonda RT-qPCR multiplex de uma etapa Hifair® C203P1 (UDG Plus)	16630ES
	Kit de sonda RT-qPCR de uma etapa multiplex Hifair® V (UDG Plus)	11899ES
	Kit Hifair® Lyo Multiplex RT-qPCR em uma etapa	11831ES
Mistura Master qPCR	Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix (Um tubo)	16710ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)	13891ES
	Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11827ES
	Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11853ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)	11893ES