Ao usar enzimas tradicionais de alta fidelidade para PCR, é inevitável encontrar alguns problemas espinhosos. Por exemplo, a fidelidade pode não ser suficiente, levando a mutações ou deleções nas bases alvo, mesmo após o sequenciamento dos fragmentos amplificados. O tempo de amplificação também é relativamente longo; às vezes, amplificar um fragmento de 5 kb pode levar quase 2 horas. Agora, XiaoYi apresenta uma PCR rápida de alta fidelidade para resolver seus problemas! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (Pré-mistura de PCR ultrarrápida de alta fidelidade).
O 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (com corante) contém um indicador de eletroforese pré-adicionado, permitindo que os produtos de PCR sejam usados diretamente para eletroforese. Os produtos amplificados têm pontas rombas. Esta mistura de enzimas de alta fidelidade oferece as vantagens de ser rápida, simples, altamente sensível, fortemente específica e estável. No sistema de reação, apenas primers e modelos precisam ser adicionados. Além disso, o produto também contém um protetor específico, que garante que a pré-mistura de PCR de alta fidelidade mantenha atividade estável mesmo após congelamento e descongelamento repetidos.
Características do produto
- Alto Fidelidade: Baixo incompatibilidade avaliar, com um base incompatibilidade razão de 231/300.000 em alto GC propenso a mutação sequências;
- Rápido Amplificação Velocidade: Extensão avaliar como rápido como 5 segundos por KB-K;
- Largo Aplicabilidade: Capaz de cobertura genes com 20-80% GC contente, tolera rato lisados e 20% sangue;
- Bom Estabilidade: Pode ser armazenado no 37°C para 7 dias sem afetando produto desempenho;
- Rápido e Conveniente: Simplesmente adicionar primers e modelo para amplificação, vem com carregando tingir para direto eletroforese.
Demonstração de desempenho do produto
Alta fidelidade, baixa taxa de incompatibilidade
Usando genomas de diferentes espécies como moldes, seis fragmentos ricos em GC que são altamente propensos a mutações/perdas de base foram selecionados para amplificação. Os respectivos produtos de PCR foram clonados em vetores, e 100 clones únicos para cada sequência foram escolhidos para sequenciamento para confirmar ocorrências de incompatibilidade/mutação de base. Os resultados mostraram que o master mix de PCR de alta fidelidade rápida (10164ES) teve uma taxa superior de incompatibilidade/mutação de base em comparação com reagentes de marcas nacionais e internacionais.
O tempo de extensão pode chegar a até 5 segundos/kb
Usando a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) e o Produto T, fragmentos de diferentes comprimentos (0,4-10 kb) foram amplificados de 100 ng de molde de DNA genômico humano a uma taxa de extensão de 5 seg/kb, com um tempo de extensão necessário de 5 seg/kb. Os resultados mostraram que a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) pode amplificar fragmentos dentro de 10 kb a uma taxa de extensão de 5 seg/kb.
Pode amplificar fragmentos de genes com diferentes conteúdos de GC
Usando a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) para amplificar fragmentos de genes com conteúdo de GC de 23-76% de moldes de DNA genômico humano, com o tempo de extensão definido em 5 seg/kb. Os resultados mostraram que o produto tem boa especificidade de amplificação e é capaz de amplificar fragmentos com diferentes conteúdos de GC.
Capaz de amplificar fragmentos de genes com conteúdo variável de GC
Usando a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) para amplificar fragmentos de comprimentos variados de diferentes amostras, com um tempo de extensão definido em 5-10 segundos por quilobase. Os resultados indicam que este produto exibe excelente especificidade de amplificação e é compatível com a amplificação de diferentes fragmentos de vários moldes.
Nota: 1. DNA genômico de camundongo 1 kb; 2. DNA genômico de camundongo 2 kb; 3. DNA genômico de camundongo 6 kb; 4. DNA genômico de milho 1 kb; 5. DNA genômico de arroz 2 kb-A; 6. DNA genômico de arroz 2 kb-B; 7. cDNA de célula humana 293 1 kb; 8. cDNA de célula humana 293 2 kb; 9. cDNA de célula humana 293 3 kb; 10. cDNA de célula humana 293 12 kb; 11. Caldo de E. coli 8 kb; 12. Caldo de E. coli 16 kb; 13. DNA genômico de arroz 10 kb-A; 14. DNA genômico de arroz 10 kb-B; 15. DNA genômico de arroz 10 kb-C; 16. DNA genômico de arroz 20 kb-A; 17. DNA genômico de arroz 20 kb-B; 18. Amplificação direta de sangue humano 3 kb.
Alta taxa de detecção de amplificação de modelo em diferentes espécies
Usando a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES), diferentes fragmentos de conteúdo de GC variando de 0,5-10 kb em Arabidopsis, colza e batata foram amplificados, com um tempo de extensão de 5 seg/kb. Os resultados mostraram que a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) pode garantir uma amplificação bem-sucedida.
Usando a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES), sequências aleatórias (selecionadas aleatoriamente) de Arabidopsis, colza, moscas-das-frutas, Caenorhabditis elegans e peixe-zebra, com tamanhos de fragmentos variando de 0,5 a 10 kb e cobrindo 20 a 80% do conteúdo de GC, foram amplificadas. O tempo de extensão foi definido em 5 seg/kb. Os resultados mostraram que a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) tem uma alta taxa de detecção.
Boa estabilidade
Usando a pré-mistura enzimática rápida de alta fidelidade (10164ES) que foi acelerada por calor e armazenada a 37℃ por 3 dias e 7 dias, respectivamente, para amplificar fragmentos de DNA de 3 kb e 5 kb de 100 ng de DNA genômico humano, com um tempo de extensão definido em 5 seg/kb. Os resultados mostram que o produto tem boa estabilidade.
Feedback do teste do cliente
Animal gDNA-120pb-50%GC
Avaliação do cliente: O processo de PCR é rápido, as bandas são apropriadas e podem ser carregadas diretamente na eletroforese em gel de agarose. As bandas da marca N são enviesadas para cima, o que pode ser devido à influência de seu próprio tampão e, como nenhum tampão de carga foi adicionado, este produto pode substituir a enzima de alta fidelidade em meu protocolo experimental atual.
Plantar cDNA-729pb-45,13%GC
Avaliação do cliente: Comparado à marca T, as bandas de clonagem são mais claras e uniformes, e todo o processo de PCR é mais rápido. Não há necessidade de adicionar corante extra ao executar o gel, o que é muito conveniente e economiza tempo.
Microbiano gDNA-1158、1953pb-58,8%、52,9%GC
Avaliação do cliente: Comparado à marca V, o efeito é comparável, mas, pessoalmente, acho ainda melhor.
Plantar cDNA-2000pb-40%GC
Avaliação do cliente: O efeito é muito bom e a tira é transparente.
Guia de seleção de PCR de alta fidelidade
| Posicionamento do produto | Nome do produto | Gato# |
| 5s/kb, garante fidelidade e rapidez (Com Tingir) | 10164ES | |
| 5s/kb, garante fidelidade e velocidade (Sem corante) | 2× Hieff Canace™ Mistura Master AdvanceFast PCR | 10163ES |
| 83×Taq, alta taxa de detecção (com corante) | 2×Hieff Canace™ Mais PCR Master Mix (com corante) | 10154ES |
| 83×Taq enzima única + tampão separado | 10153ES |