A purificação de proteínas é uma técnica fundamental em bioquímica e biologia molecular, amplamente utilizada em pesquisas, diagnósticos e aplicações terapêuticas. Para estudar uma proteína específica, o primeiro passo é isolá-la e purificá-la de amostras biológicas. No entanto, obter proteína de alta pureza pode ser um desafio, dada a diversidade de proteínas e a complexidade dos sistemas biológicos. Entender os princípios básicos da purificação de proteínas e selecionar as técnicas certas para sua pesquisa pode aumentar muito a eficiência e o rendimento do seu fluxo de trabalho.
Noções básicas de purificação de proteínas
A purificação de proteínas depende de diferenças nas propriedades físicas e químicas das proteínas, como tamanho, carga, hidrofobicidade e afinidade por ligantes específicos. Ao explorar essas diferenças, os pesquisadores podem efetivamente separar proteínas-alvo de outros componentes biológicos, minimizando a contaminação.
Aqui estão as principais técnicas de purificação de proteínas baseadas em mecanismos de separação distintos:
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| Filtração em gel | Troca iônica | Interação hidrofóbica | Afinidade |
| Mecanismo de Separação | Tamanho | Carga de superfície da proteína | Hidrofobicidade | Afinidade Específica |
| Seletividade | Médio | Alto | Alto-médio | Muito alto |
| Capacidade de carga | Baixo | Alto | Alto | Alto |
| Velocidade de purificação | Médio-baixo | Alto | Alto | Alto |
| Biocompatibilidade | Muito bom | Bom | Médio-Bom | Bom |
| Rendimento de proteína alvo | Alto | Alto | Médio-Alto | Alto |
Cada uma dessas técnicas pode ser otimizada selecionando os materiais e colunas apropriados. O método ideal depende das características da proteína e do nível de pureza necessário para aplicações downstream.
Otimizando seu fluxo de trabalho de purificação de proteínas com Yaliviar Produtos de Biologia
No
Sua etiqueta purificação de proteína (Cat#20502ES):
Na expressão de proteína recombinante, o Sua etiqueta (normalmente 6×His) é amplamente utilizado devido ao seu pequeno tamanho, baixa imunogenicidade e impacto mínimo na função da proteína. Suas proteínas de marcação podem ser purificadas eficientemente por resinas de afinidade queladas com íons de níquel, como resinas Ni-NTA. Resina de agarose HisSep Ni-NTA (Cat#20502ES) fornecido por Yaliviar Biologia usa gel de agarose altamente reticulado como matriz, combinado com o ligante de ácido triacético de nitrogênio (NTA) quad-coordenado para formar quelatos de íons de níquel estáveis. A estrutura combinada garante ligação de proteína eficiente e desempenho de eluição.
Purificação de afinidade de anticorpo de tag
A purificação por afinidade de anticorpos de tag utiliza alta ligação específica entre o anticorpo e sua tag específica para atingir a purificação da proteína de fusão. As tags comuns incluem Bandeira, HA, Myc, etc. Ao utilizar o meio de afinidade de anticorpo correspondente, a proteína de interesse pode ser eficientemente isolada de amostras complexas.
Biologia de
- Afinidade Anti-Bandeira Gel (Gato#20584ES):
Preparado a partir de anticorpo monoclonal IgG2b murino de alta qualidade com gel de agarose altamente reticulado a 4%.ugh fornecimento de acoplamento, tem uma alta capacidade de carga de proteína de fusão Flag-tag, suitável para imunoprecipitação e purificação de proteínas Flag-tag. yeasen.com
- Gel de afinidade anti-HA(Gato#20586ES):
Preparado a partir de anticorpo monoclonal IgG1 murino de alta qualidade e gel Sepharose 4B por meio de acoplamento de fornecimento, possui alta capacidade de carga de proteínas de fusão de marcadores HA, adequadas para imunoprecipitação e purificação de proteínas de marcadores HA.com
- Gel de afinidade anti-Myc（Gato#20587ES）:
O anticorpo monoclonal IgG1 murino de alta qualidade é acoplado ao gel Sepharose 4B, projetado para a purificação de proteínas marcadas com Myc, com alta especificidade e alta capacidade de ligação.
- Contas imunomagnéticas anti-bandeira（Gato#20565ES）:
Esta esfera imunomagnética é acoplada com microesferas de agarose magnética usando anticorpo monoclonal IgG2b de alta qualidade derivado de camundongo, que pode purificar rapidamente proteínas marcadas com Flag sob a ação de campos magnéticos e é adequada para purificação de amostras pequenas.
Purificação por afinidade de anticorpos (Cat#36401ES):
Purificação por afinidade de anticorpos é um método de usar a ligação específica de um anticorpo ao seu antígeno para purificação de proteínas. A resina de purificação de agarose de proteína A recombinante resistente a álcalis (Cat#36401ES) é comumente usada como um meio de purificação de afinidade de anticorpos e é amplamente utilizada para purificação e enriquecimento de anticorpos.
Proteinase
Em estudos de proteínas, proteases são empregadas para clivar marcadores de fusão, restaurando o estado natural da proteína alvo. Incorporar essas proteases em seu fluxo de trabalho de purificação de proteínas pode melhorar a qualidade e a funcionalidade de suas proteínas alvo, facilitando projetos avançados de pesquisa e desenvolvimento.
- Enteroquinase recombinante (Cat#20401ES):
Enteroquinase, também conhecida como enteropeptidase, é uma serina protease que cliva especificamente após a sequência de aminoácidos DDDDK. A enteroquinase recombinante de
- euPNGase F (Cat#20407ES):
A PNGase F é uma amidase que cliva especificamente entre os resíduos GlcNAc e Asn mais internos de glicoproteínas ligadas a N. A PNGase F da
- Tripsina recombinante (MS-SAFE) (Cat#20416ES):
A tripsina é uma serina protease que cliva ligações peptídicas no lado carboxílico de resíduos de lisina e arginina. A tripsina recombinante de
| Purificação Método | Tipo de reagente | Tipo de produto | Produtos recomendados |
| Filtração em gel | Dextrano Gel Cromatografia | Enchimentos de dessalinização Dessalinização de colunas pré-embaladas Colunas de gravidade de dessalinização Colunas de centrifugação
| Coluna de dessalinização G25 M（Gato#20590ES） Coluna de dessalinização por centrifugação, 0,5 mL （Gato#20599ES） Coluna de dessalinização por gravidade, 8.3 mL (Gato#20741ES） |
| Agarose Gel Cromatografia | Enchimento Colunas pré-embaladas | Embalagem de cromatografia em gel de agarose de alta resolução Geldex 200 PG (10-600 kDa) (Cat#20598ES) Coluna de cromatografia Geldex 200 PG （Gato#20593ES） | |
| Troca iônica | Troca aniônica Cromatografia | Enchimento Colunas pré-embaladas | Q Agarose HP (Q Forte Cromatografia de Troca Aniônica HP) (Cat#20460ES) Coluna pré-embalada de troca aniônica forte Q HP, 5 mL (Cat#20462ES) |
| Cromatografia de troca catiônica | SP Agarose HP (empacotamento de cromatografia de troca catiônica forte SP HP) (Cat#20463ES) Coluna pré-embalada SP HP Strong Cation Exchange, 5 mL (Cat#20465ES) | ||
| Cromatografia de interação hidrofóbica | Hidrofóbico fraco Cromatografia | Enchimento Colunas pré-embaladas | Meio de cromatografia hidrofóbica fraca de butil de alta resolução (Cat#20484ES) Coluna pré-carregada de cromatografia fracamente hidrofóbica de butil HP, 5 mL (Cat#20485ES) |
| Fortemente hidrofóbico Cromatografia | Meio de cromatografia fortemente hidrofóbico de fenil de alta resolução (Cat#20486ES) Coluna pré-carregada para cromatografia fortemente hidrofóbica Phenyl HP, 5 mL (Cat#20487ES) | ||
| Purificação de afinidade | Sua etiqueta Purificação de Proteínas | Resina Colunas pré-embaladas Esferas Magnéticas de Purificação
| Resina de purificação de proteína de agarose His-tag (Cat#20502ES) Coluna pré-carregada de purificação de proteína His-tag, 5 mL (Cat#20504ES) Contas magnéticas de purificação de proteínas His-tag (Cat#20561ES) |
| Imposto sobre bens e serviços-marcação Purificação de Proteínas | Resina Colunas pré-embaladas Esferas Magnéticas de Purificação
| Resina de glutationa agarose (para purificação de proteínas marcadas com GST) (Cat#20507ES) Coluna pré-carregada de purificação de proteína com etiqueta GST, 5 mL (Cat#20510ES) Contas magnéticas de purificação de proteínas com etiqueta GST (Cat#20562ES) | |
| PMB-marcação Purificação de Proteínas | Resina Colunas pré-embaladas
| Resina de purificação altamente reticulada de proteína marcada com MBP (Cat#20515ES) Coluna pré-carregada de purificação de proteína marcada com MBP, 5 mL (Cat#20517ES) | |
| Estreptococo(II) Marcação Purificação de Proteínas | Resina Colunas pré-embaladas
| Resina de purificação de proteína agarose marcada com estreptococos (II) (Cat#20495ES) | |
| Bioti-marcação Purificação de Proteínas | Resina Colunas pré-embaladas Contas imunomagnéticas | Resina de purificação de agarose estreptavidina (Cat#20512ES) Coluna pré-carregada de purificação molecular de biotina, 5 mL (Cat#20514ES) Esferas imunomagnéticas de estreptavidina (SAV) (Cat#47503ES) | |
| Purificação de afinidade de anticorpo de tag | Gel Contas imunomagnéticas | Gel de purificação de afinidade anti-bandeira (Cat#20584ES) Gel de purificação de afinidade anti-HA (Cat#20586ES) Gel de purificação de afinidade anti-Myc (Cat#20587ES) Contas imunomagnéticas anti-bandeira (Cat#20565ES) | |
| Purificação por afinidade de anticorpos | Resina Colunas pré-embaladas Contas imunomagnéticas | Resina de purificação de proteína A agarose recombinante (Cat#36401ES) Resina de purificação de proteína G agarose (Cat#36405ES) Resina de purificação de proteína A/G agarose (Cat#36403ES) Esferas imunomagnéticas de proteína A/G (Cat#36417ES) | |
| Purificação de afinidade de outros anticorpos | Resina Colunas pré-embaladas
| Resina de purificação de remoção de endotoxina de alta eficiência (Cat#20518ES) Meio de purificação de afinidade de heparina (Cat#20493ES) | |
| 其他产品 | Proteases | Enzimas de clivagem de tags Glicosidases Enzimas de grau de espectrometria de massa | E.coli Enteroquinase recombinante expressa (sem rótulo) (Cat#20401ES) Trombina bovina (alta viabilidade, >2000 UI/mg) (Cat#20402ES) Protease rTEV Protease do vírus de corrosão do tabaco recombinante (Cat#20403ES) PNGase F, N-glicosidase F (100000 U/mL) (Cat#20407ES) Tripsina recombinante (MS-SAFE) Tripsina recombinante (grau de espectrometria de massa) (Cat#20416ES) |
| Consumíveis para cromatografia | Colunas vazias de fluxo gravitacional tipo Colunas Vazias Colunas YXK Bolsas de diálise | Coluna vazia para cromatografia de gravidade de 12 mL (Cat#20523ES) Coluna vazia tipo C de 5 mL (conectada ao Akata, seringa ou bomba peristáltica) (Cat#20526ES) Coluna vazia para cromatografia YXK16/70 (Cat#20443ES) Bolsa de diálise de 27 mm (MWCO 50 kDa) (Cat#20534ES) |
Conclusão: Adapte seu fluxo de trabalho às suas necessidades
Otimizar seu fluxo de trabalho de purificação de proteínas é crucial para atingir proteínas de alta pureza e alto rendimento para sua pesquisa ou aplicação. Ao entender os princípios de purificação e selecionar as ferramentas certas, você pode simplificar seu processo e evitar armadilhas comuns.
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