Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (Flag): purificação de precisão para proteínas de membrana de baixa abundância

No campo da pesquisa biomédica, a purificação de proteínas é uma tecnologia essencial para explorar os mistérios da vida. No entanto, os métodos tradicionais de purificação enfrentam ineficiência e altos custos — especialmente para proteínas de membrana, que são o foco da pesquisa em biologia estrutural. Essas proteínas são estruturalmente complexas, têm baixos níveis de expressão em membranas celulares e são sensíveis às condições ambientais, tornando sua purificação particularmente difícil. Agora, Yeasen A biotecnologia, com suas excelentes capacidades de P&D, lançou a versão atualizada Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) (Cat#20584ES), uma ferramenta poderosa para purificação de proteínas eficiente e conveniente, mesmo para proteínas de membrana desafiadoras.

Desempenho do produto

1. Alta especificidade e alta capacidade de ligação: principais vantagens para captura de proteína alvo

Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) (Cat#20584ES) é preparado por acoplamento covalente de anticorpos monoclonais IgG2b de camundongo de alta qualidade com gel de agarose altamente reticulado a 4%. Este processo de fabricação exclusivo confere ao produto uma especificidade extremamente alta, permitindo que ele reconheça e ligue precisamente proteínas de fusão com a etiqueta Flag. Seja a proteína de fusão Flag N-terminal modificada por Met (Met-Flag-Proteína), a proteína de fusão Flag N-terminal (Bandeira-Proteína), ou a proteína de fusão Flag C-terminal (Bandeira de proteína), o gel pode lidar com eles com facilidade.

Na purificação de proteínas de membrana, essa especificidade é particularmente importante porque essas proteínas são estruturalmente complexas e propensas a ligações não específicas com outras proteínas. A alta especificidade do gel Flag reduz efetivamente a interferência de proteínas não específicas, garantindo alta pureza das proteínas de membrana purificadas. Além disso, o gel tem alta capacidade de ligação para proteínas de fusão marcadas com Flag (pelo menos 1,1 mg de proteína/mL gel). Isso significa que, mesmo que a proteína alvo seja expressa em níveis baixos, ela ainda pode ser capturada e purificada de forma eficiente usando o gel Flag.

2. Alta pureza e alto rendimento: permitindo aplicações downstream

Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) (Cat#20584ES) tem ligação mínima não específica de impurezas, resultando em amostras de proteína altamente puras após a purificação. Isso é crucial para aplicações posteriores, como ensaios de bioatividade e análise estrutural. Amostras de proteína de alta pureza fornecem dados experimentais mais precisos, estabelecendo uma base sólida para os estudos dos pesquisadores.

3. Fluxo de trabalho experimental otimizado: simplificando os desafios da purificação de proteínas

A purificação de proteínas precisa ser conduzida sob condições suaves para evitar danos estruturais às proteínas, especialmente para proteínas de membrana complexas. Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) (Cat#20584ES) foi projetado com isso em mente. Seu buffer de armazenamento é TBS contendo 50% de glicerol em pH 7.4, que não apenas protege a atividade do gel, mas também fornece um ambiente suave para purificação de proteínas.

O processo de purificação com o gel Flag é simples e eficiente. Para facilitar o uso da eluição do peptídeo 1×Flag, o pacote do produto inclui um peptídeo 1×Flag de cortesia (Cat#20572ES). Isso torna o processo de eluição suave (com quase nenhum dano às proteínas) e altamente conveniente (aumentando ainda mais a facilidade de experimentação).

4. Vários tamanhos e opções de envio flexíveis: atendendo a diversas necessidades experimentais

Considerando as diferentes escalas e necessidades dos diferentes laboratórios, Yeasen oferece o gel Flag em vários tamanhos, incluindo 1 mL, 5 mL, 25 mL e 100 mL. Seja para exploração preliminar em pequena escala ou produção de proteína em larga escala, há uma opção adequada disponível. Para compras anuais de grande volume, os clientes podem escolher receber remessas em lotes, permitindo que eles aproveitem descontos de preço enquanto evitam a pressão de estoque excessivo.

Dados de teste

M: Marcador de Proteína 1: Amostra bruta pré-coluna de proteína Flag-N/Flag-M/Flag-C 2: Fluxo pós-coluna da proteína Flag-N/Flag-M/Flag-C 3: Eluição (eluição pH 2,7) 4: Eluição (eluição pH 12) 5: Eluição (1×Eluição do peptídeo sinalizador) 6: Gel purificado (eluição pH 2,7) 7: Gel purificado (eluição pH 12) 8: Gel purificado (1×Eluição do peptídeo sinalizador) um：Bandeira-N   b：Bandeira-M   c：Bandeira-C

Figura 1.   Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) resultados de purificação para proteínas de baixa expressão (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)) mostrados em SDS-PAGE.

M: Marcador de Proteína 1: Amostra bruta pré-coluna de proteína Flag-C 2: Fluxo pós-coluna da proteína Flag-C 3: Eluição (eluição pH 2,7) 4: Eluição (eluição pH 12) 5: Eluição (1×Eluição do peptídeo sinalizador) 6: Gel purificado (pH 2.7 eluição) 7: Gel purificado (eluição pH 12) 8: Gel purificado (1×Eluição do peptídeo sinalizador) um：Yeasen b：Marca S*   c：Marca G*

Figura 2. Comparação de Yeasen (a) comBrand S* (b) e Brand G* (c) Géis anti-Flag na purificação de proteínas de baixa expressão (por exemplo, proteínas de membrana) mostradas em SDS-PAGE.

Conclusões:

1. Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) (Cat#20584ES) tem alta especificidade e pode se ligar a marcadores Flag em várias posições (proteínas de fusão Flag N-terminais, proteínas de fusão Flag N-terminais modificadas por Met, proteínas de fusão Flag C-terminais).

2. Em condições de expressão de proteína alvo extremamente baixa (por exemplo, proteínas de membrana), Yeasen Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira) (Cat#20584ES) atinge rendimentos e purezas significativamente maiores em comparação aos concorrentes. O uso de Yeasen O peptídeo 1×Flag complementar (Cat#20572ES) para eluição fornece resultados ainda melhores.

Soluções completas para proteínas de fusão marcadas com bandeira:

Enteroquinase recombinante (Cat#20395ES): Uma protease específica que cliva a extremidade carboxila da lisina precedida por quatro ácidos aspárticos: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Esta sequência é parte da etiqueta Flag do octapeptídeo (DYKDDDDK). A Enterokinase recombinante (rEK) pode remover facilmente a etiqueta Flag das proteínas de fusão, tornando-a uma ferramenta ideal para estudar a estrutura e a função de proteínas nativas.

Anti-DYKDDDDK (bandeira) MagBeads (Cat#20565ES): Microesferas magnéticas de polímero preparadas por acoplamento covalente de anticorpos monoclonais anti-DYKDDDDK (Flag) de camundongo de alta qualidade com esferas magnéticas à base de sílica (diâmetro de 200 nm). Essas esferas são adequadas para imunoprecipitação (IP) ou co-imunoprecipitação (Co-IP) de proteínas com a etiqueta Flag.

Informações do produto

Nome do produto	Número do produto	Especificação
Gel de afinidade anti-DYKDDDDK (bandeira)	20584ES03/25/08	1 mL/5 mL/25 mL
Enteroquinase bovina recombinante, His, expressa em levedura	20395ES60/76/90	100 você/500 U/5000 U
Anti-DYKDDDDK (bandeira) MagBeads	20565ES03/08	1 mL/5 mL