1. Introdução de fundo
A estreptavidina é uma proteína de ligação à biotina derivada de Streptomyces avidinii. Sua ligação não específica é muito menor do que a da avidina e, comparada à avidina da clara do ovo, que tem uma carga líquida positiva em pH neutro e contém cerca de 7% de carboidratos, a estreptavidina tem propriedades químicas mais favoráveis, como quase nenhuma carga líquida em pH neutro e nenhum carboidrato. Portanto, é amplamente usada como uma alternativa à avidina.
2. Características do produto
Estrutura do tetrâmero:A estreptavidina existe como um homotetrâmero com um tamanho de 66 KDa;
Alta afinidade:Cada molécula de estreptavidina pode se ligar de forma altamente específica a quatro moléculas de biotina, com uma afinidade extremamente forte entre elas;
Amplas aplicações: A constante de dissociação do complexo estreptavidina-biotina está na faixa nanomolar, uma propriedade comumente usada em aplicações de biologia molecular; Na maioria das aplicações, pode ser usada de forma intercambiável com proteínas de anticorpos;
Extração de alta qualidade:Obtido por purificação de Streptomyces avidinii;
Figura 1. Estreptavidina
Produto Aplicativo
Aplicação 1: Resina purificada com estreptavidina
1) Princípio de aplicaçãoCom base na interação entre estreptavidina e biotina, a estreptavidina é altamente reticulada a 6% de agarose, e o processo de preparação exclusivo lhe dá propriedades físico-químicas mais altas, permitindo que ela suporte pressões mais altas. Ela pode atingir a purificação da proteína alvo em taxas de fluxo relativamente altas, tornando-a mais adequada para purificação industrial de proteínas em larga escala.
Figura 2. Princípio de purificação da resina de estreptavidina
2）A
Figura 3. Proteína purificada por resina de estreptavidina
3）Perguntas frequentes| Pergunta | Possível razão | Solução recomendada |
| A contrapressão da coluna está muito alta | A embalagem está bloqueada | Limpe a resina. |
| O tampão de lise contém pequenas partículas sólidas; é recomendável filtrar com membrana de filtro de 0,22 μm ou 0,45 μm antes do carregamento, ou centrifugar para remover. | ||
| A amostra é muito viscosa. | A amostra contém alta concentração de ácidos nucleicos, prolongue o tempo de lise até que a viscosidade seja reduzida ou adicione DNase I (concentração final de 5 μg/ml), Mg2+ (concentração final de 1 mM), incubar no gelo por 10-15 minutos | |
| O tampão é muito viscoso | Reagentes orgânicos ou reagentes estabilizadores de proteínas (como glicerol, etc.) podem causar aumento de contrapressão e reduzir a vazão operacional. | |
| Proteína sem propósito no componente de eluição | A clivagem excessiva desnatura a proteína de interesse | Use condições de lise suaves. As condições experimentais são baseadas na experiência. |
| A proteína alvo se agrega para produzir precipitação | Adicione DTT à solução de pré-lise celular em uma concentração final de 1-10 mM. | |
| A proteína alvo não é completamente eluída | O volume de eluição é muito pequeno | Aumente o volume do eluente e diminua a vazão de eluição. |
| O pH do tampão de eluição muda | Use eluente preparado recentemente | |
| O tempo de incubação do eluente não é suficiente | Aumente o tempo de incubação do tampão de eluição com o gel. |
Aplicação 2: Estreptavidina marcada com grupo fluorescente e conjugado enzimático.
Figura 4. Diferentes estreptavidinas conjugadas
1）Estreptavidinas conjugadas com enzimas- Peroxidase de rábano (HRP) conjugada com estreptavidina
Ⅰ.Produzido por estreptavidina de alta pureza e peroxidase de raiz-forte por meio de uma técnica especial de conjugação;
Ⅱ.Mantém a alta atividade específica da peroxidase. Aplicações: Imuno-histoquímica (IHC), Imunocitoquímica (ICC), Hibridização in situ (ISH), etc.
Concentração recomendada: 0,01-0,1 µg/mL para WB (método de quimioluminescência); 1-2 µg/mL para ELISA, HC/ICC, WB (revelação de cor do substrato)
- Fosfatase Alcalina (AP) Estreptavidina Conjugada
Ⅰ. Adequado para análise em fase sólida, sistemas de coloração de tecidos/células e aplicações de blot, com ligação covalente específica;
Ⅱ.O conjugado é estável e altamente ativo.
Aplicações: Imuno-histoquímica (IHC), imunocitoquímica (ICC), ensaio de imunoensaio enzimático (ELISPOT), ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), hibridização in situ (ISH) e aplicações de blot.
Concentração recomendada: 1-2 µg/mL para ELISA, IHC/ICC; 0,1-1 µg/mL para WB
2）Estreptavidinas conjugadas com fluoróforos- Fluor® Fluoresceína Estreptavidina Conjugada
Ⅰ.Recomendado para imunofluorescência de rotina;
ⅡAltamente purificado com características de ligação não específicas muito baixas;
Ⅲ.Alta afinidade pela biotina;
Aplicações: Imunofluorescência (IF), Hibridização in situ (ISH), Citometria de fluxo (Flow Cyt).
Concentração recomendada: 0,5-2 µg/mL (IF)
- DyLight™ Corante Estreptavidina Conjugada
Ⅰ.Pode ser usado para detectar segundos anticorpos biotinilados e outras moléculas grandes em aplicações de imunofluorescência, hibridização in situ ou citometria de fluxo;
ⅡAltamente purificado com características de ligação não específicas muito baixas;
Ⅲ.Afinidade extremamente alta pela biotina;
Ⅳ.Alta fotoestabilidade, insensível ao pH e fluorescência mais brilhante;
Aplicações: Imunofluorescência (IF), Hibridização in situ (ISH), Citometria de fluxo (Flow Cyt).
Concentração recomendada: 0.5-2 µg/mL (SE)
Informações do produto
| Série de produtos | Número do produto | Nome do produto | Especificação |
| Estreptavidina | 35099ES | Estreptavidina (Pó) | 100 mg/1 g |
| 35101ES | Estreptavidina (5mg/ml) | 1 mg/5 mg/10 mg/ 100 mg/1 g | |
| Estreptavidinas conjugadas com enzimas | 35105ES | HRP Estreptavidina | 100 μL |
| 35106ES | Estreptavidina AP | 100 μL | |
| Estreptavidina marcada com fluorescência | 35102ES | DyLight 405™ Estreptavidina | 100 μL |
| 35103ES | YSFluorTM Estreptavidina conjugada com 488 | 100 μL | |
| 35104ES | YSFluorTM Estreptavidina conjugada com 647 | 100 μL | |
| 35107ES | YSFluorTM Estreptavidina conjugada com 584 | 100 μL | |
| 35108ES | Estreptavidina conjugada com Cy3 | 1 mg | |
| Série de purificação de estreptavidina | 20512ES | Resina de agarose estreptavidina 6FF | 5 mL/5 mL×5/100 mL |
| 20513ES | Coluna de cromatografia BiotSep Streptavidin 6FF, 1ML | 1 mL/1 mL×5 | |
| 20514ES | Coluna de cromatografia BiotSep Streptavidin 6FF, 5ML | 5 mL/5 mL×5 |