Introdução aos anticorpos de marcação
Os anticorpos de marcação são usados para a detecção e purificação de sequências de marcação em vários vetores de expressão comerciais para analisar e determinar os níveis de expressão e funções das proteínas alvo. O princípio por trás de seu uso é a reação antígeno-anticorpo, onde esses anticorpos de marcação podem se ligar especificamente às proteínas fundidas de marcação correspondentes. Aqui está uma breve lista de algumas marcações de proteínas comuns adequadas para uso com anticorpos de marcação:
Tabela 1. Introdução a diferentes marcadores de proteína
| Marcação | Sequência | Características | Cenários aplicáveis |
| Bandeira | DYKDDDDK | 1. Pequeno peso molecular, não altera a função da proteína de fusão, mais hidrofílico que marcadores similares; 2. Contém o sítio de reconhecimento da enterocinase (DDDDK), que é conveniente para a remoção da etiqueta quando fundido no N-terminal da proteína alvo. | Adequado para purificação e detecção de proteínas de fusão de baixo nível de expressão em sistemas de expressão eucariótica. |
| AH | YPYDVPDYA | Derivado do determinante do antígeno de superfície hemaglutinina do vírus influenza; evite usar em experimentos relacionados a células apoptóticas. | Adequado para purificação e detecção de proteínas. |
| Meu | Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu | Derivado do proto-oncogene humano Myc; evite usar em experimentos relacionados a células humanas. | Geralmente não é usado para purificação de proteínas, adequado para detecção. |
Os produtos de purificação de afinidade de anticorpos de tag
Guia de seleção de produtos para purificação de anticorpos
| Série de produtos | Série de resina de purificação | Série de esferas imunomagnéticas | |||||
| Número do produto | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| Nome do produto | Anti-HA MagBeads | Anti-MycMagBeads | |||||
| Ligantes | Anticorpos monoclonais IgG de camundongo de alta qualidade | Anticorpos monoclonais anti-GFP/Flag/HA/Myc de camundongo de alta qualidade | |||||
| Capacidade de ligação de proteínas | ≥1,1 mg de proteína de fusão marcada com bandeira/mL de gel ≥1,5 mg de proteína de fusão marcada com HA/mL de gel ≥0,9 mg de proteína de fusão marcada com Myc/mL de gel | ≥0,8 mg de proteína de fusão marcada com GFP/mg contas ≥0,6 mg Proteína de fusão marcada com bandeira/mg esferas ≥0,4 mg de proteína de fusão marcada com HA/mg de esferas ≥0,5 mg de proteína de fusão marcada com Myc/mg contas
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| Matriz | Gel de agarose reticulado a 4% | Esferas magnéticas à base de sílica | |||||
| Tamanho de partícula | 45-165 µm | 200 nm | |||||
| Vantagens | Baixa ligação não específica, alta capacidade | Alta pureza, alta capacidade, alta especificidade, uso conveniente com rack magnético | |||||
| Aplicações recomendadas | Purificação por afinidade de proteínas de fusão marcadas em qualquer escala, imunoprecipitação (IP) | Imunoprecipitação (IP), Co-imunoprecipitação (COIP) | |||||
Dados de teste
1. Teste de comparação de purificação entre o gel anti-flag Affinity da
Figura 1. Teste de comparação de gel anti-bandeira
M: Marcador de proteína; 1: Lisado pré-coluna de proteínas Flag-N, M, C; 2: Permeado pós-coluna de proteínas Flag-N, M, C; 3: Eluição (eluição pH 2,7); 4: Eluição (eluição pH 12)
2. As setas na figura abaixo indicam as proteínas marcadas como alvo, e as três faixas de cima para baixo após a fervura direta das esferas magnéticas são BSA, cadeia pesada do anticorpo e cadeia leve do anticorpo.
Figura 2. Purificação de proteínas marcadas com bandeira por MagBeads anti-bandeira
1: Lisado de E. coli contendo proteína marcada com Flag 10 μL; 2: Sobrenadante após incubação do lisado de E. coli contendo proteína marcada com Flag com esferas magnéticas 10 μL; 3: Ebulição direta da proteína marcada com Flag com Anti-Flag MagBeads 10 μL; 4: Ebulição direta de Anti-Flag MagBeads; 5: Marcador
3.
Figura 3. Purificação de proteínas marcadas com GFP por MagBeads anti-GFP
1: Lisado de E. coli contendo proteína marcada com GFP 10 μL; 2: Sobrenadante após incubação do lisado de E. coli contendo proteína marcada com GFP com esferas magnéticas 10 μL; 3: Ebulição direta da proteína marcada com GFP com Anti-GFP MagBeads 10 μL; 4: Ebulição direta de Anti-GFP MagBeads; 5: Marcador
Informações do produto
| Nome do produto | Número do produto | Especificação |
| 20584ES03/08/25 | 1 mL/5 mL/25 mL | |
| 20586ES03/08/25 | 1 mL/5 mL/25 mL | |
| 20587ES03/08/25 | 1 mL/5 mL/25 mL | |
| 20565ES03/08 | 1 mL/5 mL | |
| Anti-HA MagBeads | 20566ES03/08 | 1 mL/5 mL |
| Anti-Myc MagBeads | 20567ES03/08 | 1 mL/5 mL |
| 20564ES03/08 | 1 mL/5 mL |