Hieff Canace^TM Uracil+ DNA polimerase de alta fidelidade é uma nova geração de DNA de alta fidelidade Polimerase baseada em Pfu DNA Polymerase. O Hieff Canace^TM A DNA polimerase de alta fidelidade Uracil+ permite reações de PCR rápidas e precisas para moldes complexos. Sua fidelidade é melhorada significativamente e evita completamente a falha de amplificação causada pelo uso de primers/moldes/dNTPs contendo dUTP. O produto é equipado com um tampão enzimático otimizado e a adição de componentes de aprimoramento de PCR, tornando a enzima altamente eficiente e adaptável a uma ampla gama de moldes, adequada para amplificação de moldes complexos.

Componentes do produto

Envio e armazenamento

Os componentes são enviados com bolsas de gelo e podem ser armazenados a -20°C por 1 ano.

Aplicação do produto

Amplificação de biblioteca de alta fidelidade usando primers/modelos/dNTPs contendo dUTP.

Cuidados

1. Para sua segurança e saúde, use jalecos e luvas descartáveis ​​para a operação.

2. Somente para uso em pesquisa!

Instruções

Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase é usada de uma forma ligeiramente diferente das enzimas convencionais de alta fidelidade. Leia as instruções cuidadosamente antes de usar.

1. Sistema de reação recomendado

Todas as operações devem ser realizadas no gelo. 2×Canace^TM O tampão Uracil+ PCR deve ser bem misturado após o descongelamento. Antes da configuração do sistema, pré-aqueça o instrumento PCR. Após a adição dos componentes, misture bem a amostra com uma pipeta e gire-a até o fundo do tubo, depois coloque-a no instrumento PCR pré-aquecido para amplificação. Após o uso, retorne todos os componentes a -20 °C para armazenamento.

Tabela 1. Reação de amplificação por PCR

[Notas]:

1) Reagentes: Descongele suficientemente cada componente antes do uso;

2) Modelos: O uso de modelos de DNA purificados de alta qualidade pode melhorar significativamente a eficiência e a taxa de sucesso da amplificação;

3)dNTPs: A concentração final recomendada de dNTPs é de 200 μM. Os dNTPs fornecidos no kit não contêm dUTP. Se circunstâncias especiais exigirem a preparação de modelos contendo dUTP, dUTP adicional pode ser adicionado a uma concentração final de 400 μM.

4) Concentração de polimerase: 1 U/50 μL é recomendado. Pode ser otimizado entre 0,5-2 U/50 μL, não exceda 2 U/50 μL. Para evitar que a polimerase degrade os primers devido à atividade do exonucídeo 3 '→5', é sugerido adicionar polimerase ao sistema de reação na última etapa.

5) Concentração final de Mg2+: A concentração final do sistema é de 2 mM. Peça para nossa empresa fornecer tampão com baixa concentração de Mg2+ ou sem Mg2+ se você tiver necessidades especiais.

2. Procedimento de reação recomendado

Tabela 2. Procedimento de reação de amplificação por PCR

[Notas]：

1)Temperatura e tempo de desnaturação inicial: 98℃ é recomendado. O tempo recomendado é de 30 segundos para modelos simples, como DNA plasmídeo, 1 minuto para bibliotecas, 3 minutos para modelos complexos, como cDNA e DNA genômico, e 5-10 minutos para modelos de alto conteúdo de GC.

2)Temperatura e tempo de recozimento: 60℃ é recomendado, ou o gradiente de temperatura pode ser configurado para encontrar a temperatura ideal para recozimento do primer de acordo com as necessidades. O tempo de recozimento recomendado é de 20 segundos e pode ser ajustado dentro de 10-30 segundos. Um tempo de recozimento muito longo pode levar à dispersão dos produtos amplificados no gel.

3)Temperatura e tempo de extensão: 72℃ é recomendado. O tempo de extensão é ajustado de acordo com as necessidades reais.