Descrição
O Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit é um kit que pode amplificar diretamente amostras de sangue total sem purificação de DNA ou pré-tratamento de amostra, e é compatível com sangue fresco, sangue resfriado (congelado) e manchas comerciais de sangue seco contendo anticoagulantes convencionais, como EDTA, heparina, citrato, etc. O kit contém uma combinação de DNA polimerase geneticamente modificada com alta fidelidade e resistência a inibidores de PCR, tampão 2× Hieff® Blood Advanced PCR com forte fator de alongamento, fator de aprimoramento de amplificação e sistema de tampão otimizado para amplificar eficientemente 8 kb de fragmentos genômicos sob condições de extensão rápida e definir um tempo de extensão de 3-5 s/kb para fragmentos abaixo de 2 kb, encurtando significativamente o tempo de identificação e teste de amostras de sangue.
Especificações
| Fidelidade (vs. Taq) | 1 × |
| Início quente | Sim |
| Saliência | 3'-A |
| Polimerase | Taq DNA Polimerase (Cat: 10726) |
Componentes
| Não. | Nome | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hieff® Tampão PCR avançado para sangue | 500 µeu | 2,5 mL |
| 10188-B | Hieff® Mistura avançada de DNA polimerase de alta fidelidade | 20 µeu | 100 μL |
| 10188-C | Mistura de primer de controle positivo (10 μM cada) | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | Tampão de carregamento de DNA 10× | 1 mL | 1 mL |
Instruções
Sistemas de reação de PCR recomendados.
| Componentes | Volume (μL) |
| ddH2O | para 50 μL |
| 2× Hieff® Tampão PCR avançado para sangue | 25 μL |
| Primer de avanço (10 μM) | 2 μL |
| Primer reverso (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Mistura avançada de DNA polimerase de alta fidelidade | 1 μL |
| Amostra de sangue | X |
2. Recomenda-se uma concentração final de 0,4 μM por primer, pois uma concentração muito alta resultará em amplificação não específica.
3. A concentração ótima do molde de sangue total varia de 0,5% a 20%, e o uso recomendado é de 10% como condição inicial do teste, ou seja, 5 μL de sangue total são adicionados como molde ao sistema de reação de 50 μL, tomando cuidado para evitar aspirar coágulos sanguíneos. Para manchas de sangue seco armazenadas em cartões de filtro Whatman®, aproximadamente 1 mm2 de pedaços redondos de papel com manchas de sangue podem ser retirados e amplificados diretamente na reação de PCR sem pré-tratamento.
Programa de reação
| Ciclo etapa | Temperatura. | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação inicial | 95℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturação | 95℃ | 15 segundos | 30-35 |
| Recozimento | 60℃ | 15 segundos | |
| Extensão | 72℃ | 3-10 seg/kb | |
| Final extensão | 72℃ | 5 minutos | 1 |
A temperatura de annealing é um valor Tm genérico ou 1-2°C abaixo do valor Tm do primer. Se o produto de amplificação for menos específico, um gradiente de temperatura de annealing pode ser estabelecido para encontrar condições ótimas de annealing.
O tempo de extensão de 10 seg/kb pode amplificar a maioria dos fragmentos alvo abaixo de 8 kb, e 3-5 seg/kb pode amplificar a maioria dos fragmentos abaixo de 2 kb. Se a eficiência de amplificação for baixa, o tempo pode ser apropriadamente estendido para 20-30 seg/kb, e não deve exceder 60 seg/kb.
Envio e armazenamento
Os produtos devem ser armazenados a -15℃ ~ -25℃ para 1 ano
Figuras
Notas
1. Recomenda-se que o modelo de sangue seja usado como 10% do volume total da reação, ou seja, 5 μL de sangue total são adicionados ao sistema de reação de 50 μL como modelo, tomando cuidado para evitar a aspiração de coágulos sanguíneos.
2. O tempo de extensão de 10 seg/kb pode amplificar a maioria dos fragmentos alvo abaixo de 8 KB, e 3-5 seg/kb pode amplificar a maioria dos fragmentos abaixo de 2 KB. Se a eficiência de amplificação for baixa, o tempo pode ser estendido para 30 seg/kb.
3. Após a reação de PCR, recomenda-se centrifugar o produto da reação a 4000 rpm (1000× g) por 1-3 min para precipitar fragmentos de células sanguíneas e coletar o sobrenadante para análise posterior.
4. Este produto não pode ser usado diretamente para diagnóstico médico.
5. Para sua segurança e saúde, use um jaleco e luvas descartáveis.
Pagamento e segurança
Suas informações de pagamento são processadas com segurança. Não armazenamos detalhes do cartão de crédito nem temos acesso às informações do seu cartão de crédito.
Investigação
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Perguntas frequentes
O produto é apenas para fins de pesquisa e não se destina ao uso terapêutico ou diagnóstico em humanos ou animais. Os produtos e o conteúdo são protegidos por patentes, marcas registradas e direitos autorais de propriedade da
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