Quick T4 DNA Ligase é um produto de enzima única que pode ser usado para a ligação de fragmentos de DNA e adaptadores no processo de construção de biblioteca NGS. Este produto foi verificado por sequenciamento de alto rendimento e tem excelente qualidade. Para clientes que não precisam de ajuste experimental do sistema, é recomendado comprar o Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607).

Componentes do produto

Envio e armazenamento

O produto é enviado com bolsas de gelo e pode ser armazenado a -20°C por dois anos.

Definição de unidade

Em um sistema de reação de ligação de 20 μL, quando 6 μg de λDNA-Hind Ⅲ reagem a 16℃ por 30 minutos, a quantidade de enzima necessária para dar mais de 50% de ligação dos fragmentos de DNA foi definida como uma unidade (U).

Cuidados

1. Se ocorrer uma pequena quantidade de precipitação quando o tampão estiver derretendo, inverta e misture bem antes de usar;

2. Para sua segurança e saúde, use jalecos e luvas descartáveis ​​para a operação.

3. Este produto é SOMENTE para uso em pesquisa!

Instruções

1. Os kits de construção de biblioteca de DNA convencionais atuais geralmente não são purificados após o reparo final e o tratamento de cauda A, e realizam diretamente a ligação do adaptador. Consulte a preparação a seguir para o sistema de reação. Agite bem, gire brevemente e incube por 15 min a 20°C.

[Nota]: *50% PEG 6000 não é fornecido no kit, você precisa prepará-lo sozinho.

**Consulte a tabela a seguir para saber a quantidade de adaptadores.

***A quantidade de Quick T4 DNA Ligase usada pode ser adicionada de 1 a 5 μL conforme necessário.

2. A qualidade e a concentração dos adaptadores usados ​​afetam diretamente a eficiência da ligação e o rendimento da biblioteca. O uso excessivo do adaptador pode produzir mais dímeros de adaptador, enquanto o uso menor pode afetar a eficiência da ligação e o rendimento da biblioteca. A tabela a seguir lista a quantidade recomendada de adaptadores usados ​​em diferentes situações de DNA de entrada usando este kit.

[Nota]: Mol de DNA de entrada (pmol) ≈ DNA de entrada (ng) / [0,66 × Comprimento médio do DNA de entrada (pb)].

Exemplo de cálculo de ligação do adaptador: Quanto adaptador deve ser adicionado quando o DNA de entrada é 100 ng e o comprimento é 300 pb?

Etapa 1: Calcule o número de mols de DNA de entrada. Fórmula: Mol de DNA de entrada (pmol) ≈ DNA de entrada (ng) / [0,66 × comprimento médio do DNA de entrada (bp)]; Mol de DNA de entrada (pmol) = 100 ÷ (0,66 × 300) = 0,5 pmol;

Etapa 2: De acordo com a tabela acima, calcule o número de mols de adaptador adicionado.; Quando o DNA de entrada é 100 ng, a proporção molar de adaptadores: DNA de entrada é 100:1, e o número de mols de adaptadores adicionados = 100 × 0,5 pmol = 50 pmol;

Etapa 3: Calcule o volume de adição do adaptador. Concentração do adaptador = 15 μmol/L (se você usar o adaptador de outra empresa, precisará determinar sua concentração de acordo com suas instruções); Volume do adaptador adicionado = mols do adaptador adicionado (50 pmol) ÷ concentração do adaptador (15 μmol/L) = 3,34 μL (Nota: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Em resumo, o volume ao qual o adaptador pode ser adicionado é de 3,4 μL. (Observação: o volume máximo de adição do adaptador não excede 5 μL).