Descrição
Esta é uma variante de RNA polimerase T7 projetada (baixo dsRNA) derivada da RNA polimerase T7 de tipo selvagem e produzida em Escherichia coli. Ela reduz significativamente a produção de RNA fita dupla (dsRNA) enquanto incorpora eficientemente análogos de cap, e exibindo transcrição in vitro (IVT) altamente eficiente comparável à RNA polimerase T7 do tipo selvagem. Ele catalisa a síntese 5'→3' de RNA em DNA fita dupla a partir de sua sequência promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') e usa NTPs como substratos.
Nota: G* é a primeira base do transcrito de RNA.
Recurso
- Nível de dsRNA reduzido para cerca de 1/100000
- Compatível com Trilink CleanCap AG, LZCap
- Altos rendimentos comparáveis ao WT
- Entrada de Cap Inferior
- Livre de origem animal (AOF)
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Componentes
| Componentes No. | Nome | 10629ES10 | 10629ES60 | 10629ES72 | 10629ES86 |
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| (10 KU) | (100 KU) | (250 KU) | (2.500 KU) |
| 10629 | CleaScrip™ T7 RNA polimerase (GMP Grade, baixo dsRNA, 250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 1 mL | 10 mL |
Especificações
| Fonte | Recombinante E. coli com gene T7 RNA Polimerase |
| Temperatura Ótima | 37℃ |
| Buffer de armazenamento | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1% Triton X-100, 50% (v/v) glicerina, pH 7,9 em 25℃ |
| Definição de unidade | A quantidade de enzima necessária para incorporar 1 nmol de [3H] GMP no precipitado insolúvel em ácido dentro de 1 hora a 37°C e pH 8,0 é definido como 1 unidade. |
| Mg2+ recomendado | Acetato de magnésio 30mM |
Controle de qualidade Padrão
| EUtemas | Especificação/Padrão |
| Enzima atividade | 250-300U/μL |
| Pureza da Proteína | ≥95% |
| Endotoxina | <20 UE/mg |
| Protease | Negativo |
| Exonuclease | Negativo |
| Nickase | Negativo |
| RNase | Negativo |
| Proteína hospedeira E. coli | <50 ppm |
| E.hospedeiro coli ADN | <10 fg/U |
| Exame de micoplasma | Negativo |
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Tris NTPs diminuindo sinergicamente o dsRNA
Figuras
Figura 2. Avaliação da imunogenicidade dos produtos IVT na AR murinaW264.7 células (Figuras 2A e 2B). Os níveis de mRNA e proteína do IFN-β foram reduzidos na ARW264.7 células transfectadas com mRNA produzido por mutantes em comparação com o tipo selvagem, indicando que o mRNA sintetizado pelo RNAP T7 do tipo selvagem provocou a resposta imune mais forte, enquanto o mRNA dos mutantes mostrou uma resposta significativamente reduzida.
Figura 3. O conteúdo de dsRNA no mRNA sintetizado com a RNA polimerase CleaScript™ T7 é menor do que no mRNA sintetizado com a enzima selvagem após o tratamento com celulose.
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