LZCap AU (3'Acm) é um análogo cap1. O produto é usado para transcrição com a sequência inicial de 5'AU3', e a estrutura natural cap1 é produzida pelo capping de transcrição Cap1. Comparado com Cap0 produzido pelo método de capping tradicional, a estrutura cap1 produzida por CapAU (3'Acm) permite que o SaRNA tenha maior atividade e eficiência de tradução in vivo.

Patente aprovada nos EUA.

Componentes

Detalhes do produto

LZCap^® Design de modelo de DNA

LZCap^®AU(3'Acm) é adequado para sequências iniciadas por AG. Conforme mostrado na figura abaixo, o promotor T7 (sublinhado) seguido pela sequência AG pode efetivamente iniciar a transcrição.

Protocolo

1． Descongele os componentes necessários para o experimento no gelo.

2． Consulte o seguinte sistema de reação para configurar o sistema de transcrição em temperatura ambiente.

O N1-Me-pUTP modificado pode ser usado no lugar do UTP do tipo selvagem. O N1-Me-pUTP modificado reduz a imunogenicidade do mRNA. A Henovcom também pode fornecer o nucleotídeo modificado N1-Me-pUTP (Cat. No.: HN1002).

Notas:

1)     LZCap^®AU(3'Acm) é adequado para o vetor de transcrição do promotor T7 com 5 sequências iniciadas por 'AU 3', o que precisa ser considerado ao construir o vetor.

2)     Os reagentes, consumíveis e recipientes usados ​​no experimento estão livres de contaminação por RNase.

3)     Recomenda-se usar um modelo de DNA linearizado para transcrição.

4)     Quando nucleotídeos modificados foram usados ​​no lugar de nucleotídeos selvagens, a concentração final da reação não foi alterada.

5)     Se o produto de PCR for usado como molde de DNA para iniciação da transcrição, a quantidade de molde de DNA pode ser reduzida pela metade.

3． Misture a solução de reação preparada, centrifugue brevemente e incube a 37°C por 2-3 horas. Se o comprimento do transcrito for menor que 100nt, aumente o tempo de reação para 4-8 h.

Perfil Geral de Segurança

Armazenar

Este produto pode ser armazenado a -25~-15 ℃ por dois anos.

Precauções

1. Para sua segurança e saúde, use equipamentos de proteção individual (EPI), como jalecos e luvas descartáveis, ao operar este produto.
2. Somente para uso em pesquisa.
   

Perguntas e respostas

1. Como você projeta o LZCap?

As enzimas têm um reconhecimento relativamente "específico" de substratos. Portanto, ao projetar uma nova estrutura de cap, por um lado, precisamos de novas modificações estruturais para fins de patente, mas, por outro lado, nos esforçamos para manter a similaridade com estruturas naturais/conhecidas tanto quanto possível. A estrutura natural tem uma ribose 3' OH, que pode ser modificada (por exemplo, metilação). Com base nessa consideração, escolhemos adicionar um carbono na posição 3' para novidade de patente, seguido por um NH para imitar a ligação de hidrogênio de OH e, em seguida, um grupo acetil para reduzir a basicidade de NH e aumentar sua capacidade de ligação de hidrogênio. A atividade de LzCap é melhor que metilatoboné natural ed, possivelmente devido ao aumento da ligação de hidrogênio. Comparado aos grupos metil e metoxi, o grupo acetil amino também pode aumentar as interações de van der Waals entre o substrato (cap) e o fator iniciador (enzima).

2. O grupo acetil amino é estável?

O grupo acetil amino já é suficientemente estável. Ele é muito mais estável do que a posição 7-metilada e a ligação fosfodiéster, que são as partes menos estáveis ​​do cap.

Entre em contato conosco para obter mais detalhes sobre o licenciamento do LZCap.