Descrição
LZCap GG (3'Acm) é um análogo cap1. O produto é usado para transcrição com a sequência inicial de 5'GG3', e a estrutura natural cap1 é produzida pelo encapsulamento da transcrição Cap1.
Patente aprovada nos EUA.
Componentes
| Cat No. | Nome | Tamanho |
| 10686 | LZCap GG (3'Acm) (50 mM) | 100 μL |
| 1 mL |
Detalhes do produto
| Fórmula Molecular | C35E48Não16O25P4 (Ácido livre) |
| Peso molecular | 1216.19 (Ácido livre) |
| Concentração | 50± 3 mM |
| Pureza | CLAE ≥95% |
LZCap Modelo de DNA Design
LZCap GG(3'Acm) é adequado para Iniciado por GG sequências. Como mostrado no figura abaixo, o SP6 promotor (sublinhado) seguido pela sequência GG pode efefetivamente iniciar transcrição.
Protocolo
1． Componentes de descongelamento necessário para o experimentoEnt em gelo.
2． Adicionar Água livre de RNase e NTPs para tubo de reação.
3． Aquecer LZCap Alíquota de GG(3'Acm) para 15 min em 60°C. Resfriar em temperatura ambiente para 5 mínimo
4． Adicionar imediatamente LZCap GG(3'Acm) para tubo e vórtice para misture. Gire brevemente para coletar líquido.
5． Adicionar Transcrição 10x Tampão e vórtice.
6． Adicionar Modelo de DNA ae SP6 Enzima Mistura.
7． Misture o preparado solução de reação, spin brevemente, e incubar em 37°C para 2-3 horas. Se a transcrição comprimento é menor que 100 pontos, aumentar o tempo de reação de 4 a 8 e.
| Componente | Volume (μL) | Concentração final |
| RNase Água grátis | Até 20μL | / |
| ATP (100 mM) | 1 | 5mM |
| UTP(100 mM) | 1 | 5mM |
| CTP(100 mM) | 1 | 5mM |
| GTP(100 mM) | 0,2 | 1 milímetro |
| LZCap GG(3'Acm) (50 mM) | 1.6 | 4 milímetros |
| 10×Transcrição Tampão | 2 | 1 × |
| Linear ADN | 1μg | 50 ng/μL |
| SP6 Enzima Mistura | 2 | / |
| Volume final | 20μL | |
Notas:
1) O SP6 enzima misture nós recomendado para usado é MEGAscript® Kit (AM1330).
2) LZCap GG(3'Acm) é adequado para o vetor de transcrição do promotor SP6 com 5 sequências iniciadas por 'GG 3', qual precisa de ser considerado ao construir o vetor.
3) O reagentes, consumíveis e recipientes usado em o experimentar são livre oe RNase contaminação.
4) Isto é recomendado para usar um linearizado Temperatura do DNAatrasado para transcrição.
5) Quando modificado nucleotídeos eram usado em lugar de tipo selvagem nucleotídeos, o final concentradoção de o a reação foi inalterado.
6) Modificado N1-Me-pUTP pode ser usado em lugar de tipo selvagem UTP. O modificado N1-Me-pUTP reduz o imunogenicidade de ARNm. Henovcom pode também fornecer modificado nucleotídeo N1-Me-pUTP (Gato. Não.: (HN1002).
7) Se o PCR próduto é usado como a transcrição iniciação ADN modelo, o quantia de ADN modelo pode ser reduzido por metade.
Armazenar
Este produto pode ser armazenado a -25~-15 ℃ por dois anos.
Precauções
- Para sua segurança e saúde, use equipamentos de proteção individual (EPI), como jalecos e luvas descartáveis, ao operar este produto.
- Somente para uso em pesquisa.
Perguntas e respostas
1. Como você projeta o LZCap?
As enzimas têm um reconhecimento relativamente "específico" de substratos. Portanto, ao projetar uma nova estrutura de cap, por um lado, precisamos de novas modificações estruturais para fins de patente, mas, por outro lado, nos esforçamos para manter a similaridade com estruturas naturais/conhecidas tanto quanto possível. A estrutura natural tem uma ribose 3' OH, que pode ser modificada (por exemplo, metilação). Com base nessa consideração, escolhemos adicionar um carbono na posição 3' para novidade de patente, seguido por um NH para imitar a ligação de hidrogênio de OH e, em seguida, um grupo acetil para reduzir a basicidade de NH e aumentar sua capacidade de ligação de hidrogênio. A atividade de LzCap é melhor que metilatoboné natural ed, possivelmente devido ao aumento da ligação de hidrogênio. Comparado aos grupos metil e metoxi, o grupo acetil amino também pode aumentar as interações de van der Waals entre o substrato (cap) e o fator iniciador (enzima).
2.O grupo acetil amino é estável?
O grupo acetil amino já é suficientemente estável. Ele é muito mais estável do que a posição 7-metilada e a ligação fosfodiéster, que são as partes menos estáveis do cap.
Entre em contato conosco para obter mais detalhes sobre o licenciamento do LZCap.
Pagamento e segurança
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Investigação
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Perguntas frequentes
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