Descrição
Hifair™ O kit de síntese de cDNA AdvanceFast 1st Strand (sem corante) é um kit de transcrição reversa rápida desenvolvido com base no Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (sem corante), adequado para amplificação por PCR e experimentos de RT-qPCR. Comparado com o Hifair™ Kit de síntese de cDNA de 1ª fita III (sem corante), apresenta taxas de detecção estáveis, especificidade e garantia de rendimento, com o tempo total de transcrição reversa potencialmente reduzido para menos de 6 minutos, encurtando significativamente a duração experimental.
O kit inclui gDNA Digester Mix, que pode eliminar a contaminação do DNA genômico restante no molde de RNA, garantindo resultados subsequentes mais confiáveis. O kit fornece dois tipos de primers de síntese de cDNA: Random Primers N6 e Oligo (dT)18. Os usuários podem escolher entre Random Primers N6, Oligo (dT)18, ou Gene Specific Primers como primers de transcrição reversa de acordo com suas necessidades. O produto de cDNA de fita simples sintetizado pode ser usado diretamente para reações de PCR ou qPCR subsequentes.
Especificações
| Cat.No. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Tamanho | 10 toneladas/100 toneladas |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | Mistura para Digestor 5×gDNA | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Primers aleatórios (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primers (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | Água sem RNase | 200 μL | 2×1 mL |
Armazenar
Este produto deve ser armazenado a -25~-15℃ por 1 ano.
Instruções
- Se o experimento exigir a remoção de DNA genômico residual
1）Digestão de gDNA
Em um tubo de centrífuga livre de RNase, prepare a seguinte mistura e pipete suavemente para misturar bem. Incube a 42℃ por 2 minutos.
| Componentes | Volume (μL) |
| Água sem RNase | Para 10 μL |
| Mistura para Digestor de 5× gDNA | 2 μL |
| RNA total* | 10 pg-5 μg |
| ou mRNA* | 10 pg-500 ng |
* É recomendado que a quantidade de entrada de RNA Total não exceda 2 μg. Se o nível de expressão do gene alvo for baixo, a quantidade de entrada pode ser aumentada para um máximo de 5 μg de RNA Total.
2）Preparação do sistema de reação de transcrição reversa (sistema de 20 μL)
| Componentes | Volume (μL) |
| a solução de reação da etapa anterior | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primários (50 μmol/L)** | 2 μL |
| ou Primers Aleatórios (* para qPCR) (50 μmol/L)** | ou 2 μL |
| Água sem RNase | Para 20 μL |
* A quantidade de primers pode ser ajustada de acordo com a quantidade de entrada de template. Se o produto de transcrição reversa for usado para experimentos de qPCR, Random Primers podem ser adicionados no sistema de acordo com a quantidade recomendada.
** Recomenda-se primeiro adicionar 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante), misturar bem e, em seguida, adicionar o primer de transcrição reversa para garantir que o primer não seja afetado pelo gDNA Digester.
3）Configurações do procedimento de transcrição reversa
| Temperatura. | Tempo |
| 55℃* | 5 minutos** |
| 85℃ | 5 segundos |
* Para modelos com alto conteúdo de GC ou modelos complexos, a temperatura de transcrição reversa pode ser aumentada para 60℃.
** Este produto pode sintetizar sequências de cDNA abaixo de 14 kb. Se você precisar de produtos de cDNA mais longos, você pode estender apropriadamente o tempo de transcrição reversa.
- Se o experimento não exigir a remoção do DNA genômico
1）Preparação do sistema de reação de transcrição reversa (sistema de 20 μL)
| Componentes | Volume (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primários (50 μmol/L)** | 2 μL |
| ou Primers Aleatórios (* para qPCR) (50 μmol/L)** | ou 2 μL |
| RNA total* | 10 pg -5 μg |
| ou mRNA | 10 pg - 500 ng |
| Água sem RNase | Para 20 μL |
* É recomendado que a quantidade de entrada de RNA Total não exceda 2 μg. Se o nível de expressão do gene alvo for baixo, a quantidade de entrada pode ser aumentada para um máximo de 5 μg de RNA Total.
** A quantidade de primers pode ser ajustada de acordo com a quantidade de entrada de template. Se o produto de transcrição reversa for usado para experimentos de qPCR, Random Primers podem ser adicionados no sistema de acordo com a quantidade recomendada.
2）Configurações do procedimento de transcrição reversa
| Temperatura. | Tempo |
| 55℃* | 5 minutos** |
| 85℃ | 5 segundos |
* Para modelos com alto conteúdo de GC ou modelos complexos, a temperatura de transcrição reversa pode ser aumentada para 60℃.
** Este produto pode sintetizar sequências de cDNA abaixo de 14 kb. Se você precisar de produtos de cDNA mais longos, você pode estender apropriadamente o tempo de transcrição reversa.
Notas
- Todas as operações devem ser realizadas no gelo e de maneira a evitar contaminação por RNase.
- Este produto é somente para uso em pesquisa.
- Por favor, opere com jalecos e luvas descartáveis, para sua segurança.
Documentos:
Pagamento e segurança
Suas informações de pagamento são processadas com segurança. Não armazenamos detalhes do cartão de crédito nem temos acesso às informações do seu cartão de crédito.
Investigação
Você também pode gostar
Perguntas frequentes
O produto é apenas para fins de pesquisa e não se destina ao uso terapêutico ou diagnóstico em humanos ou animais. Os produtos e o conteúdo são protegidos por patentes, marcas registradas e direitos autorais de propriedade da
Certos aplicativos podem exigir direitos adicionais de propriedade intelectual de terceiros.