A luciferase Firefly é uma proteína com um peso molecular de cerca de 61 kDa, que pode catalisar a oxidação da luciferina para oxiluciferina na presença de ATP, íons de magnésio e oxigênio. Ela emite bioluminescência com um comprimento de onda de cerca de 560 nm. A luciferase Renilla é uma proteína com um peso molecular de cerca de 36 kDa, que pode catalisar a oxidação da coelenterazina para coelenteramida na presença de oxigênio, e emite um comprimento de onda de 480 nm durante o processo de oxidação. sobre bioluminescência. Ambas as bioluminescências podem ser medidas por quimioluminescência. O princípio de detecção é mostrado na figura 1:

Figura 1: Esquema do ensaio de luciferase Firefly e Renilla

Normalmente, o 5'UTR ou promotor do gene alvo é clonado a montante da Firefly Luciferase, ou o 3'UTR é clonado a jusante da Firefly Luciferase, e o efeito de regulação transcricional do promotor ou elemento regulador é detectado pela detecção da quantidade de firefly luciferase. Renilla Luciferase foi usada como um controle interno para eliminar diferenças no número de células, eficiência de transfecção, etc. O Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit usa luciferina como substrato para detectar a atividade do gene repórter da luciferase do firefly e, em seguida, usa coelenterazina como substrato para detectar a luciferina Renilla enquanto extingue a reação de fluorescência. Atividade do gene repórter enzimático. O kit tem as características de alta sensibilidade.

Características

Capacidade de lise aprimorada: capaz de lisar completamente a grande maioria dos tipos de células.

Sinal mais forte: detecção precisa da expressão do promotor fraco.

Maior sensibilidade: detectável até 10-20 picomoles de moléculas de luciferase.

Faixa linear mais ampla: a faixa de detecção linear excede 8 ordens de magnitude da concentração da enzima.

Aplicações

Verificação das interações de miRNA com 3'UTRs do gene alvo

Verificação das interações lncRNA-miRNA

Verificação da regulação do fator de transcrição na região promotora

Análise da via de sinalização

Análise de atividade SNP

Especificações

Componentes

Envio e armazenamento

Os produtos do kit de ensaio de gene repórter de luciferase dupla devem ser armazenados a -15℃ ~ -25℃ para 1 ano.

Figuras

Figura 1. YEASEN (Gato#: 11402) tem uma intensidade de fluorescência comparável à da Marca P.

Figura2. EFACILITAR (Gato#: 11402) reagentes de detecção interagem com a luciferase para atingir intensidade de luminescência ótima. Após a adição do substrato de luciferase Renilla, a bioluminescência da luciferase de vaga-lume é extinta: ela pode ser essencialmente extinta completamente.

Documentos:

Ficha de dados de segurança

11402 MSDS HB220209 PT.PDF

Manuais

11402 Manual HB241230 PT.pdf

Citações e referências:

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