Hieff ™ versátil T4 DNA ligase (600 U/µl)- Termotolente e alta fidelidade 12996es

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Hieff ™ versátil T4 DNA ligase (600 U/µl)- Termotolente e alta fidelidade 12996es

Sku: 12996ES60

Tamanho: 60 Ku

Variante

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Hieff™ Versatilidade A T4 DNA Ligase é uma variante da T4 DNA Ligase. Esta enzima é adequada para catalisar a reação de ligação entre moléculas coesivas ou de extremidade romba. É um produto de enzima única projetado para conectar fragmentos de DNA e adaptadores durante o processo de preparação da biblioteca no sequenciamento de próxima geração (NGS). O Hieff® A versatilidade da T4 DNA Ligase foi amplamente validada por meio de sequenciamento de alto rendimento e exibe qualidade excepcional.

Recurso

Alta fidelidade
Termotolerante

Saiba mais sobre o desenvolvimento da versátil ligase T4 DNA

Especificações

Fonte	E. coli recombinante
Buffer de armazenamento	50 mM Tris-HC1,100 mM KC1,0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% Glicerol, pH 7,5士0,2 a 25℃
Definição de unidade	Em um sistema de reação de ligação de 20 μL, a quantidade de enzima necessária para catalisar a ligação de mais de 50% dos fragmentos de DNA, quando 6 μg de λDNA-Hind III reagem a 16°C por 30 minutos, é definida como 1 unidade de atividade (U).

Componentes

Nome

12996ES60

60 KU

12996ES62

600 KU

12996-A

Hieff® Ligase de DNA T4 versátil (600 U/µL)

100 μL

1000 μL

12996-B

Tampão de DNA ligase 10×T4

500 μL

3×1500 μL

Armazenar

Este produto deve ser armazenado a -25~-15℃ por 2 anos.

Figura

Figura 1. Ilustra a evolução da Versatility T4 DNA Ligase. (A) Projeto racional de T4 DNA ligase. (B) Triagem de mutantes de T4 DNA ligase termotolerantes a 45℃, levando à identificação de mutantes com atividade específica significativamente aumentada. (C) Triagem de mutantes de T4 DNA ligase visando reduzir a formação de dímero adaptador durante a preparação da biblioteca de DNA. (D) A avaliação da retenção de rendimentos da biblioteca após tratamento térmico a 42℃ por 1 hora usando o método de preparação da biblioteca de DNA.

Tabela 1. A ligase de DNA T4 versátil de Yeasen é termoestável. A enzima foi tratada a 30℃ por 5 dias e analisada pelo método DNA Lib Prep.

Figura 2. A ligase de DNA T4 versátil de Yeasen tem maior fidelidade indicada pela menor formação de dímero adaptador devido à autoligação incorreta (A) e analisada pelo método DNA Lib Prep (B).

Figura 3. A ligase de DNA T4 versátil da Yeasen tem maior fidelidade indicada pela menor formação de dímero adaptador em comparação com outras ligases T4 de marca analisadas pelo método DNA Lib Prep.

Figura 4. A Versatile T4 DNA Ligase reduz as taxas de falsos positivos para amostras FFPE. Usando o kit DNA Lib Prep, que inclui a Versatile T4 DNA Ligase, preparamos bibliotecas para três tipos de amostras padrão (FFPE, gDNA, ctDNA) e conduzimos uma comparação direta com o produto do fornecedor W.Os dados indicam que, tanto para gDNA quanto para ctDNA, as taxas de Soft Clip e de falsos quimeros de 12996 são comparáveis às do concorrente W. No entanto, 12996 mostra uma vantagem marcante em amostras FFPE.

Deixe uma mensagem para perguntar sobre os dados de comparação de desempenho entre esta enzima e outras ligases de DNA T4 termoestáveis e convencionais de primeira linha.

Notas

1. Por favor, opere com jalecos e luvas descartáveis，para sua segurança.

2. Se uma pequena quantidade de precipitação ocorrer no buffer, é um fenômeno normal. Por favor, inverta e misture bem o buffer antes de usá-lo.

3. Este produto é somente para uso em pesquisa.

Protocolo

1. Os kits de preparação de biblioteca de DNA convencionais atuais que usam o método baseado em ligação normalmente não requerem etapas de purificação após o reparo final e o A-tailing. Os fragmentos de DNA são submetidos diretamente à ligação do adaptador sem purificação. Este kit é compatível com o método convencional sistemas de reparo de extremidade e de ligação em A disponíveis comercialmente para ligação de adaptadores sem emendas.

Prepare a seguinte reação em um tubo de microcentrífuga no gelo, misture delicadamente por pipetagem ou agitação, centrifugue brevemente e inative pelo calor a 20 °C por 15 minutos.

Tabela 1. Sistema de reação para ligação do adaptador

Componente	Volume（μL）	Concentração final
DNA com cauda dA	60	1×
Tampão de DNA ligase 10×T4	10	0,1 μM-0.5 μM
50% PEG6000	12*	1 ng -400 ng
Adaptador de DNA	5**
Hieff® Ligase de DNA T4 versátil (600 U/µL)	3~5***
Água sem nuclease	acima para 100	-

【Observação】*A solução PEG6000 50% não é fornecida no kit, você precisará prepará-la você mesmo

**Consulte a Tabela 2 para o quantidade de adaptador.

***A quantidade de T4 DNA Ligase pode ser adicionada conforme necessário em 3-5 μL.

2. A concentração do adaptador afeta diretamente a eficiência da ligação e o rendimento da biblioteca. O uso excessivo de adaptadores pode resultar em mais dímeros adaptadores, enquanto o baixo uso pode afetar a eficiência da conexão e a produção da biblioteca. Tabela 2 lista a quantidade de adaptador recomendada para diferentes quantidades de DNA de entrada.

Tabela 2. Quantidade de adaptador recomendada para 100 pg-1 μg de DNA de entrada

DNA de entrada	Concentração
0,1 ng	0,1 μM
1 ng	0,5 μM
10 ng	1 μM
25 ng	2 μM
100 ng~1000 ng	10 μM

【Observação】：A quantidade de adaptador pode ser ajustado de acordo com os requisitos da tabela acima.

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Perguntas frequentes

Legal e isenções de responsabilidade

O produto é apenas para fins de pesquisa e não se destina ao uso terapêutico ou diagnóstico em humanos ou animais. Os produtos e o conteúdo são protegidos por patentes, marcas registradas e direitos autorais de propriedade da Yeasen Biotechnology. Os símbolos de marca registrada indicam o país de origem, não necessariamente o registro em todas as regiões.

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Yeasen se dedica à ciência ética, acreditando que nossa pesquisa deve abordar questões críticas, garantindo ao mesmo tempo padrões éticos e de segurança.