Descrição
O reagente de excisão específico de uracila (chamado de USER) é um coquetel enzimático que consiste em glicosilase de DNA de uracila (UDG) e endonuclease VIII (Endo VIII). Ele é capaz de gerar lacunas de nucleotídeo único especificamente em locais de uracila. A UDG facilita a clivagem da base de uracila, resultando na formação de um sítio AP (sítio apurínico/apirimidínico) enquanto mantém a integridade da estrutura principal de açúcar-fosfato fosfodiéster. A atividade endonuclease de Endo VIII cliva a ligação fosfodiésterds em ambos os 3′ e 5′ extremidades do sítio apurínico, liberando assim o açúcar desoxirribose que não possui uma base.
Características
Sem nucleases ou RNases residuais
Alta eficiência de excisão
Aplicações
Construção de biblioteca específica para fita de RNA
Clonagem mediada por excisão específica de uracila (USER-LIC)
Montagem de DNA, como a montagem de monômeros TALE
Construção serial de múltiplas bibliotecas de cDNA a partir de células individuais
Especificações
| Concentração | 1 U/µL |
| Unidade Edefinição | Um A unidade é definida como a quantidade de enzima necessária para cortar um oligonucleotídeo de fita dupla de 34-mer contendo uma única base de uracila em um 10 μeu sistema de reação a 37°C por 15 minutos, o que corresponde à clivagem de 10 pmol do substrato. |
| EUnativação Ccondições | 75°C, 10 mínimo |
Componentes
| Componente nº. | Nome | 14537ES50 | 14537ES72 |
| 14537-A | Reagente de excisão específico para uracila (1 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14537-B | 10×Reagente de excisão específico para uracila Tampão de reação | 1.25 mL | 1.25 mL |
Envio e armazenamento
Os produtos devem ser armazenados em -25℃ ~ -15℃ para 1 ano.
Figuras
Figura 1. Comparação dos efeitos de excisão
Nota: 10 pmol de DNA fita dupla contendo dUTP foram excisados usando a enzima USER de Yeasen e um produto comparável do Fornecedor A. Os resultados da eletroforese em gel de agarose mostraram que os efeitos de excisão da enzima USER de Yeasen foram consistentes com os do Fornecedor A
Figura2. Comparação de contagens de colônias para clonagem USER-LIC
Nota: Um fragmento de DNA de 600 pb foi ligado usando a enzima USER de Yeasen e um produto comparável do Fornecedor A para construir um vetor, que foi então transformado em E. coli e cultivadas. O número de colônias na placa de cultura foi observado, e os resultados indicaram que a eficiência de clonagem USER-LIC usando a enzima USER de Yeasen foi superior à do Fornecedor A.
Documentos:
Ficha de dados de segurança
14537_FISPQ_Ver.EN20241210.pdf
Manuais
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Investigação
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Perguntas frequentes
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