A RNase HII é uma enzima interna da ribonuclease obtida da Pyrococcus abyssi e expressa recombinantemente em E. Coli. Ela reconhece a fita dupla DNA-rN-DNA/DNA, cortando no local onde os ribonucleotídeos são incorporados ao DNA. No entanto, sua atividade em RNA fita simples é muito baixa e não mostra atividade de corte em dsDNA ou ssDNA. A RNase HII corta no local de um único resíduo de ribonucleotídeo da extremidade 5', produzindo um grupo fosfato 5' e uma extremidade hidroxila 3' após o corte. Esta enzima RNase HII tem atividade ótima a 70~75°C, é ativa entre 50°C e 75°C, mas tem atividade muito baixa à temperatura ambiente. O produto é altamente termoestável, com quase nenhuma perda de atividade após incubação a 95°C por 45 minutos e é compatível com vários sistemas de reação de PCR.

Especificações

Componentes

Armazenar

Este produto deve ser armazenado a -25~-15℃ por 2 anos.

Aplicação do produto

1. Detecção por LAMP com sondas de alta sensibilidade.
2. PCR dependente de RNase HII (rhPCR).
3. Remoção de ribonucleotídeos incompatíveis formados durante a reação em cadeia da polimerase.
4. Degradação da porção de RNA dos fragmentos de Okazaki.

Notas

1. Este produto é somente para uso em pesquisa.
2. Para sua segurança, opere com jalecos e luvas descartáveis.

Figuras

1. E. coli resíduo de DNA genômico < 0,5 cópias/100 U

Detecção de E. coli resíduos de DNA genômico em diferentes lotes de RNase HII mostraram que o resíduo de DNA genômico hospedeiro da RNase HII de YEASEN está muito abaixo de 0,5 cópias/100 U.

Fig 4. Detecção de E. coli resíduo de DNA genômico

2. Teste de resistência ao calor de 95 °C

Após aquecer a RNase HII a 95°C por 0 a 45 minutos, a atividade enzimática da RNase HII foi testada. Os resultados indicaram que quase não houve perda de atividade enzimática na RNase HII da YEASEN mesmo após 45 minutos de aquecimento.

Fig 5. Teste de resistência ao calor de 95°C

3. Sem exonuclease, enzima de corte ou resíduo de RNase (dose de 1 U)

Incubando 1 U de diferentes lotes de RNase HII com seus respectivos substratos DNA/RNA a 37°C por 4 horas, os resultados da eletroforese em gel de agarose indicaram que não havia exonuclease, enzima de corte ou resíduo de RNase na RNase HII.

Fig 6. Detecção de exonuclease, enzima de corte e resíduo de RNase

Documentos:

Manuais