Descrição
A DNA polimerase Tth é uma DNA polimerase resistente ao calor descoberta na bactéria termofílica Termo termofílico HB8. Na presença de Mg²⁺, esta enzima exibe atividade de DNA polimerase 5′-3′ e atividade de exonuclease 5′-3′, mas não possui atividade de exonuclease 3′-5′, tornando-a amplamente aplicável para reações de amplificação de PCR. Na presença de Mn²⁺, a enzima demonstra forte atividade de transcriptase reversa em temperaturas de 55-70°C, tornando-a adequada para reações de RT-PCR de uma etapa.
Especificação
Definição da unidade: Uma unidade (U) de atividade é definida como a quantidade de enzima que incorpora 10 nmol de nucleotídeos totais em um produto insolúvel em ácido em 30 minutos a 74 °C, usando DNA de esperma de salmão ativado como molde/primer.
Componente
| Não. | Nome | Tamanho | |
| 14607ES72 (250 U) | 14607ES80 (1250 Você) | ||
| 14607-A | Tth DNA Polimerase (5 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14607-B | 5×T-RT-PCR Tampão | 1 mL | 4×1,25 mL |
| 14607-C | 10×T-ésimo PCR Tampão (com Mg2+) | 500 μL | 2×1,25 mL |
| 14607-D | 50 mM Mg(OAc)2 | 250 μL | 1,25 mL |
| 14607-E | Mistura dNTP (10 mM cada) | 150 μL | 750 μL |
Envio e Armazenamento
Enviocom gelo seco. Armazenar no -20°C, com prazo de validade de 2 anos.
Precauções
1) Se uma pequena quantidade de precipitado aparecer no buffer ao descongelar, este é um fenômeno normal. Por favor, inverta e misture bem antes de usar.
2) Para sua segurança e saúde, use jaleco e luvas descartáveis durante a operação.
3) Este produto é somente para uso em pesquisa!
Instruções
Procedimento de reação de PCR recomendado:
1.Preparação do Sistema de Reação
| Nome | Volume (μL) |
| 10×T-ésimo PCR Tampão (com Mg2+) | 5 |
| Tth DNA Polimerase (5 U/μL) | 0,5 |
| Mistura dNTP (10 mM cada) | 1 |
| Rio acima Cartilha 10μM | 2 |
| A jusante Cartilha 10μM | 2 |
| Modelo de DNA | 50 pg- 1μg |
| ddH2O | para 50 |
[Nota]: As quantidades de Tth DNA Polimerase, primers upstream e downstream e mistura dNTP podem ser ajustadas de acordo com necessidades experimentais específicas.
2. Configuração do ciclo
| Passos | Temperatura(ºC) | Tempo | Ciclos |
| Pré-desnaturação | 94 | 30 seg-5 min | 1 |
| Desnaturação | 94 | 30 segundos |
35
|
| Recozimento | 50-70 | 30 segundos | |
| Extensão | 72 | 60 seg/kb | |
| Extensão final | 72 | 10 minutos | 1 |
[Nota]: As condições de reação podem ser ajustadas de acordo com requisitos experimentais específicos.
Procedimento de reação RT-PCR recomendado:
1. Preparação do Sistema de Reação
| Nome | Volume (μL) |
| 5×T-RT-PCR Tampão | 10 |
| Tth DNA Polimerase (5 U/μL) | 1.5 |
| 50 mM Mg(OAc)2 | 2,5 |
| Mistura dNTP (10 mM cada) | 1.5 |
| Rio acima Cartilha 10μM | 2 |
| A jusante Cartilha 10μM | 2 |
| Modelo ARN | 50 pg- 1μg |
| ddH2O | para 50 |
[Nota]: As quantidades de Tth DNA Polimerase, primers upstream e downstream e mistura dNTP podem ser ajustadas de acordo com necessidades experimentais específicas.
2.Configuração do ciclo
| Passos | Temperatura (ºC) | Tempo | Ciclos |
| Transcrição reversa | 55-70 | 30 minutos | 1 |
| Pré-desnaturação | 94 | 30 seg-5 min | 1 |
| Desnaturação | 94 | 30 segundos |
35
|
| Recozimento | 50-70 | 30 segundos | |
| Extensão | 72 | 60 seg/kb | |
| Extensão final | 72 | 10 minutos | 1 |
[Nota]: As condições de reação podem ser ajustadas de acordo com requisitos experimentais específicos.
Pagamento e segurança
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Investigação
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Perguntas frequentes
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