Descrição
ArCas12a, derivado do sistema CRISPR de Bactérias retal bactérias e também conhecida como Cpf1, é uma proteína monomérica que consiste em 1263 aminoácidos. Como um membro de classe II (tipo V) do sistema CRISPR/Cas, ArCas12a funciona somente por meio de uma única proteína efetora e exibe diferenças significativas de Cas9, como direcionar motivos ricos em T, não requerendo crRNA transativador, produzindo extremidades pegajosas em quebras de fita dupla de DNA, participando do processamento de RNA e possuindo atividade de nuclease de DNA.
ArCas12a não possui o domínio HNH e pode utilizar independentemente seu domínio RuvC para reconhecer a região PAM rica em timina (T) na extremidade 5' do ácido nucleico alvo sob a orientação do RNA CRISPR (crRNA), iniciando a clivagem do DNA alvo. Ele tem sido usado com sucesso para edição de genoma em muitos mamíferos e plantas. Além disso, ArCas12a exibe atividade de trans-clivagem, capaz de cortar indiscriminadamente DNA fita simples não alvo (ssDNA) no sistema de reação.
Comparado com outros LbCas12a/AsCas12a, ArCas12a demonstra maior adaptabilidade à temperatura (25-55oC), tornando-o adequado para aplicações de edição de genoma e detecção de ácido nucleico.
Características
Ampla faixa de temperatura de reação: Exibe atividade de clivagem dentro da faixa de temperatura de 25-55oC
Baixo resíduo de nuclease: Nenhuma exonuclease, nickase ou RNase residual
Atividade de clivagem cis: Clivagem altamente eficaz de DNA de fita dupla in vitro
Atividade de trans-clivagem: Alta atividade de trans-clivagem, adequada para detecção de ácido nucleico
Aplicações
Edição de genes CRISPR/Cas
Diagnóstico e detecção com base no sistema CRISPR/Cas
Outras aplicações de detecção combinadas com tecnologias de amplificação isotérmica de ácidos nucleicos (RPA e LAMP), etc.
Especificações
| Fonte | O gene Cpf1 de Bactérias retalis é expressa por meio da expressão recombinante em E. coli |
| Peso molecular | 149 KDa |
| Sequência PAM | TTTN ou TTTV |
| Condições de reação | 50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, pH 7.9 @25oC |
| Concentração | 10 µM |
| Pureza | >95% (PÁGINA SDS) |
| Condições de inativação | 85oC, 5-10 minutos |
Componentes
| Componentes Não. | Nome | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | Nuclease ArCas12a (10 μM) | 100 μL | |
| 14702-B | 10×Tampão de reação ArCas12a | 1 mL | 1 mL |
Envio e armazenamento
Este produto deve ser armazenado a -25 ~ -15oC por 2 anos.
Figuras
Figura 1. Teste de atividade de clivagem cis de ArCas12a: M: Marcador; C: Molde de DNA fita dupla (dsDNA)
Observação: Sob a orientação do crRNA, ele pode clivar eficientemente o dsDNA (600 pb) para produzir dois fragmentos (200 pb + 400 pb).
Figura 2. Resultados do teste de atividade de transclivagem de ArCas12a
Observação: Usando dsDNA como alvo, ArCas12a, crRNA e uma sonda repórter ssDNA (contendo um grupo repórter fluorescente) foram adicionados para clivagem in vitro. Uma vez que ArCas12a forma um complexo com crRNA e o DNA alvo, ele ativa a atividade de clivagem trans, cortando a sonda repórter ssDNA, emitindo assim fluorescência.
Documentos:
Ficha de dados de segurança
14702_FISPQ_Ver.EN20241205.pdf
Manuais
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Investigação
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Perguntas frequentes
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