Descrição
Hifair™ O Superior Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) é um kit multiplex quantitativo de PCR baseado em RNA como molde. No processo do experimento, a transcrição reversa e a PCR quantitativa foram realizadas no mesmo tubo, o que simplificou a operação experimental e reduziu o risco de contaminação.
Neste kit, a primeira fita de cDNA foi sintetizada eficientemente pelo Hifair™ resistente ao calor Transcriptase reversa e amplificada quantitativamente por UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase. O kit contém principalmente tampão MP otimizado, mistura de enzimas. A solução tampão já contém Mg2+ e dNTP Mix. Além disso, os fatores que podem efetivamente inibir a amplificação de PCR não específica e melhorar a eficiência de amplificação de múltiplas reações de qPCR são adicionados, o que pode garantir a eficiência de amplificação e realizar até múltiplas reações de amplificação. O sistema dUTP/UDG foi adicionado para efetivamente prevenir o risco de contaminação por aerossol.
Recurso
Características
1. Ggrande versatilidade: É adequado para amplificação de qPCR e detecção de ácidos nucleicos de microrganismos patogênicos, genomas humanos, plantas e outras espécies.
2. Alta sensibilidade: O sistema de buffer cuidadosamente otimizado melhora a sensibilidade de detecção de modelos de baixa concentração de até 250 cópias/mL.
3. Sistema dUP/UDG: O sistema antipoluição dUTP/UDG termolábil é introduzido para degradar a poluição por aerossol de produtos de forma eficiente, reduzir falsos positivos e garantir resultados autênticos.
4. Apoiaring programa rápido: compatível com programa rápido de 40min.
5. Super estabilidade: estávele a 37℃ por 14 dias, congelamento e descongelamento repetidos 10 vezes.
Especificações
| Componentes No. | 16901ES60 / 16901ES80 / 16901ES92 |
| Tamanho | 100 E / 1000 E / 10000 toneladas |
Componentes
| Nome | 16901ES60 (100T) | 16901ES80 (1.000T) | 16901ES92 (10.000T) | |
| 16901-UM | 500 μL | 5 mL | 50 mL | |
| 16901-B | Hifair™ Mistura de enzimas | 100 μL | 1 mL | 10 mL |
Observação: 1) 5×Hifair™ MP Buffer é a abreviação de Hifair™ Buffer de sonda RT-qPCR de uma etapa multiplex superior, que inclui dNTPs, dUTP, Mg2+, estabilizadores e muito mais.
2) Hifair™ Mistura de enzimas contém principalmente Hifair™ transcriptase reversa, UNICON™ Polímeros de DNA HotStart Taq, Inibidor de RNase, e UDGase e assim por diante.
Armazenar
O produto deve ser armazenado a -25℃ ~ -15℃ por 1 ano. Deve evitar congelamento e descongelamento repetidos.
Instruções
| Volume (μL) | Concentração Final | |
| 5×Hifair™ Tampão MP | 5 | 1× |
| Hifair™ Mistura de enzimas | 1 | - |
| Mistura de primer (10 μM) | 0,4 cada | 0,16 μM |
| Mistura de sonda (10 μM) | 0,2 cada | 0.08 μM |
| 1-5 | - | |
| RNase livre H2O | para 25 | - |
1. Composição da reação:
Observação：Misture bem antes de usar, evite bolhas excessivas causadas por vibração violenta.
um) Concentração do primer: Cartilha mistura incluindo primer multiplex, dependendo da situação, a concentração ideal do primer pode estar entre 0,1 e 1,0 μM.
b) Concentração da sonda: mistura de sondas incluindo diferença de marcação de sonda multiplex grupo fluorescente, dependendo da situação a concentração ideal da sonda pode estar entre 0,05 e 0.5 μM.
c) Diluição do template: qPCR é altamente sensível e é recomendado diluir o template. O valor de Ct de controle é adequado entre 20 e 35.
e) Preparação do sistema: cabeça un com elemento filtrante. Evite contaminação cruzada e contaminação por aerossol.
2. Protocolo de Ciclismo Otimizado
(1) Procedimento de amplificação padrão
| Estágio de reação | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
| 1 | Transcrição reversa | 50°Cum | 1 | |
| 2 | Desnaturação inicial | 95°C | 5 mínimo | 1 |
| 3 | Reação de amplificação | 95°C | 15 segundo | 45 ciclos |
| 60°Cb | 30 segundoc |
Observação：
a) Transcrição reversa: A temperatura pode selecionar 50°C ou 55°C por 10-15 minutos.
b) Reação de amplificação: A temperatura é ajustada de acordo com o valor de Tm dos primers projetados.
c) Aquisição do sinal de fluorescência: Defina o procedimento experimental de acordo com os requisitos do instrumento manual.
(2) Programa de amplificação rápida
|
| Estágio de reação | Temperatura | Tempo | Ciclo |
| 1 | Transcrição reversa | 50°C | 5 mínimo | 1 |
| 2 | Desnaturação inicial | 95°C | 30 segundo | 1 |
| 3 | Reação de amplificação | 95°C | 5 segundo | 45 ciclos |
| 60°C | 20 segundo |
Observação：Se o detector qPCR real suportar amplificação rápida, realize um pré-teste para confirmar.
3. Equipamento de aplicação
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Rápido, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 e 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Estratógeno MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Rocha Ciência Aplicada LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Termo Ciclista científico PikoReal; Cefeida SmartCycler®; Iluminar Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.
Notas
Use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança！
Por favor, use consumíveis RNasefree para o experimento.
Este produto é para pesquisar usar somente！
Pagamento e segurança
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Investigação
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Perguntas frequentes
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