O Magnético Residual ADN Amostra Kit de preparação é adequado para o pré-tratamento de residual ADN em vários biológico amostras. Ele pode maximizar a separação e purificação de quantidades vestigiais de DNA residual de células hospedeiras em amostras usando esferas magnéticas exclusivas e um sistema de buffer otimizado.

O Magnético Kit de preparação de amostra de DNA residual pode ser usado com uma variedade de DNA residual de células hospedeiras kits de detecção, incluindo kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras CHO (Cat#41301ES), Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras HEK293 (Cat#41302ES), Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras Vero (Cat#41303ES), e kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras de E. coli (Cat#41304ES).

Componentes do produto

Envio e armazenamento

1. A Parte I é enviada com uma bolsa de gelo, 4°C por 1 ano ou -20°C para armazenamento de longo prazo.

2. A Parte II é enviada em temperatura ambiente e armazenada por 1 ano em temperatura ambiente.

3. A Parte III é enviada em gelo seco e armazenada a -20°C por 1 ano.

4. Após receber a mercadoria, verifique se os três componentes da Parte I, Parte II e Parte III estão completos e armazene-os imediatamente na temperatura de armazenamento correspondente.

Cuidados

1. Leia o manual de instruções cuidadosamente antes de usar e opere em estrita conformidade com o manual de instruções. Recomenda-se que o processamento da amostra seja realizado em uma bancada limpa ou em uma cabine de segurança biológica.

2. Preste atenção para observar se há precipitação ou turbidez na solução armazenada em temperatura ambiente (especialmente quando a temperatura ambiente for baixa, como no inverno). Você pode tomar banho-maria a 37 °C até que a solução fique límpida para não afetar o efeito do uso.

3. Pode haver esferas magnéticas residuais durante a eluição, portanto, tente evitar aspirar esferas magnéticas ao coletar amostras.

4. Troque as pontas com frequência para evitar contaminação cruzada ao operar com este produto.

5. Para sua segurança e saúde, use equipamentos de proteção individual (EPI), como jalecos e luvas descartáveis, ao operar este produto.

6. Este produto é SOMENTE para uso em pesquisa!

Pré-preparação

1. Equipamentos autofornecidos: agitador de vórtice, banho-maria ou banho de metal, centrífuga, suporte de separação magnética, extrator automático de ácido nucleico Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A ou outras marcas de extrator de ácido nucleico totalmente automático.

2. Consumíveis autofornecidos: 10μL-1000μL pontas de filtro de baixa adsorção, tubos de centrífuga de baixa adsorção de 1,5 mL, tubos de PCR ou placas de 96 poços e tampas de tubo ou membranas correspondentes.

3. Reagentes autopreparados: etanol absoluto (grau analítico), tampão 1×PBS (pH 7,4, livre de íons Mg e Ca), água ultrapura.

4. Para a primeira utilização, adicione etanol anidro no volume indicado no rótulo ou nas instruções aos frascos de Solução de Lavagem A* e Solução de Lavagem B*, misture bem antes de usar e marque-os bem. Tampe bem o frasco após o uso para manter o nível de etanol no frasco.

Extração manual de DNA residual

1. Processamento de amostra

1.1 Se a amostra contiver um conteúdo de DNA relativamente alto, como uma vacina, dilua-a em uma proporção apropriada com tampão 1×PBS (pH 7.4, livre de íons Mg e Ca) e então extrair (a diluição da amostra é para fazer com que o valor de detecção esteja dentro da faixa linear da curva padrão e então garantir a precisão da detecção. e geralmente uma diluição de 100 vezes pode ser considerada).

1.2 Se a amostra a ser testada é um pó seco, dilua-o para 10 mg/mL ou 100 mg/mL com água ultrapura antes de usar.

1.3 Se a amostra tiver uma matriz complexa, um experimento padrão de adição e recuperação deve ser realizado para determinar a diluição apropriada.

2. Adicione 100 μL de amostra ao tubo de 1,5 mL, em seguida, adicione 100 μL de tampão de lise, 10 μL de proteinase K, agite no vórtice e misture por 10 segundos.

[Notas]: Adicione 10 μL de proteinase K se a concentração da amostra de proteína for de 0-100 mg/mL e adicione 20 μL de proteinase K se a concentração da amostra de proteína for de 100-200 mg/mL.

3. Incubar a 60°C por 20 minutos.

4. Em seguida, adicione 400 μL da solução de ligação, 9 μL de glicogênio e 6 μL de sal de potássio Poly A, agitar e misturar bem.

5. Adicione 20 μL de esferas magnéticas, agite no vórtice e misture bem, e deixe repousar por 10 minutos. Por favor, agite no vórtice e misture por 10 segundos. a cada 3 minutos.

[Notas]: As esferas magnéticas precisam ser agitadas antes do uso para garantir que as esferas magnéticas sejam completamente ressuspensas. Após adicionar amostras 4-5 vezes de uma vez, é recomendado misturar novamente.

7. Centrifugue brevemente para fazer a solução descer e coloque o tubo de centrífuga no suporte magnético por 1-2 minutos. Após as esferas magnéticas serem completamente absorvidas, remova cuidadosamente o líquido.

8. Adicione 500 μL de Solução de Lavagem A (verifique se etanol absoluto foi adicionado antes de usar), agite ou agite no vórtice para misturar para garantir que as esferas magnéticas estejam dispersas e que não haja esferas magnéticas agregadas na parede do tubo de centrífuga.

9. Centrifugue brevemente e coloque o tubo de centrífuga em um suporte magnético por 1-2 minutos. Após as esferas magnéticas serem completamente absorvidas, remova cuidadosamente o líquido.

10. Adicione 500 μL de Solução de Lavagem B (verifique se foi adicionado etanol absoluto antes do uso), agite ou agite no vórtice para misturar e garantir que as esferas magnéticas sejam dispersas e que nenhuma esfera magnética seja agregada na parede do tubo de centrífuga.

11. Centrifugue brevemente e coloque o tubo de centrífuga em um suporte magnético por 1-2 minutos. Após as esferas magnéticas serem completamente absorvidas, remova cuidadosamente o líquido.

12. Para garantir que o líquido residual seja removido o máximo possível, centrifugue o tubo por 10 segundos. rapidamente, coloque-o em um suporte magnético e use uma pipeta de 10 μL para aspirar o líquido residual.

13. Abra a tampa do tubo e deixe em temperatura ambiente por 3 minutos até que o etanol evapore completamente. Nenhuma reflexão ou rachaduras aparentes na superfície das esferas magnéticas indicam que o etanol evaporou completamente.

14. Remova o tubo do suporte magnético, adicione 50-100 μL de eluato pré-aquecido a 65°C, agite e misture bem. Em seguida, centrifugue brevemente, incube a 65°C por 5 minutos, agite e misture uma vez a cada 2-3 minutos.

15. Centrifugue brevemente novamente, coloque o tubo de centrífuga em um suporte magnético por 2 minutos. Após as esferas magnéticas serem completamente adsorvidas, transfira cuidadosamente a solução de DNA para um novo tubo de centrífuga e armazene-o a -20°C, ou a -80°C para armazenamento de longo prazo.