O kit é equipado com um poderoso tampão de lise, que pode lisar rapidamente amostras (por exemplo, células, cauda de camundongo, orelha de camundongo, dedo de camundongo, músculo, etc.) para liberar DNA genômico, e o lisado pode ser adicionado diretamente ao sistema de reação de PCR sem purificação, o que é conveniente para a operação. Além disso, este kit requer baixa entrada de amostra, 5 mg de tecido de camundongo ou 1-5 mm de cauda de camundongo podem ser usados ​​para experimentos.

Componentes

Armazenar

19697-A (Solução de Lise) deve ser armazenada em 2~8℃ para 1 anos. Se usado várias vezes, congele em embalagens separadas para evitar contaminação cruzada. 19687-B (Solução de parada) deve ser armazenado em -25~-16℃ para 1 anos.

Instruções

Liberação de DNA genômico de camundongo

1. Corte 5-10 mg de tecido animal ou 1-5 mm de cauda de camundongo em um tubo de centrífuga de 1,5 mL*.
2. Adicione 90 μL de Buffer ML ao tubo de centrífuga acima, agite suavemente para infiltrar completamente a amostra com o lisado e centrifugue brevemente.
3. Incubar a 95°C por 15 min em uma incubadora termostática**.
4. Adicione 10 μL de tampão MT, agite para misturar e termine a lise.
5. Etapa opcional: centrifugação a 12000 rpm por 2 min.
6. Transfira o sobrenadante para um novo tubo de centrífuga e armazene a 4°C ou -20°C ou leve o sobrenadante diretamente para posterior amplificação por PCR.

* O tecido deve ser cortado o máximo possível para permitir que a reação de lise ocorra mais suavemente.

**A incubação a 95°C por 15 min é geralmente suficiente para a maioria das necessidades de PCR. Se uma quantidade maior de DNA for necessária ou a amostra for difícil de lisar, o tempo pode ser estendido para 30 min. O bloco de tecido não precisa ser completamente lisado, e o resíduo pode ser removido em uma etapa de centrifugação subsequente.

Liberação de DNA genômico celular

Após cultivar células transfectadas em uma placa de 48 poços por 3 dias e atingir uma densidade celular de cerca de 70.000 células/poço, remova o meio o mais completamente possível. Em seguida, adicione 90 ul de tampão ML diretamente por poço e pipete cada poço. Transfira tudo para a placa de PCR de 96 poços. Após tratar com uma máquina de PCR a 95 °C por 5-15 min e resfriar, adicione 10 ul de tampão MT e sopre uniformemente e completamente. Usando enzima de alta fidelidade (Cat# 10164) ou enzima Taq, adicione 0,5-2 ul de lisado celular a cada 50 ul do sistema de reação de PCR e execute a PCR.

Figura 1. PCR direta com lisado celular tratado com 19697.

Notas

1. Este produto é somente para uso em pesquisa.
2. Para sua segurança, opere com óculos de proteção, jalecos e luvas descartáveis.
3. Para evitar contaminação cruzada entre amostras, é necessário mergulhar a borda do dispositivo de amostragem ou a parte em contato direto com a amostra em solução de hipoclorito de sódio a 2% após cada amostragem, lavá-la várias vezes e, em seguida, secar o líquido residual com uma toalha de papel limpa antes de usá-la novamente.Para a conveniência do teste, vários dispositivos de amostragem podem ser preparados e limpos uniformemente após o uso para garantir que cada amostra individual seja coletada com um dispositivo de amostragem livre de contaminação.
4. É recomendado usar tecidos animais recém-colhidos. No caso de tecidos congelados por longo prazo, congelamento e descongelamento repetidos devem ser evitados tanto quanto possível, caso contrário, isso levará à degradação do molde e afetará a eficiência da PCR.

Documentos:

Manuais