As esferas de Concanavalina A (ConA) são microesferas de polímero superparamagnético que foram acopladas covalentemente com Concanavalina A (uma lectina vegetal de ligação de manose/glicose isolada das sementes de plantas de cereais) em sua superfície. Essas contas possuir vários características notáveis, incluindo monodispersidade e forte reatividade magnética. Quando Ca²⁺ e Mg²⁺ íons estão presentes, as esferas magnéticas ConA podem separar e purificar de forma eficiente e rápida várias biomoléculas, como polissacarídeos, glicoproteínas e glicolipídios, utilizando a afinidade entre a globulina A ConA e os grupos terminais α-D-manose e α-D-glicose.

As esferas magnéticas ConA oferecem um método conveniente para separar ou fixar células, garantindo perda mínima de células durante as etapas de lavagem subsequentes. Além disso, elas podem ser empregadas para coleta e fixação de núcleos. Além disso, essas esferas encontram utilidade em técnicas inovadoras como CUT & Run e CUT & Tag, que são abordagens revolucionárias usadas em experimentos ChIP-seq.

Em resumo, as esferas magnéticas ConA são ferramentas poderosas para a purificação eficiente de biomoléculas, separação e fixação convenientes de células, coleta de núcleos e aplicação em técnicas experimentais de ponta.

Especificações

Características

Figuras e Tabelas

Tabela 1. As esferas de ConA de Yeasen têm alta taxa de captura. A quantidade de Concanavalina A (ConA) usada em proporção às microesferas foi verificada para garantir a capacidade máxima de ligação, ao mesmo tempo em que previne a agregação excessiva de esferas magnéticas após a ligação celular em experimentos de CUT&Tag. Por exemplo, usar 10 μL de esferas revestidas de ConA pode ligar uma quantidade de células equivalente aos níveis de E7, com uma eficiência de ligação superior a 98%.

Figura 1. As esferas de ConA de Yeasen mostram alta dispersão. No processo de rotulagem das esferas, um selante não biológico foi escolhido para garantir um fechamento eficiente sem ser afetado por variações de lote para lote. Isso garante excelente vedação das esferas magnéticas, preservando sua alta monodispersidade durante o armazenamento de esferas revestidas de ConA, o que é benéfico para a ligação eficiente a moléculas de carboidratos em experimentos subsequentes.

Figura 2. Distribuição do sinal de cromatina CUT&Tag usando esferas Yeasen Con A.

Armazenar

Este produto deve ser armazenado entre 2 e 8 ℃ por 2 anos.

Instruções

As operações seguintes tomam como exemplo a purificação de glicoproteínas ou o isolamento de células. CORTAR&Etiquetar experimentos , veja Yeasen Cat# 12598ES para protocolo.

1. Preparação de tampões

1）Fornecido pelo cliente

1. Materiais necessários não incluídos: suporte magnético, tubos Eppendorf, tubos PCR, suportes magnéticos, termocicladores etc.
2. Equilibrar o Contas em temperatura ambiente por pelo menos 30 min. Ressuspenda as esferas completamente agitando o frasco ou agitando-o.

1. Manuseio de amostras（ tomando células de mamíferos como exemplo ）

1. Preparar células de mamíferos (1,0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ células), centrifugar (4℃，600×g, 3~5 min) e misturar cuidadosamente descartar o sobrenadante.
2. Adicione 140 μL de tampão de ligação, misture bem e ressuspenda as células, centrifugue e colete (4℃, 600×g, 3~5 min), cuidadosamente descartar o sobrenadante.
3. Adicione 90 μL de tampão de ligação, misture bem e ressuspenda as células.
   Cuidado: Células de mamíferos fortemente aderentes podem ser obtidas por digestão parcial usando uma enzima como a tripsina. Para tecidos animais, células vegetais ou células fúngicas, a obtenção de células dispersas ou protoplastos geralmente requer tratamentos especiais adaptados às suas características específicas.

1. Preparar esferas ConA

1. Pipete suavemente as esferas ConA até a suspensão total, coloque 10 μL da suspensão de esferas em um novo tubo de centrífuga de 200 μL.
2. Adicione 40 μL de tampão de ligação, misture bem e deixe no suporte magnético por 1 min e descarte o sobrenadante após as esferas magnéticas serem adsorvidas na parede lateral do tubo de centrífuga.
3. Adicione 10 μL de tampão de ligação, misture bem e ressuspenda as esferas ConA.

1. Encadernação de amostra

1. Adicione a amostra de células preparada às esferas pré-tratadas, pipete suavemente as esferas ressuspensas e incube em um misturador invertido (temperatura ambiente por 30 minutos ou 4℃ durante a noite).
2. Fique em um suporte magnético por 1 minuto, espere as esferas magnéticas serem adsorvidas na parede lateral do tubo de centrífuga e descarte cuidadosamente o sobrenadante.
3. Adicionar 500 μL de tampão de eluição para o complexo de esferas de célula-ConA e Pipete suavemente para ressuspenda as contas, então Fique em um suporte magnético por 1 minuto, espere as esferas magnéticas serem adsorvidas na parede lateral do tubo de centrífuga e descarte cuidadosamente o sobrenadante.
4. Repita o passo 3) por mais três ou quatro vezes.

1. Eluição

1. Para glicoproteínas, adicione 50~250 μL de tampão de eluição, pipete delicadamente as esferas ressuspensas e incube em um misturador invertido (temperatura ambiente por 10~30 min). Após a mistura invertida, deixe em um suporte magnético por 1 min, colete o sobrenadante para um novo tubo de 1,5 mL para a etapa SDS-PAGE ou Western blot.
2. Para células, não há necessidade de eluição.

Notas

1. Equilibrar o ConA contas em temperatura ambiente antes de usar.
2. Evite o congelamento, pois isso pode causar degradação do material do grânulo ou perda de atividade.
3. ConA requer a presença de íons Ca2+ e Mn2+ para ser ativo, portanto reagentes contendo EDTA ou outros quelantes de íons metálicos devem ser evitados durante o experimento.
4. Quando incubadas com células, as esferas ConA podem se agregar, o que é normal e não afeta o uso normal das esferas magnéticas.
5. Este produto é somente para uso em pesquisa.
6. Por favor, opere com jalecos e luvas descartáveis, para sua segurança.

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