Descrição
O gel de poliacrilamida (gel PAGE) é frequentemente usado para eletroforese de proteínas para realizar a separação de proteínas. Esse tipo de gel é geralmente composto de gel concentrado e gel de separação. O primeiro desempenha o papel de concentrar amostras de proteínas, enquanto o último separa proteínas de tamanhos diferentes de acordo com a concentração de monômero de acrilamida e agente de reticulação N,N-metilenobisacrilamida (metilenoacrilamida) usado no gel.
Este kit fornece uma variedade de reagentes necessários para a preparação rápida do gel PAGE. Os usuários só precisam preparar seu próprio equipamento de preparação de gel para preparar o gel, o que simplifica muito o processo de preparação do gel. O gel preparado por este kit só pode ser usado para eletroforese em gel PAGE desnaturante. Esta especificação pode preparar cerca de 125 peças de mini gel (calculado por gel de 0,75 mm de espessura).
Especificações
| Concentração de gel concentrado SDS-PAGE | 4,2% |
| Concentração do gel de separação SDS-PAGE | 12,5% |
| Intervalo de separação (kDa) | 15-60 |
| Sistema de gel | Tris-glicina |
| Concentração de gel concentrado SDS-PAGE | 4,2% |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 20326ES62 (125 mini géis) |
| 20326-A | 12,5% - tampão de gel de separação | 250 mL |
| 20326-B | 12,5% - solução de gel de separação | 250 mL |
| 20326-C | 12,5% - tampão de gel concentrado colorido | 80 mL |
| 20326-D | Solução de gel concentrada a 12,5% | 80 mL |
| 20326-E | Preparar copo de gel | 3 |
Envio e armazenamento
O produto é enviado com bolsa de gelo e pode ser armazenado a 2°C~8°C por 1 ano.
Instruções: É recomendável não configurar muitos pedaços de gel de uma só vez para evitar adicionar a solução superior tarde demais (2-3 pedaços são recomendados no máximo)
1. Selecione a concentração de gel apropriada de acordo com o peso molecular da proteína alvo (consulte a tabela 1)
2. Processo de fabricação do gel (pegue um pedaço de gel Mini de 0,75/1,0/1,5 mm como exemplo)
2.1 Pegue um volume igual de tampão de gel de separação e solução de gel de separação e misture-os, ou seja, pegue 2,0/2,7/4,0 mL das duas soluções, respectivamente.
2.2 Pese 0,1 g de persulfato de amônio e dissolva-o em 1 mL de água deionizada. O cliente precisa comprar o persulfato de amônio por conta própria.
2.3 Adicione 35/45/70 μL de APS à solução misturada na etapa 1 (a quantidade de APS usada pode ser reduzida pela metade se a solidificação for muito rápida) e misture completamente.
2.4 Injete a solução na etapa 2 na placa de vidro para fazer gel. Observe que o gel concentrado deve ser injetado no molde de gel dentro de 2 minutos após o gel de separação ser adicionado, e o vazamento do gel concentrado deve ser lento para evitar a mistura do gel concentrado e do gel de separação. Se o indivíduo achar difícil configurar, ele também pode ser adaptado para configurar o gel concentrado após a vedação com etanol.
2.5 Preparação do gel concentrado: pegue um volume igual de tampão de gel concentrado e solução de gel concentrado, ou seja, pegue 0,5/0,75/1,0 mL das duas soluções respectivamente e então adicione 10/13/18 μL de APS e misture bem.
2.6 Injete-o na placa de vidro para fazer gel e insira os dentes do pente (não use força excessiva para inserir os dentes do pente suavemente).
2.7 Após o gel concentrado ser solidificado por 15 min, os dentes do pente podem ser removidos e usados para eletroforese. Nota: tente usar tampão de eletroforese recém-preparado.
Notas
1. Sugere-se que a voltagem durante a eletroforese esteja entre 100-120 V. Se for necessário acelerar a velocidade da eletroforese, ela pode ser aumentada para 150 V.
2. Antes do enchimento com gel, certifique-se de equilibrar a solução de gel à temperatura ambiente (por exemplo, mantenha-a por vários minutos) para evitar efetivamente a formação de bolhas no gel.
3. O cliente precisa comprar o persulfato de amônio por conta própria. Recomendamos usar o produto com Cat#A3678 da Sigma.
4. A quantidade de solução de persulfato de amônio é apenas para referência, e a quantidade real pode ser aumentada ou diminuída de acordo com hábitos experimentais pessoais e experiência. Adicionar mais persulfato de amônio pode acelerar a velocidade do gel, e vice-versa. A taxa de coagulação do gel PAGE está intimamente relacionada à temperatura e à quantidade de persulfato de amônio.
5. Uma quantidade apropriada de substitutos de TEMED foi adicionada a este produto. Se for necessário acelerar ainda mais a velocidade do gel, uma quantidade apropriada de TEMED pode ser adicionada conforme necessário antes da dispensação.
6. Há uma correlação positiva significativa entre a solidificação do gel e a temperatura. Sob as mesmas condições, quanto maior a temperatura, mais rápida a velocidade de solidificação.
7.O gel concentrado colorido pode produzir uma pequena quantidade de precipitação durante o armazenamento, o que é um fenômeno normal. Sinta-se à vontade para usá-lo.
8. O APS foi armazenado a -20°C. Para maior comodidade, o APS que foi aberto e está em uso pode ser armazenado em 4°C.
9. Use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança.！
10. Somente para uso em pesquisa!
Tabela 1 Faixa de separação de referência do gel SDS-PAGE com diferentes concentrações
| Concentração de gel SDS-PAGE | Intervalo de separação (kDa) |
| 8% | 30-200 |
| 10% | 20-80 |
| 12,5% | 15-60 |
| 15% | 10-45 |
Documentos:
Ficha de dados de segurança
Manuais
Citações e referências:
[1] Liu C, Sun W, Zhu T, et al. O fator de maturação da glia-β induz ferroptose ao prejudicar a degradação autofágica mediada por chaperona de ACSL4 na retinopatia diabética precoce. Redox Biol. 2022;52:102292. doi:10.1016/j.redox.2022.102292(IF:11.799)
[2] Li Y, Qin G, Du J, Yue P, Zhang Y, Hou N. circRNA LDLRAD3 melhora os comportamentos malignos das células NSCLC por meio do eixo miR-20a-5p-SLC7A5 ativando a via de sinalização mTORC1. J Healthc Eng. 2022;2022:2373580. Publicado em 6 de janeiro de 2022. doi:10.1155/2022/2373580(IF:2.682)
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