Descrição
O Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit foi projetado para detectar anticorpos e antígenos associados direta ou indiretamente marcados com peroxidase de raiz-forte (HRP). O princípio do Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit é que proteínas ou ácidos nucleicos foram transferidos para a membrana impressa após eletroforese, e as proteínas alvo na membrana foram ligadas por anticorpo primário e anticorpo secundário marcado com HRP, ou os ácidos nucleicos na membrana foram ligados direta ou indiretamente por sondas marcadas com HRP. Após a lavagem da membrana, a solução de trabalho ECL preparada pelo produto foi usada para incubar a membrana em temperatura ambiente por vários minutos. A membrana impressa foi envolvida com filme plástico e fixada ao cassete de exposição de raios X. Em seguida, o filme de raios X é pressionado na membrana em uma câmara escura e exposto por vários segundos a várias horas. Após o desenvolvimento e a fixação, as bandas de proteína ou ácido nucleico podem ser claramente exibidas no filme de raios X.
Este kit tem um sistema de substrato luminescente exclusivo, reduzindo o fundo de exposição enquanto introduz um novo oxidante melhora muito a estabilidade do kit, permitindo que ele seja estável em temperatura ambiente por até um ano. Além do raio X, a varredura CCD fluorescente também pode ser usada diretamente, principalmente para detecção de WB e sistema de detecção imunológica de quimioluminescência.
Características
Alta sensibilidade e alta relação sinal-ruído, podendo detectar antígenos de grau médio de seleção.
Brilham rápida e intensamente, a faixa de filme impressa pode ser observada sob lâmpada fluorescente.
Especialmente adequado para detectar abundância de alvos em amostras de proteínas convencionais.
Novo oxidante, estável em temperatura ambiente por até um ano.
Aplicações
ELISA de quimioluminescência
Mancha ocidental
Dot Blot-DNA/RNA
Southern blot-DNA
Northern blot-RNA
Especificações
| Concentrações de anticorpos recomendadas | anticorpo primário (concentração de armazenamento líquido 1mg/mL): 1:1000-1:4000 anticorpo secundário (concentração de armazenamento líquido 1mg/mL): 1:1000-1:4000 |
| Duração do sinal | < 2 horas |
| Propriedades do substrato | Substrato químico |
| Tipo de substrato | Substrato HRP (Peroxidase de Rábano) |
| Sensibilidade | antígenos de grau médio de escolha |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 36222ES60 (100 mL) | 36222ES76 (500 mL) |
| 36222-A | ECL aprimorado - Reagente A | 50 mL | 250 mL |
| 36222-B | ECL aprimorado - Reagente B | 50 mL | 250 mL |
Envio e armazenamento
O produto é enviado em temperatura ambiente e pode ser armazenado em temperatura ambiente por um ano. Se não for usado por um longo período, é recomendável armazenar a 2°C~8°C para estender o período de validade.
Observações: 36222-A deve ser armazenado longe da luz!
Instruções (filme de raio X, por exemplo)
1. Eletroforese de rotina, membrana de transferência, anticorpo marcado com HRP ou sonda de ácido nucleico marcada com HRP, membrana de incubação e lavagem.
Observações: A solução luminescente ECL é o substrato colorido do HRP, portanto o sistema de detecção deve ser baseado em anticorpo marcado com enzima HRP ou sonda de ácido nucleico.
2. Ao mesmo tempo em que a membrana foi lavada pela última vez, a solução de trabalho luminescente foi preparada fresca (100-200 μL de solução de trabalho luminescente/cm2 de membrana): pegue o mesmo volume de reagente A e B e misture bem para uso posterior.
Notas: Pegue o Reagente A e o Reagente B, deve usar pontas diferentes. É recomendado usar o fluido de trabalho imediatamente. Ele ainda pode ser usado após algumas horas em temperatura ambiente, mas a sensibilidade é ligeiramente reduzida.
3. Use pinças planas para retirar a membrana, coloque-a em papel de filtro para drenar a loção, não deixe a membrana completamente seca. Mergulhe completamente a membrana na solução de trabalho luminescente, contato suficiente com o fluido de trabalho luminescente. Incube em temperatura ambiente por 1-2 minutos e prepare-se para exposição ao comprimido imediatamente.
4. Pegue a membrana com pinças e coloque-a sobre papel de filtro para drenar o fluido de trabalho luminescente. Mas não lave o fluido luminescente.
5. Coloque um pedaço de filme plástico maior que a membrana na superfície interna do filme de raio-X obscura. Fixe a membrana impressa ao filme plástico, dobre o filme plástico completamente ao redor da membrana impressa e remova a bolha de gás e dobre, pode cortar a borda do excesso de filme plástico. Use papel de filtro para sugar o excesso de fluido de trabalho luminoso. Fixe o filme plástico cobrindo a membrana impressa no obscura com fita, com a faixa de proteína voltada para cima.
6. Um pedaço de filme de raio X foi retirado da câmara escura e colocado na membrana envolvida. O filme foi pressionado e exposto por 30 segundos - 2 minutos. Então o filme foi revelado e fixado.
Observações: O tempo de exposição deve ser ajustado de acordo com a intensidade da exposição.Se o fundo for muito alto, use dois filmes de raio X ao mesmo tempo.
Outros métodos de exposição
Se o uso de fotografia CCD: a membrana pode ser colocada no fluido de trabalho, após a inicialização de acordo com o uso das instruções, remova o filme, tire fotos. Além disso, os parâmetros de medição da máquina podem ser ajustados de acordo com a situação para melhorar a relação sinal-ruído.
Notas
1. Bolhas devem ser evitadas na transferência, selagem e incubação da membrana. Além disso, usar luvas evitará deixar impressões digitais na membrana e a manterá limpa.
2. Exposição prolongada ou proteína excessiva aprofundará o fundo e fará com que a mudança da intensidade da banda perca a relação linear. Subexposição borrará as bandas.
3. Alguns envoltórios plásticos podem extinguir a fluorescência ao envolver a membrana impressa. Envoltórios plásticos de alta qualidade devem ser selecionados.
4. Evite colocar várias membranas na mesma caixa de membrana de lavagem, pois a adsorção ou atrito mútuo pode causar um fundo profundo.
5. A posição e o tamanho das bandas no filme podem ser determinados com precisão usando marcadores de proteína pré-coloridos visíveis e marcadores de exposição de autorradiografia fluorescente.
6. Use um sistema de biotina-avidina e evite usar fechamento de leite, o que pode fazer com que o fundo fique muito alto.
7. Partículas de óxido de metal podem causar manchas granulares na membrana. Evite usar tesouras e pinças enferrujadas. Use pinças planas de plástico.
8. A azida sódica (NaN3) pode inibir a atividade da HRP, se a recuperação da sonda ou anticorpo marcado com HRP deve evitar o uso de NaN3, se necessário, não mais que 0,01%.
9. Este produto não apresenta toxicidade especial, de acordo com tratamento químico comum.
10. Use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança.！
11. Somente para uso em pesquisa!
Documentos:
Ficha de dados de segurança
Manuais
Citações e referências:
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