UltraNuclease, também conhecida como endonuclease não restritiva, nuclease de amplo espectro, é uma endonuclease não específica derivada de Serratia Marcescen, que hidrolisa ligações fosfodiéster internas entre quaisquer nucleotídeos em ácidos nucleicos para produzir oligonucleotídeos 5'-monofosfato de 2-5 bases de comprimento. Ela pode degradar DNA e RNA em várias formas (fita dupla, fita simples, linear, circular, nativa ou desnaturada) sob uma ampla gama de condições (6 M Ureia, 0,1 M Guanidina HCl, 0,4% Triton X-100, 0,1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF) e é amplamente usada para remover ácidos nucleicos de produtos biológicos. UltraNuclease também pode ser removida por métodos correspondentes posteriormente.

Este kit usa o princípio do ensaio imunoenzimático sanduíche de anticorpo duplo (ELISA sanduíche) para detectar os resíduos de UltraNuclease desnaturado e não desnaturado. Primeiro, cubra a microplaca com um anticorpo policlonal de coelho anti-UltraNuclease para formar um anticorpo de fase sólida. Segundo, adicione o padrão UltraNuclease e a amostra de teste à microplaca de anticorpo de fase sólida, depois adicione o anticorpo policlonal Anti-UltraNuclease marcado com biotina e, finalmente, adicione estreptavidina marcada com peroxidase de raiz-forte (SA-HRP) para formar um complexo anticorpo + antígeno + anticorpo-Biotina + SA-HRP. Posteriormente, o substrato TMB foi adicionado ao complexo para observar a reação de cor após a lavagem do complexo. O TMB é convertido em azul sob a catálise da enzima HRP e finalmente convertido em amarelo na presença de ácido, e a tonalidade da cor é positivamente correlacionada com a quantidade de UltraNuclease na amostra.

O intervalo de quantificação de detecção deste kit é de 0,047-3 ng/mL; o limite inferior de detecção é de 23,5 pg/mL.

Recurso

• Altamente sensível: detecta apenas 23 pg/ml de resíduos de UltraNuclease em amostras biológicas em processo e finais.
• Garante precisão: os resíduos do UltraNuclease podem ser detectados com precisão com uma recuperação de 80% a 110%.
• Especificidade: Coopera com o uso do YEASEN UltraNuclease e pode detectar resíduos com precisão.
• Estável: A diferença entre lotes é baixa, a propriedade do kit não é afetada abaixo de 37℃ por 6 dias.
• Fácil coleta de sinal: usando o sistema Biotina-Estreptavidina, o sinal pode ser ampliado de forma estável.
• Kit completo: Todos os componentes principais são fornecidos no kit, o que o torna econômico de usar.

Aplicativo

• Teste de UltraNuclease residual em produtos biológicos

Especificação

Componentes

Envio e armazenamento

O kit UltraNuclease ELISA é enviado com uma bolsa de gelo e pode ser armazenado a 2°C ~8°C. O produto fechado é válido por um ano. Uma vez aberto, o reagente é válido por meio ano. Nunca congele este produto.

Armazenamento dos reagentes preparados:

1. O tampão de lavagem diluído e o tampão de diluição podem ser armazenados a 2°C ~8°C por 1 semana

2. O padrão 36701-C é líquido e armazenado a 2°C ~8°C por 1 ano

3. O anticorpo de detecção preparado e o tampão de parada podem ser armazenados a 2°C ~8°C por 1 mês

Figuras

• Demonstração de especificidade

Figuras 1. A especificidade do kit UltraNuclease ELISA foi mostrada na figura acima.

8 amostras mimetizadas foram estimadas para a reação não específica com os anticorpos no kit. Não houve diferença significativa entre as 8 amostras e a amostra negativa. （*: Diferença significativa da amostra negativa；NS: Nenhuma diferença significativa da amostra negativa）

• Exibição de precisão

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Figuras 2. A precisão do UCF.ME™ UltraNuclease ELISA foi avaliada como acima esquema.

6 duplicados foram testados em cada concentração na curva padrão, e todos os CV% foram menores que 5% (Figura 2A). 3 analistas conduziram o experimento UCF.ME™ UltraNuclease ELISA e os CV% foram menores que 15% (Figura 2B).

• Validação de Precisão

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B)

Figuras 3. A precisão do UCF.ME™ O ELISA UltraNuclease foi analisado conforme o esquema a seguir.

UltraNuclease foi adicionado em soluções de lise celular de 5 μg/mL (HEK293, E. coli, CHO e Vero) independentemente com uma concentração final adicionada de 1,5 ng/mL. A precisão em diferentes amostras de células mostrou-se excelente do que a de outros fornecedores (Figura 3A). UltraNuclease foi adicionado em uma amostra real (fornecida pelo cliente) e é diluído em série 2 vezes de 3 ng/mL para 0,093 ng/mL. A recuperação do pico foi toda entre 80%~110% (Figura 3B).