O RNA fita dupla (dsRNA) surge como um subproduto durante a transcrição in vitro do mRNA. Este subproduto possui propriedades imunogênicas dentro do corpo humano, capaz de provocar uma resposta imune, consequentemente diminuindo os níveis de mRNA. Isso torna o dsRNA uma impureza de processo problemática, necessitando de eliminação completa e controle rigoroso de sua presença residual.

Para abordar essa preocupação, o kit de detecção ELISA de RNA fita dupla (dsRNA) emprega os princípios experimentais de um imunoensaio enzimático (ELISA) de sanduíche de anticorpo duplo para a quantificação de dsRNA residual. O kit não pode ser usado apenas na detecção de dsRNAs regulares, mas também na detecção de peudo UTP, N1-Me-peudo UTP e dsRNAs modificados por 5-OMe-UTP.

O procedimento envolve adicionar um padrão e a amostra de teste em uma placa de enzima (designada como 36717-A) previamente revestida com anticorpos anti-dsRNA. Subsequentemente, anticorpos de detecção de dsRNA marcados com biotina (36717-F) são adicionados em uma forma diluída. Finalmente, Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) é introduzido para criar um complexo compreendendo anticorpos, antígenos, biotina e SA-HRP.

Após a lavagem da placa, a adição da solução cromogênica TMB (36717-K) inicia o desenvolvimento da cor. Sob a influência da catálise da enzima HRP, o TMB passa por uma transformação de incolor para azul, que é então interrompida pela aplicação da solução de parada (36717-L). Por fim, essa transformação resulta em uma tonalidade amarela, cuja intensidade se correlaciona positivamente com a quantidade de dsRNA identificada na amostra.

Este kit tem uma finalidade versátil, permitindo a otimização do processo de purificação do produto biológico, o controle de impurezas durante os estágios intermediários e os testes de liberação para avaliação do produto final.

Pproduto Validação Relatório

Componentes

Envio e armazenamento

O kit é enviado com uma bolsa de gelo e pode ser armazenado a 2°C ~8°C. O produto fechado é válido por um ano. Uma vez aberto, o reagente é válido por meio ano. Nunca congele este produto.

Instruções

1. Preparação antes do experimento

1) Materiais experimentais que não são fornecidos neste kit, mas são necessários para o experimento:

a. Dicas livres de RNase;

b. Tubo de centrífuga livre de RNase;

c. Papel sem poeira;

d. Placa de pré-tratamento de amostra livre de RNase;

e. Água deionizada ou água bidestilada.

2) Instrumentos e equipamentos necessários mas não fornecidos:

a. Leitor de microplacas multifuncional (incluindo modo de detecção de comprimento de onda duplo, cobrindo 450 nm e 650 nm; capaz de usar 450 nm como comprimento de onda de detecção e 650 nm como comprimento de onda de referência);

b. Lavadora de placas totalmente automática, misturador de vórtice, misturador de temperatura constante, centrífuga;

c. Micropipetas de precisão e micropipetas multicanal de diferentes especificações;

d. Temporizador, geladeira 4℃;

e. Agitador de microplacas.

2. Análise de resultados

a. Se o valor de DO da amostra a ser testada exceder o valor de DO no ponto mais alto da curva padrão, a amostra precisará ser diluída e medida novamente.

b. Procedimento de Desenvolvimento de Curva: Crie uma curva padrão plotando as concentrações padrão no eixo x e os valores de absorbância padrão calibrados correspondentes no eixo y. Várias ferramentas de software de desenho e estatística podem auxiliar na geração de curvas padrão e na determinação de concentrações de amostra desconhecidas. É aconselhável empregar um método de ajuste de quatro ou cinco parâmetros para este experimento.Por fim, calcule a quantidade residual de dsRNA na amostra consultando a curva padrão e considerando o fator de diluição da amostra.

c. A curva padrão fornecida é um exemplo ilustrativo (apenas para fins de referência). O conteúdo real da amostra deve ser determinado usando uma curva padrão gerada especificamente para o mesmo padrão experimental.

3. Fluxograma do experimento

Figura 5 Fluxograma do experimento

4. Desempenho do produto

O desempenho deste kit foi totalmente avaliado. Para detalhes, entre em contato com o pessoal técnico para obter o relatório de verificação de desempenho correspondente.

5. Notas

1. Leia atentamente este manual de instruções antes de usar este kit.
2. Utilize este produto dentro do prazo de validade e é proibido misturar reagentes relacionados de lotes diferentes.
3. Todos os reagentes precisam retornar à temperatura ambiente antes do uso.
4. Para sua segurança e saúde, use jaleco e luvas descartáveis.
5. Este produto é apenas para fins de pesquisa científica.
   
   

   Documentos:

   Ficha de dados de segurança

   Manual