Descrição
O reagente de transfecção universal Hieff Trans™ é um reagente de transfecção de lipossomas multiuso, conveniente e eficiente desenvolvido com base na mais recente nanotecnologia. É adequado para a transfecção de DNA, RNA e oligonucleotídeos, incluindo células primárias. Células difíceis de transfectar, incluindo neurônios, têm alta eficiência de transfecção. Sua fórmula exclusiva permite que seja adicionado diretamente ao meio, e a presença de soro não afeta a eficiência da transfecção, o que reduz os danos às células causados pela remoção do soro. Não é necessário remover o complexo de reagente de transfecção de ácido nucleico ou substituí-lo por meio fresco após a transfecção, e o meio fresco também pode ser substituído após 4-6 horas de acordo com o estado nutricional das células.
Componentes do produto
| Número do componente | Componentes | Cat#/Tamanho | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universal-A | 0,5 mL | 1 mL | 5×1 mL |
| 40808-B | Universal-B | 0,5 mL | 1 mL | 5×1 mL |
Envio e armazenamento
O produto é enviado com bolsas de gelo e pode ser armazenado a 2-8℃ por um ano. Não congele!
Cuidados
1) Durante a operação de transfecção, é melhor que a confluência celular atinja 70%-90%, e a densidade específica de plaqueamento é determinada de acordo com a situação das células.
2) A preparação de complexos de transfecção requer diluição de DNA e reagentes de transfecção em meio isento de soro.
3) Não podem ser adicionados antibióticos ao meio durante a transfecção.
4) O uso de DNA ou RNA de alta pureza ajuda a obter maior eficiência de transfecção, e a endotoxina nos plasmídeos é inimiga da transfecção.
5) Conservar entre 2 e 8ºC, tomando cuidado para não abrir a tampa repetidamente por muito tempo.
6) A concentração de ácido nucleico e o volume do reagente devem ser otimizados para o primeiro uso para obter a máxima eficiência de transfecção.
7) Este produto é apenas para fins de pesquisa científica!
Instruções
Transfecção de DNA
[Nota] A quantidade de reagente de transfecção usada é afetada pelo tipo de célula e outras condições experimentais. É recomendado definir um gradiente para otimizar a quantidade ótima de uso pela primeira vez.
1) As células são plaqueadas e a confluência celular deve ser de 70% a 90% no momento da transfecção.
2) Dilua a solução Universal-B com o meio Opti-MEM de acordo com a tabela abaixo e misture suavemente.
3) Dilua o DNA com meio Opti-MEM para obter a pré-mistura de DNA, depois adicione a solução Universal-A e misture suavemente para obter o DNA diluído.
4) Adicione o DNA diluído à solução Universal-B diluída (proporção 1:1).
5) Incube em temperatura ambiente por 5 minutos.
6) Adicione o complexo DNA-lipossomo às células gota a gota e misture delicadamente.
7) Incubar em estufa a 37°C, 5% de CO2 por 48-96 h até a análise da expressão gênica.
Transfecção de siRNA
O procedimento para transfecção de siRNA é o mesmo que para transfecção de DNA, exceto que a solução Universal-A (etapa 3) não precisa ser adicionada ao diluir o siRNA.
Tabela 1 Quantidade de transfecção em diferentes recipientes de cultura de células (apenas para referência)
| Vasos de cultura celular | 96 poços | 24 poços | 6 poços | |
| Células aderentes | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Dilua a solução Universal-B com o meio Opti-MEM de acordo com a tabela abaixo e misture suavemente. | Meio Opti-MEM | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Dilua o DNA com meio Opti-MEM para obter a pré-mistura de DNA, depois adicione a solução Universal-A e misture delicadamente para obter o DNA diluído. | Meio Opti-MEM | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| ADN (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-A (2 μL/μg DNA) | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Adicione o DNA diluído à solução Universal-B diluída (proporção 1:1). | Solução de DNA diluída | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universal-B | 5 μL | 25 μL | 125 μL | |
| Incube em temperatura ambiente por 5 minutos. | ||||
| Complexo DNA-Lipossoma | Componentes (cada poço) | 96 poços | 24 poços | 6 poços |
| Opti-MEM | 10 μL | 50 μL | 250 μL | |
| ADN (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0.5 microgramas | 2,5 μg | |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Universal-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Adicione o complexo DNA-lipossomo às células gota a gota e misture delicadamente. | Complexo DNA-Lipossoma | 10 μL | 50 μL | 250 μL |
[Nota] A quantidade usada na tabela é apenas para referência. A quantidade específica de DNA e solução Universal-B usada deve ser otimizada de acordo com o tipo de célula e outras condições experimentais. É recomendado manter a proporção entre 1:0,5-1:5.
(1) P: O soro pode estar presente ao preparar o complexo reagente de transfecção de ácido nucleico?
A: A presença de soro afetará a formação de lipossomas. É recomendado usar meio sem soro (geralmente meio MEM) ao preparar complexos de reagentes de transfecção de ácido nucleico.
(2) P: O reagente de transfecção pode ser congelado?
R: Este reagente deve ser armazenado entre 2 e 8 °C e deve-se evitar a abertura repetida e prolongada da tampa, pois a abertura prolongada da tampa causará oxidação do lipossomo e afetará a eficiência da transfecção.
(3) P: O que devo observar ao usar o reagente de transfecção universal Hieff Trans™?
R: 1) Durante a operação de transfecção, é melhor que a confluência celular atinja 70%-90%, e a densidade específica de plaqueamento é determinada de acordo com a situação das células.
2) A preparação de complexos de transfecção requer diluição de DNA e reagentes de transfecção em meio isento de soro.
3) Não podem ser adicionados antibióticos ao meio durante a transfecção.
4) O uso de DNA ou RNA de alta pureza ajuda a obter maior eficiência de transfecção, e a endotoxina nos plasmídeos é inimiga da transfecção.
5) Conservar entre 2 e 8ºC, tomando cuidado para não abrir a tampa repetidamente por muito tempo.
6) A concentração de ácido nucleico e o volume do reagente devem ser otimizados para o primeiro uso para obter a maior eficiência de transfecção.
(4) P: É necessário interromper a transfecção?
R: Não há necessidade. Não é necessário remover o complexo de reagente de transfecção de ácido nucleico ou substituir por meio fresco após a transfecção, e o meio fresco também pode ser substituído após 4-6 horas de acordo com o estado nutricional das células.
(5) P: O reagente de transfecção pode ser usado para transfecção de embalagem de vetor viral?
R: Sim.A eficiência do empacotamento do vetor viral não está necessariamente relacionada à eficiência da transfecção, mas também à seleção dos plasmídeos de empacotamento e à proporção entre os plasmídeos.
Pagamento e segurança
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Investigação
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Perguntas frequentes
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